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間質干細胞的培養(yǎng)原理的概述

閱讀:242          發(fā)布時間:2017-9-21

間質干細胞(mesenchymal stem cell,MSC)是一群中胚層來源的具有自我更新和多向分化潛能的多能干細胞,在適宜的培養(yǎng)條件下可分化成多種組織細胞,包括成骨細胞、軟骨細胞、肌肉細胞、脂肪細胞等。

間質干細胞zui早是從骨髓中分離得到的,正常情況下,它在骨髓中的比例非常低,僅占單核細胞的1/105 ~1/104 。骨髓中單個核細胞包括淋巴細胞和單核細胞,其體積、形態(tài)和密度與其他細胞不同,紅細胞和多核白細胞密度較大,為1.090 g/ml左右,而淋巴細胞和單核細胞密度為1.075~1.090 g/ml,血小板為1.030~1.035 g/ml。為此利用一種密度介于1.075~1.092 g/ml之間而近于等滲的溶液(分層液)進行密度梯度離心,使一定密度的細胞按相應密度梯度分布,從而將各種血細胞加以分離。常用的分層液有Ficoll和Percoll兩種。

在骨髓的原代培養(yǎng)物中,除了貼壁生長的成纖維細胞樣的間質干細胞外,還混雜著一些巨噬細胞、單核細胞、造血細胞及紅細胞等,要得到較均一的間質干細胞,必須除去其他細胞。根據(jù)其他細胞的特性,可采用不同的方式排除它們。對于紅細胞,因其不貼壁,可通過換液除去。對于貼壁的單核巨噬細胞,可根據(jù)其黏附能力的不同,通過調整Trypsin/EDTA 的消化時間,保證間質干細胞在短暫的作用時間內與塑料培養(yǎng)瓶壁分離,而巨噬細胞、單核細胞、造血細胞等仍貼附于培養(yǎng)瓶壁,從而使間質干細胞與其他的貼壁細胞得到分離。

在傳代培養(yǎng)中,接種密度是影響體外培養(yǎng)間質干細胞增殖潛能的重要因素。低密度接種時,間質干細胞的增殖能力明顯提高,而誘導細胞分化時則需要較高的細胞密度,這可能與分化時細胞與細胞間的相互作用有關。而在培養(yǎng)過程中,若細胞過度融合會促進其分化趨向,故要保持干細胞未分化狀態(tài),要及時傳代。
規(guī)格:    Multi-class antibodies    Anti-Brucella/Biotin  生物素標記抗布魯氏菌抗體IgG     0.2ml
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規(guī)格:    Multi-class antibodies    Anti-Brucella/FITC  熒光素標記抗布魯氏菌抗體IgG     0.2ml
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規(guī)格:    Multi-class antibodies    Anti-Brucella/HRP  辣根過氧化物酶標記抗布魯氏菌抗體IgG     0.2ml
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規(guī)格:    Multi-class antibodies    Anti-BSA  牛血清白蛋白抗體     0.1ml
規(guī)格:    Multi-class antibodies    Anti-BSA  兔抗牛血清白蛋白抗血清     1ml
規(guī)格:    Multi-class antibodies    Anti-BSEP  膽汁酸鹽輸出泵蛋白抗體     0.2ml
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