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技術(shù)文章

細(xì)胞活性檢測試劑盒實(shí)驗(yàn)步驟

閱讀:760          發(fā)布時(shí)間:2017-7-4

一、人正常組織來源細(xì)胞樣品準(zhǔn)備
1. 準(zhǔn)備好 25cm2細(xì)胞培養(yǎng)瓶或 60mm細(xì)胞培養(yǎng)皿的待測培養(yǎng)細(xì)胞(5 X 106細(xì)胞)
2. 小心加入 xx 毫升預(yù)冷的 SBJ 清理液(試劑 A),覆蓋生長表面
3. 小心抽去清理液
4. 使用細(xì)胞刮脫棒輕柔刮脫細(xì)胞
5. 加入 xx 毫升 SBJ 清理液(試劑 A),混勻細(xì)胞
6. 移入到預(yù)冷的 15 毫升錐形離心管(注意:懸浮細(xì)胞從這一步驟開始)
7. 放進(jìn) 4℃臺式離心機(jī)離心 5 分鐘,速度為 300g
8. 小心抽去上清液
9. 加入 xx 微升S B J   裂解液(試劑 B),充分混勻
10.轉(zhuǎn)移到預(yù)冷的 1.5 毫升離心管
11.強(qiáng)力渦旋震蕩 15 秒
12.置于冰槽里孵育 30 分鐘
13.放進(jìn) 4℃微型臺式離心機(jī)離心 5 分鐘,速度為 16000g(或 13000RPM)
14.小心移取 500 微升上清液到新的預(yù)冷的 1.5 毫升離心管
15.移取 2  微升進(jìn)行蛋白定量測定
16.即刻放進(jìn)-70℃保存或置于冰槽里繼續(xù)后續(xù)操作
二、人正常組織來源細(xì)胞試劑盒測定準(zhǔn)備
1. ELISA試劑盒準(zhǔn)備好待測樣品(例如細(xì)胞裂解萃取液等),置于冰槽里(注意:樣品須澄清)
2. 設(shè)定好分光光度儀(溫度為 30℃):波長為 660nm,并置零
3. 準(zhǔn)備好 5 個(gè) 1.5 毫升離心管,標(biāo)記為 1 至 5 號管
4. 按下表分別加入S B J   陰性液(試劑 D)和 SBJ標(biāo)準(zhǔn)液(試劑 H)到每個(gè)離心管, 混勻.
5. 將 1 至 5 號管放進(jìn)冰槽里備用,避免光照;標(biāo)準(zhǔn)管濃度見下表:
管號    SBJ陰性液(試劑 D)    SBJ 標(biāo)準(zhǔn)液(試劑 H)    測定體系標(biāo)準(zhǔn)磷濃度
1                0                  xx 微升                 20 微摩爾/升
2             xx 微升               xx 微升                 15 微摩爾/升
3             xx 微升               xx 微升                 10 微摩爾/升
4             xx 微升               xx 微升               5 微摩爾/升
5             xx 微升                 0                         0 人正常組織來源細(xì)胞

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