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轉(zhuǎn)化細(xì)胞培養(yǎng)器械的清洗操作步驟
閱讀:519 發(fā)布時間:2017-5-231.轉(zhuǎn)化細(xì)胞清洗
(1)玻璃器皿的清洗
步驟:按浸泡→刷洗→浸酸→沖洗等四步程序進(jìn)行。
①浸泡:新購進(jìn)的玻璃器皿常帶有灰塵,呈弱堿性,或帶有鉛、碑等有害物質(zhì),故先用自來水浸泡過夜、水洗,然后再用2%~5%鹽酸浸泡過夜或煮沸30min,水洗。要領(lǐng):培養(yǎng)用后的玻璃器皿要立即泡入清水中,使下道刷洗工作能順利進(jìn)行。用后的玻璃器皿常帶有大量的蛋白質(zhì)附著,干涸后不易刷洗掉,用后要立即用清水浸泡。
②刷洗:用軟毛刷、洗滌劑,刷去器皿上的雜質(zhì),沖洗晾干。要領(lǐng):浸泡后的玻璃器皿用毛刷沾洗滌劑去器皿上的雜質(zhì)、刷洗次太多,會損害器皿的表面光潔度,洗滌劑有使pH上升的趨勢,所以易選用軟毛刷和洗滌劑。禁止用去污粉。因其中含有砂粒。會嚴(yán)重破壞玻璃器皿的光潔度。特別注意刷洗瓶角部位。酸浸之前要把洗滌劑沖干凈。
③浸酸:將器皿浸泡于清潔液24h,如急用也不得少于4h。清潔液由重鉻酸鉀、濃硫酸及蒸餾水配制而成,具有很強的氧化作用,去污能力很強。經(jīng)清潔液浸泡后,玻璃器皿殘留的末刷洗掉的微量雜質(zhì)可被*清除。
④沖洗:先用自來水充分沖洗,吸管等沖流10min,瓶皿需每瓶灌滿、倒掉,反復(fù)10次以上。然后再經(jīng)蒸餾水漂洗3次,不留死角。晾干或烘干備用。對已用過的器皿,凡污染者必先經(jīng)煮沸30min或放3%鹽酸中浸泡過夜,未污染者可不需滅菌處理,但仍要刷洗、清潔液浸酸過夜,沖洗等。
矽酸鈉洗液
貯存液(×100)
砂酸納80克加偏磷酸鈉9克加熱溶在1000ml水中。使用時用水稀釋100倍,將器皿放入煮沸20min,冷卻后沖洗,再用2%HCl浸泡2h后,自來水沖洗。矽酸鈉洗液較清潔液安全,但價格較貴。
(2)轉(zhuǎn)化細(xì)胞塑料器皿清洗
自來水充分浸泡→沖洗→2%Na0H浸泡過夜→自來水沖洗→2%~5%鹽酸浸泡30min→自來水沖洗→蒸餾水漂洗3次 →晾干→紫外線照射30min(或先用75%酒精浸泡、擦拭,再用紫外線照射30min)。凡能耐熱的塑料器皿,經(jīng)101.3kPa(121.3℃)高壓滅菌。
(3)膠塞等橡膠類處理
新購置者先經(jīng)自來水沖洗→2%NaOH煮沸15min→ 自來水沖洗→2%~5%HCl煮沸15min→ 自來水沖洗5次以上→蒸餾水沖洗5次以上→ 蒸餾水煮沸10min,倒掉沸水讓余熱烘干瓶塞等?;蛘麴s水沖洗晾干,整齊擺放于小型金屬盒內(nèi)經(jīng)101.3kPa高壓滅菌。
(4)金屬器械的清洗
新購進(jìn)的金屬器械常涂有防銹油,先用沾有汽油的紗布擦去油脂,再用水洗凈,zui后用酒精棉球擦拭,晾干。用過的金屬器械應(yīng)先以清水煮沸消毒,再擦拭干凈。使用前以蒸餾水煮沸10min,或包裝好以101.3kPa高壓15min。
(5)除菌濾器的處理
用過的濾器將濾膜去除,用三蒸水充分洗凈殘余液體,置干燥箱中烘干備用。
2.包裝
包裝的目的是防止消毒滅菌后再次遭受污染,所以經(jīng)清洗烤干或晾干的器材,應(yīng)嚴(yán)格包裝后再行消毒滅菌處理。包裝材料常用包裝紙、牛皮紙、硫酸紙、棉布、鋁飯盒、玻璃或金屬制吸管筒、紙繩等。包裝分為局部包裝和全包裝兩類,前者用于較大瓶皿,一般用硫酸紙和牛皮紙將瓶口包扎好;后者適于較小培養(yǎng)瓶皿、吸管、注射器、金屬器械和膠塞等,以下為常用瓶皿、吸管、無菌衣帽等的包裝方法,其它物品可參照處理。
①瓶類:硫酸紙罩以瓶口,外罩二層牛皮紙用繩扎緊。
②小瓶皿、膠塞、刀剪等器械可裝人飯盒,飯盒再以牛皮紙包好,繩扎好。
③吸管、滴管口用脫脂棉塞上(不要太緊或太松)裝人消毒筒內(nèi),濾器、濾瓶、橡皮管等都要用牛皮紙包好瓶口等,外罩一層牛皮紙包好,再用包布包好。
④無菌衣、帽、口罩,均以牛皮紙或包布包好,繩扎好。
3.消毒滅菌
嚴(yán)格的消毒滅菌對保證細(xì)胞培養(yǎng)的成功是極為重要的,其方法分為物理法和化學(xué)法兩類。前者包括干熱、濕熱、濾過、紫外線及射線等,后者主要指使用化學(xué)消毒劑等。
①熱滅菌:玻璃器皿,160~170℃,90~120min或180℃45~60min。
②蒸氣滅菌:用于玻璃器皿、濾器橡膠塞、解剖用具、耐熱塑料器具、受熱不變性的溶液等,不同物品其有效滅菌壓力和時間不同,如培養(yǎng)用液、橡膠制品、塑料器皿等用68kPa(115℃)高壓滅菌10min;布類、玻璃制品、金屬器械等用103kPa(121.3℃)高壓滅菌15~20min。
③濾過除菌:適于含有不耐熱成分的培養(yǎng)基和試劑的除菌,用孔徑為0.22μm微孔濾膜可除去細(xì)菌和霉菌等,用此濾膜過濾兩次,可使支原體達(dá)到某種程度的去除,但不能除去病毒。
④紫外線:紫外線的波長為200~300nm,zui強是在254 nm,6~15平方米zui少一只紫外燈,高度要在2.5m以下,濕度45%~60%,桿菌效果好,球菌次之,霉菌、酵母菌zui差,實驗前應(yīng)不低于30分鐘的照射時間。
⑤熏蒸消毒:當(dāng)遇有細(xì)胞培養(yǎng)出現(xiàn)多次污染,或?qū)嶒炇覂蓚€月一次的常規(guī)消毒,均可用高錳酸鉀5~7.5g,加甲醛(40%)10~15ml,混合放入一開放容器內(nèi),立即可見白色甲醛煙霧,消毒房間需封閉24小時,致少4小時以上。
⑥煮沸消毒:緊密情況時使用,金屬器械和膠蹇在水中煮20~30分鐘,趁熱傾去水分即可使用。
⑦轉(zhuǎn)化細(xì)胞化學(xué)消毒:化學(xué)藥品消毒滅菌法是應(yīng)用能殺死微生物的化學(xué)制進(jìn)行消毒滅菌的方法。實驗室桌面、用具及洗手用的溶液均常用化學(xué)藥品進(jìn)行消毒殺菌。常用的有:2%煤酚皂溶液(來蘇爾)、0.25%新潔爾滅、3~5%甲醛溶液、75%酒精。