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當前位置：北京百奧創(chuàng)新科技有限公司>>代理>> PRS-BCM-CR原代乳腺上皮細胞條件重編程培養(yǎng)基
產(chǎn)品名稱：原代乳腺上皮細胞條件重編程培養(yǎng)基(Human Mammary Epithelial Cell Conditional Reprogramming Medium)
產(chǎn)品說明：原代乳腺上皮細胞條件重編程培養(yǎng)基（Human Mammary Epithelial Cell Conditional Reprogramming Medium）是一種為促進乳腺原代細胞體外生長而設(shè)計的培養(yǎng)基。它是一種無菌的液體混合系統(tǒng)，含有必需和非必需的氨基酸、維生素、有機和無機化合物、激素、生長因子、微量礦物質(zhì)等。該培養(yǎng)基產(chǎn)品基于碳酸氫鹽的緩沖體系，在5%CO2/95%空氣的培養(yǎng)箱中平衡時，pH值為7.4。該培養(yǎng)基的配方可以提供一個理想平衡的營養(yǎng)環(huán)境，選擇性地促進體外人乳腺原代細胞的生長，實現(xiàn)體外培養(yǎng)周期短、成本可控、操作便捷的目的。
產(chǎn)品優(yōu)勢：
(1) 培養(yǎng)成功率高
(2) 體外持續(xù)擴增
(3) 保持腫瘤原始病理特征
(4) 藥敏結(jié)果宇臨床數(shù)據(jù)接近
使用說明
?使用前準備
(1) y射線照射過的NIH-3T3細胞（40Gy輻照）。
(2)15mL無菌離心管、移液器、移液管、無菌槍頭等表面消毒后放入超凈工作臺中紫外照射30min。提前30min從4℃冰箱取出原代細胞培養(yǎng)基平衡至室溫。
?乳腺原代上皮細胞培養(yǎng)
(1)人乳腺組織經(jīng)消化酶消化后，經(jīng)100微米篩網(wǎng)過濾后計數(shù)，按照表1中的細胞數(shù)接種在合適的培養(yǎng)器皿中，加入y 射線輻照后的NIH-3T3細胞（添加滋養(yǎng)細胞數(shù)量如表1和表2所示）。
(2)原代細胞初次接種后2-3天勿動（利于細胞貼壁）），培養(yǎng)過程中若培養(yǎng)基顏色變黃但細胞未長滿時可換半液，鏡下觀察細胞未長滿但3T3細胞已不足時，適量補充y射線輻照后的3T3細胞（一般補加初始數(shù)目的一半））。
注∶以上表格僅供參考。倍增時間>48小時則定義為增殖較慢的細胞∶對干增殖較快細胞.可以綜合倍增時間、接種器皿的規(guī)格以及培養(yǎng)周期來估算接種的細胞數(shù)量。具體實驗需按具體情況對待。
?乳腺原代上皮傳代
(1)鏡下觀察細胞形成克隆，且匯合度達到80~90%時即可傳代。
(2)培養(yǎng)箱中取出細胞，棄舊培養(yǎng)液，0.25%胰酶洗滌30秒后吸盡，再加入適量TrypLE™ Express酶 (Gibco#12605010)，37℃孵育，10-20min后拿出輕拍培養(yǎng)瓶/板側(cè)面，顯微鏡下觀察細胞消化情況。
(3)待消化至細胞變圓并開始脫落時用含10%胎牛血清的DMEM培養(yǎng)基終止消化，并將細胞轉(zhuǎn)移至離心管中， 300g, 5min離心。
(4)棄上清，以1-2mL本細胞培養(yǎng)基產(chǎn)品重懸細胞，活細胞計數(shù)，將細胞懸液按適合的細胞密度接種于培養(yǎng)瓶/ 板。
(5)之后,加入丫射線輻照后的NIH-3T3細胞(不同規(guī)格培養(yǎng)瓶/板底面積、接種原代細胞數(shù)量、添加滋養(yǎng)細胞 數(shù)量如表1和表2所示)，在培養(yǎng)板/孔中補加乳腺原代上皮細胞培養(yǎng)基至所需體積，輕輕揺晃混勻，表面消毒后置培養(yǎng)箱，37℃、5% CO2條件培養(yǎng)其他步驟同上。
注意事項：
1.本產(chǎn)品在使用前需平衡至室溫。
2.本產(chǎn)品中含有胎牛血清和原代細胞專用抗生素，如無特別需要不用額外再添加血清和雙抗，可直接使用。
3.為保持本產(chǎn)品的理想使用效果，不宜將其過夜放置于室溫或較高的溫度環(huán)境中。
4.請于保質(zhì)期內(nèi)使用本產(chǎn)品，超出保質(zhì)期，必須放棄使用。
5.原代細胞初次接種時會貼壁較慢和貼壁不牢，若無必要，盡量減少取出觀察的次數(shù)，建議2-3天一次。
6.傳代消化時切記不要消化過度，對細胞造成損傷，影響細胞狀態(tài)。
7.接種細胞時注意細胞密度，不可過稀或過密。
8.使用產(chǎn)品時應(yīng)注意無菌操作，避免污染。
9.本產(chǎn)品僅用于科研用途，不能用于體外診斷。
