詳細(xì)介紹
反應(yīng)五要素:
B組輪狀病毒(HRV-B)核酸檢測(cè)試劑盒方法參加PCR反應(yīng)的物質(zhì)主要有五種即引物、酶、dNTP、模板和Mg2+
引物:引物是PCR特異性反應(yīng)的關(guān)鍵,PCR 產(chǎn)物的特異性取決于引物與模板DNA互補(bǔ)的程度。理論上,只要知道任何一段模板DNA序列, 就能按其設(shè)計(jì)互補(bǔ)的寡核苷酸鏈做引物,利用PCR就可將模板DNA在體外大量擴(kuò)增。設(shè)計(jì)引物應(yīng)遵循以下原則:
①引物長(zhǎng)度: 15-30bp,常用為20bp左右。
②引物擴(kuò)增跨度: 以200-500bp為宜,特定條件下可擴(kuò)增長(zhǎng)至10kb的片段。
③引物堿基:G+C含量以40-60%為宜,G+C太少擴(kuò)增效果不佳,G+C過(guò)多易出現(xiàn)非特異條帶。ATGC隨機(jī)分布,避免5個(gè)以上的嘌呤或嘧啶核苷酸的成串排列。
④避免引物內(nèi)部出現(xiàn)二級(jí)結(jié)構(gòu),避免兩條引物間互補(bǔ),特別是3'端的互補(bǔ),否則會(huì)形成引物二聚體,產(chǎn)生非特異的擴(kuò)增條帶。
⑤引物3'端的堿基,特別是末及倒數(shù)第二個(gè)堿基,應(yīng)嚴(yán)格要求配對(duì),以避免因末端堿基不配對(duì)而導(dǎo)致PCR失敗。
⑥引物中有或能加上合適的酶切位點(diǎn), 被擴(kuò)增的靶序列有適宜的酶切位點(diǎn), 這對(duì)酶切分析或分子克隆很有好處。
⑦引物的特異性:引物應(yīng)與核酸序列數(shù)據(jù)庫(kù)的其它序列無(wú)明顯同源性。
引物量:每條引物的濃度0.1~1umol或10~100pmol,以低引物量產(chǎn)生所需要的結(jié)果為好,引物濃度偏高會(huì)引起錯(cuò)配和非特異性擴(kuò)增,且可增加引物之間形成二聚體的機(jī)會(huì)。
使用及效果:
將壓碎的一小片重量約在100 mg 左右的植物種子(約1/4 黃豆大?。┗蛑睆郊s為0.5-0.7 cm(或面積相當(dāng)?shù)钠渌螤睿┑闹参锶~片直接加到新鮮配制的0.1 mL溶液A 中,95℃保溫10-15 分鐘,加入0.1 mL 溶液B,混勻,直接取上清液(相當(dāng)于PCR 體積的1/10)作為模板進(jìn)行PCR。剩余樣品可以放4℃保存。
產(chǎn)品名稱 | 規(guī)格 | 分類 |
B組輪狀病毒(HRV-B)核酸檢測(cè)試劑盒方法 | 48T | PCR檢測(cè)試劑盒 |
樣本采集、存放及運(yùn)輸:
1、樣本采集:各類型樣本按照常規(guī)方法采集;
2、存放:樣本在2~8℃條件下保存應(yīng)不超過(guò)72h,-70℃以下可長(zhǎng)期保存,但應(yīng)避免反復(fù)凍融(zui多凍融3次);
3、運(yùn)輸:采用泡沫箱加冰密封進(jìn)行運(yùn)輸。
普通PCR反應(yīng)流程:
?
自備物品:
B組輪狀病毒(HRV-B)核酸檢測(cè)試劑盒方法15毫升錐形離心管:用于制備樣品的容器
比色皿:用于比色的容器
96孔酶標(biāo)板:用于比色的容器
分光光度儀:用于比色分析
酶標(biāo)儀:用于微量樣品比色分析
儲(chǔ)存條件:
14℃或-20℃
準(zhǔn)備物品
清理液(A) 毫升
染色液(t B) 微升
稀釋液(C) 毫升
溶解液(tD) 毫升
產(chǎn)品說(shuō)明書 1份
3-甲并呋喃分子式:132.16分子量: C9H8O英文名稱:3- methyl benzene andCAS號(hào):21535-97-7
雙(五甲環(huán)戊二)鈷分子式:329.39分子量: C20H30Co 10*英文名稱:Double (five methyl cyclopentadienyl) cobaltCAS號(hào):74507-62-3
妥曲珠利砜英文名稱:Toltrazuril sulfoneCAS號(hào):69004-04-2分子式:457.38分子量: C18H14F3N3O6S
漢黃芩甙英文名稱:Han ChineseCAS號(hào):分子式:分子量:
英文名稱:SibutramineCAS號(hào):106650-56-0分子式:473.58分子量: C28H27NO4S
1,2-二甲咪唑分子式:96.13分子量: C5H8N2英文名稱:1,2- twoCAS號(hào):1739-84-0
3,4-二氟甲分子式:128.12分子量: C7H6F2英文名稱:3,4- two fCAS號(hào):2927-34-6
硫錳分子式:87分子量: MnS英文名稱:Manganese sulfideCAS號(hào):18820-29-6
絞股藍(lán)皂苷英文名稱:GypenosidesCAS號(hào):hgj分子式:768.99分子量:C41H68O13
3-氯酐分子式:182.56分子量: C8H3ClO3英文名稱:3- chloro phthalic anhydrideCAS號(hào):117-21-5
(S)-1,2,3,4-四氫-1-異喹啉分子式:209.29分子量: C15H15N英文名稱:(S) -1,2,3,4- four, -1-CAS號(hào):118864-75-8
B組輪狀病毒(HRV-B)核酸檢測(cè)試劑盒方法LXR alpha 肝臟X受體抗體 0.1ml
Phospho-Numb (Ser276) 磷酸化膜相關(guān)蛋白Numb抗體 0.1ml
OSTM1 骨硬化病相關(guān)跨膜蛋白1抗體 0.2ml
CTR1/Calcitonin receptor 降鈣素受體抗體 0.1ml
MAPK13/SAPK4/p38delta 絲裂原活化蛋白激酶13抗體 0.2ml
CCL5/RANTES T細(xì)胞特異性趨化因子抗體 0.1ml
NLRP9 富含亮氨酸重復(fù)結(jié)構(gòu)域蛋白9抗體 0.2ml
NT-3 proprotein 神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子-3前蛋白抗體 0.1ml
KAT3B/Ep300 轉(zhuǎn)錄接頭蛋白EP300抗體 0.2ml
GPX1 谷胱甘肽過(guò)氧化酶1 0.2ml
Rabbit Anti-Guinea pig IgM/HRP 辣根過(guò)氧化物酶標(biāo)記的兔抗豚鼠IgM 0.1ml
DPY19L2 DPY19L2蛋白抗體 0.2ml