詳細(xì)介紹
反應(yīng)五要素:
豬藍(lán)耳病病毒通用型(PRRSV-U)核酸檢測(cè)試劑盒圖片參加PCR反應(yīng)的物質(zhì)主要有五種即引物、酶、dNTP、模板和Mg2+
引物:引物是PCR特異性反應(yīng)的關(guān)鍵,PCR 產(chǎn)物的特異性取決于引物與模板DNA互補(bǔ)的程度。理論上,只要知道任何一段模板DNA序列, 就能按其設(shè)計(jì)互補(bǔ)的寡核苷酸鏈做引物,利用PCR就可將模板DNA在體外大量擴(kuò)增。設(shè)計(jì)引物應(yīng)遵循以下原則:
①引物長(zhǎng)度: 15-30bp,常用為20bp左右。
②引物擴(kuò)增跨度: 以200-500bp為宜,特定條件下可擴(kuò)增長(zhǎng)至10kb的片段。
③引物堿基:G+C含量以40-60%為宜,G+C太少擴(kuò)增效果不佳,G+C過(guò)多易出現(xiàn)非特異條帶。ATGC隨機(jī)分布,避免5個(gè)以上的嘌呤或嘧啶核苷酸的成串排列。
④避免引物內(nèi)部出現(xiàn)二級(jí)結(jié)構(gòu),避免兩條引物間互補(bǔ),特別是3'端的互補(bǔ),否則會(huì)形成引物二聚體,產(chǎn)生非特異的擴(kuò)增條帶。
⑤引物3'端的堿基,特別是末及倒數(shù)第二個(gè)堿基,應(yīng)嚴(yán)格要求配對(duì),以避免因末端堿基不配對(duì)而導(dǎo)致PCR失敗。
⑥引物中有或能加上合適的酶切位點(diǎn), 被擴(kuò)增的靶序列有適宜的酶切位點(diǎn), 這對(duì)酶切分析或分子克隆很有好處。
⑦引物的特異性:引物應(yīng)與核酸序列數(shù)據(jù)庫(kù)的其它序列無(wú)明顯同源性。
引物量:每條引物的濃度0.1~1umol或10~100pmol,以低引物量產(chǎn)生所需要的結(jié)果為好,引物濃度偏高會(huì)引起錯(cuò)配和非特異性擴(kuò)增,且可增加引物之間形成二聚體的機(jī)會(huì)。
使用及效果:
將壓碎的一小片重量約在100 mg 左右的植物種子(約1/4 黃豆大?。┗蛑睆郊s為0.5-0.7 cm(或面積相當(dāng)?shù)钠渌螤睿┑闹参锶~片直接加到新鮮配制的0.1 mL溶液A 中,95℃保溫10-15 分鐘,加入0.1 mL 溶液B,混勻,直接取上清液(相當(dāng)于PCR 體積的1/10)作為模板進(jìn)行PCR。剩余樣品可以放4℃保存。
產(chǎn)品名稱 | 規(guī)格 | 分類 |
豬藍(lán)耳病病毒通用型(PRRSV-U)核酸檢測(cè)試劑盒圖片 | 48T | PCR檢測(cè)試劑盒 |
樣本采集、存放及運(yùn)輸:
1、樣本采集:各類型樣本按照常規(guī)方法采集;
2、存放:樣本在2~8℃條件下保存應(yīng)不超過(guò)72h,-70℃以下可長(zhǎng)期保存,但應(yīng)避免反復(fù)凍融(zui多凍融3次);
3、運(yùn)輸:采用泡沫箱加冰密封進(jìn)行運(yùn)輸。
普通PCR反應(yīng)流程:
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自備物品:
豬藍(lán)耳病病毒通用型(PRRSV-U)核酸檢測(cè)試劑盒圖片15毫升錐形離心管:用于制備樣品的容器
比色皿:用于比色的容器
96孔酶標(biāo)板:用于比色的容器
分光光度儀:用于比色分析
酶標(biāo)儀:用于微量樣品比色分析
儲(chǔ)存條件:
14℃或-20℃
準(zhǔn)備物品
清理液(A) 毫升
染色液(t B) 微升
稀釋液(C) 毫升
溶解液(tD) 毫升
產(chǎn)品說(shuō)明書 1份
4-環(huán)己啉分子式:分子量:英文名稱:4- cyclohexyl morpholineCAS號(hào):
氧嗪酸鉀分子式:195.17分子量: C4H2KN3O4英文名稱:Potassium oxygenCAS號(hào):2207-75-2
2-羥-4-甲吡分子式:109.13分子量: C6H7NO英文名稱:2- hydroxy -4- methyl pyridineCAS號(hào):13466-41-6
疊氮磷酸二酯(DPPA)分子式:275.2分子量: C12H10N3O3P; (C6H5英文名稱:Two phenyl phosphate (DPPA)CAS號(hào):26386-88-9
1-吡唑分子式:144.17分子量: C9H8N2英文名稱:1- phenylCAS號(hào):1126-00-7
偶氮二甲酰二分子式:252.31分子量: C12H20N4O2英文名稱:Two azo two benzoyl piperidineCAS號(hào):10465-81-3
木香烴內(nèi)酯英文名稱:CostunolideCAS號(hào):553-21-9分子式:232.32分子量:C15H20O2
泰妥拉唑分子式:368.39分子量: C16H17N4NaO3S英文名稱:Tai, ThaiCAS號(hào):113712-98-4
萘英文名稱:NaphthaleneCAS號(hào):91-20-3分子式:128.17分子量: C10H8
羅卡因英文名稱:RopivacaineCAS號(hào):84057-95-4分子式:274.4分子量: C17H26N2O
嘧肟草英文名稱:Ether of theCAS號(hào):168088-61-7分子式:609.59分子量: C32H27N5O8
豬藍(lán)耳病病毒通用型(PRRSV-U)核酸檢測(cè)試劑盒圖片IRF7 干擾素調(diào)節(jié)因子7抗體 0.1ml
E.coli O6 大腸桿菌埃希桿菌O6抗體(腸致病性大腸桿菌O6) 0.2ml
ADCK3/CABC1 伴侶蛋白bc1同源復(fù)合體抗體 0.2ml
CD36/PAS-4 CD36抗體 0.1ml
RIP1 受體相互作用蛋白激酶1抗體 0.2ml
CK42 細(xì)胞角蛋白42 0.1ml
LEU5/RFP2 白血病相關(guān)蛋白5抗體 0.2ml
MTLR 胃動(dòng)素受體抗體 0.1ml
IL-4 (human) 白介素4抗體(人) 0.1ml
Phospho-FoxO3a (Ser253) 磷酸化叉頭蛋白3A抗體 0.1ml
Rabbit Anti-Mink IgG/PE PE標(biāo)記的兔抗水貂IgG 0.1ml
MKKS/BBS6 巴德-畢德氏綜合征蛋白BBS6抗體 0.2ml