詳細介紹
即用型高保真PCR試劑盒原理是由一對引物介導,能在動植物體外對特定基因(DNA)片斷進行快速酶促擴增,經(jīng)過n個熱循環(huán)擴增,擴增產(chǎn)物中所含特定基因數(shù)是原始模板數(shù)的(1+E)n(0<E<1,擴增效率=倍,使得檢測擴增產(chǎn)物中的特定基因成為可能。
特異性強
PCR反應的特異性決定因素為:
?、僖锱c模板DNA特異正確的結合;
?、趬A基配對原則;
?、跿aq DNA聚合酶合成反應的忠實性;
④靶基因的特異性與保守性。
產(chǎn)品名稱 | 規(guī)格 | 貨號 |
即用型高保真PCR試劑盒 | 1.5mL | GOY-P4021 |
組成及試劑配制:
1、酶標板:一塊(96孔)
2、 標準品(凍干品): 2瓶,請臨用前15分鐘內(nèi)配制。每瓶以樣品稀釋液稀釋至0.5ml,蓋好后室溫靜置大約10分鐘,同時反復顛倒/搓動以助溶解,其濃度為200 U/L,然后做系列倍比稀釋(注:不要直接在板中進行倍比稀釋),分別配制成200 U/L,100 U/L,50 U/L,25 U/L,12.5 U/L,6.25 U/L,3.12 U/L,樣品稀釋液直接作為空白孔 0 U/L。如配制100 U/L標準品:取0.3ml (不要少于0.3ml )200 U/L的上述標準品加入含有0.3ml樣品稀釋液的Eppendorf管中,混勻即可,其余濃度以此類推。
3、 樣品稀釋液:1×20ml。
4、 檢測稀釋液A:1×10ml。
5、 檢測稀釋液B:1×10ml。
特點 :
本試劑盒可用于檢測食品或其他材料中是否有的成分?,F(xiàn)代食品加工工藝改變了食材原有的味道、氣味、色澤、紋理和質(zhì)地等特性,因此傳統(tǒng)的感官鑒別技術已經(jīng)無法對食材的真?zhèn)芜M行準確的鑒定。同時部分食材還有致敏性,因此基于基因檢測的快速靈敏的食材來源檢測技術將對食品監(jiān)管和安全提供重要的保障。本產(chǎn)品就是為滿足這一需求根據(jù) PCR 原理開發(fā)的產(chǎn)品,它具有下列特點:
1. 一管式操作,用戶只需要提供樣品即可。
2. 根據(jù)大豆熱休克蛋白基因保守區(qū)域設計引物,能專一性檢測出樣品中的大豆成分,但不能檢測其他非大豆成分。
3. 快速,整個檢測過程(按一個樣品計)所需時間僅為 2.0 小時。
4. 只需要普通 PCR 儀和凝膠電泳儀,無需配置貴重儀器設備。
5. 對混合樣品中大豆成分的檢測下限為 0.1%,對樣品中大豆成分的核酸檢測下限為 1.0ng/μL。
6. 本只能用于科研,足夠 50 次 40uL 體系的常規(guī) PCR。
特點優(yōu)勢:
1. 特異性:所有產(chǎn)品使用的引物均經(jīng)過詳盡的生物信息學分析,經(jīng)過GenBank及自建龐大數(shù)據(jù)庫的比對,確保所用的每一條引物均為種屬或血清型特異的基因序列區(qū)段,可實現(xiàn)對細菌種屬及血清型的特異檢測,特異性均達到100%。
2. 重現(xiàn)性:該系列所有產(chǎn)品均經(jīng)過大量實驗菌株的驗證,重現(xiàn)性為100%。
3. 靈敏性:該系列產(chǎn)品可實現(xiàn)對檢測菌的高靈敏檢測,當樣品中細菌的濃度達到103cfu/ml時,可實現(xiàn)對其的直接檢測,無需繁瑣的增菌過程。
4. 實用性:檢測范圍廣,涵蓋了對人體危害較為嚴重的17種呼吸道及腸道致病菌,可實現(xiàn)對臨床樣品及其他環(huán)境取樣的快速檢測,整個檢測過程為3-4個小時。
5. 優(yōu)勢1:序列資源豐富,除GenBank公布的序列外,公司還進行了大量菌株的序列破譯,從理論上保證所選引物具有良好的保守性和特異性。
6. 優(yōu)勢2:該系列試劑盒均經(jīng)過大量的保守性及特異性實驗驗證,憑借公司擁有的豐富的菌種資源,每一種檢測試劑盒均經(jīng)過了20余種標準菌株和臨床菌株的保守性驗證及40余種近緣標準菌株和臨床菌株的特異性驗證,確保在使用過程中不會出現(xiàn)任何的假陽性及假陰性報告結果。
反應五要素:
參加PCR反應的物質(zhì)主要有五種即引物、酶、dNTP、模板和Mg2+
引物:引物是PCR特異性反應的關鍵,PCR 產(chǎn)物的特異性取決于引物與模板DNA互補的程度。理論上,只要知道任何一段模板DNA序列, 就能按其設計互補的寡核苷酸鏈做引物,利用PCR就可將模板DNA在體外大量擴增。設計引物應遵循以下原則:
①引物長度: 15-30bp,常用為20bp左右。
②引物擴增跨度: 以200-500bp為宜,特定條件下可擴增長至10kb的段。
③引物堿基:G+C含量以40-60%為宜,G+C太少擴增效果不佳,G+C過多易出現(xiàn)非特異條帶。ATGC隨機分布,避免5個以上的嘌呤或嘧啶核苷酸的成串排列。
④避免引物內(nèi)部出現(xiàn)二級結構,避免兩條引物間互補,特別是3'端的互補,否則會形成引物二聚體,產(chǎn)生非特異的擴增條帶。
⑤引物3'端的堿基,特別是末及倒數(shù)*個堿基,應嚴格要求配對,以避免因末端堿基不配對而導致PCR失敗。
⑥引物中有或能加上合適的酶切位點, 被擴增的靶序列有適宜的酶切位點, 這對酶切分析或分子克隆很有好處。
⑦引物的特異性:引物應與核酸序列數(shù)據(jù)庫的其它序列無明顯同源性。
引物量:每條引物的濃度0.1~1umol或10~100pmol,以*引物量產(chǎn)生所需要的結果為好,引物濃度偏高會引起錯配和非特異性擴增,且可增加引物之間形成二聚體的機會。
natural resistance-associated macrophage protein 2,NRAMP2 ELISA kit雞ACTH elisa檢測試劑盒Xanthyletin
natural resistance-associated macrophage protein 1,NRAMP-1 ELISA kit雞ACV-A elisa檢測試劑盒Diversoside
activating transcription factor-1,ATF-1 ELISA Kit雞ACV-AB elisa檢測試劑盒Chalepensin
SOX5 ELISA Kit雞ACV-B elisa檢測試劑盒Hydramicromelin D
SOX4 ELISA Kit雞ADM elisa檢測試劑盒7-Prenyloxycoumarin
TGFBR3 ELISA Kit雞ALT elisa檢測試劑盒Ammajin
transforming growth factor β receptor 2,TGF-βR2 ELISA kit雞AmAC-1 elisa檢測試劑盒Hydramicromelin B
TGFBR1 ELISA Kit雞ANG-Ⅰ elisa檢測試劑盒Demethylluvangetin
TSC22 ELISA Kit雞ANG-Ⅱ elisa檢測試劑盒3-(1,1-Dimethylallyl)-8-hydroxy-7-methoxycoumarin
Transforming Growth factor β3,TGF-β3 ELISA kit雞AP-1 elisa檢測試劑盒Matsukaze-lactone
TGF β2 ELISA Kit雞AST elisa檢測試劑盒5,6,7-Trimethoxycoumarin
TGF-β1 ELISA kit雞AT-Ⅲ elisa檢測試劑盒Thamnosmonin
TGF-α ELISA Kit雞ATGL elisa檢測試劑盒Hymexelsin
transglutaminase 2C polypeptide,TGM2 ELISA Kit雞BF elisa檢測試劑盒6′′-O-β-D-Apiofuranosylapterin
HLA-DQA2 ELISA Kit雞bFGF elisa檢測試劑盒6-(3-Methyl-2-oxobutyroyl)-7-methoxycoumarin
Cyclin Dependent Kinase 5,CDK5 ELISA Kit雞BSA elisa檢測試劑盒6-Hydroxycoumurrayin
即用型高保真PCR試劑盒RPS6KB1(Ser441+Thr444) 磷酸化核糖體S6蛋白激酶抗體規(guī)格 0.1ml
RPS6KB1(Ser434) 磷酸化核糖體S6蛋白激酶抗體規(guī)格 0.1ml
RPS6KB1(Ser427) 磷酸化核糖體S6蛋白激酶抗體規(guī)格 0.1ml
RPS6KB1(Ser421) 磷酸化核糖體S6蛋白激酶抗體規(guī)格 0.1ml
RPS6KB1(Ser417) 磷酸化核糖體S6蛋白激酶抗體規(guī)格 0.1ml
RPS6KA1(Thr359) 磷酸化絲氨酸/蘇氨酸激酶p90RSK蛋白抗體規(guī)格 0.1ml
RPS6KA1(Thr348) 磷酸化磷酸化絲氨酸/蘇氨酸激酶p90RSK蛋白抗體規(guī)格 0.1ml
使用方法:
注:所有試劑使用前需*解凍,混合均勻,6,000rpm離心數(shù)秒后使用。
1.樣本處理(樣本處理區(qū))
待檢樣本的核酸提取可采用病毒RNA提取試劑盒或自動化核酸提取儀等,具體提取方法請參照相關說明書;陽性質(zhì)控品及陰性質(zhì)控品無需提取,可直接使用。
2. 擴增試劑準備(PCR前準備區(qū))
取N個(N=陰性質(zhì)控品+待檢樣本+陽性質(zhì)控品)PCR反應管,每管分別加入FMD RT-PCR反應液19μl、RT-PCR酶1 μl (也可根據(jù)每頭份用量計算N+1份FMD RT-PCR反應液、RT-PCR酶所需總量,兩者混勻離心后分裝20 μl至單個PCR反應管)。
組分每頭份用量FMD RT-PCR反應液19 μlRT-PCR酶。
1 .將所有PCR反應管于6,000rpm離心30s,轉(zhuǎn)移至樣本處理區(qū)。
2.加樣(樣本處理區(qū))
3.在上述的PCR反應管中分別加入待檢樣本RNA提取物、陰性質(zhì)控品和陽性質(zhì)控品各5 μl,蓋緊管蓋,于6,000rpm離心10s,轉(zhuǎn)移至擴增區(qū)。