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詳細介紹
實驗要點及說明：
1．本方法適用于貼壁細胞培養(yǎng)，而不適用于懸浮細胞培養(yǎng)，懸浮細胞可使用滴片法；
2．所使用的蓋玻片應(yīng)該為優(yōu)質(zhì)玻璃，并經(jīng)過鉻酸洗液處理；
3．蓋玻片非常薄，易碎，取放蓋玻片時動作要輕；
4．如果需要更多生長狀態(tài)一致的細胞，可以使用較大的培養(yǎng)皿，但不宜過大，以避免培養(yǎng)液的浪費和增加污染機率；
5．如果細胞貼壁生長能力較差，可將蓋玻片在0.5%多聚賴氨酸溶液中浸泡5-10分鐘并自然晾干。
產(chǎn)品屬性：
商品介紹：
名稱 大鼠表皮角質(zhì)形成細胞 2.組織來源：皮膚組織 3.產(chǎn)品規(guī)格：5×105cells/T25細胞培養(yǎng)瓶 4.細胞簡介： 大鼠表皮角質(zhì)形成細胞分離自皮膚組織；表皮位于動物皮膚的外層，由胚胎時期外胚層形成，具有抗摩擦和抗損傷的作用。表皮是皮膚的淺層結(jié)構(gòu)，由復層扁平上皮構(gòu)成。從基底層到表面可分為五層，即基底層、棘層、顆粒層、透明層和角質(zhì)層。表皮角質(zhì)形成細胞是一種能合成角質(zhì)蛋白的上皮細胞，此類細胞為表皮的主體，由表皮深層始逐漸增殖、分化，并在成為角化的角質(zhì)細胞中，細胞核與細胞器*消失，細胞亦失去生理功能而脫落。未脫落部分對機體尚有保護作用，故不必在洗擦身體時用力搓擦，使其過早脫失。表皮角質(zhì)形成細胞主要分布于表皮基底層，在上皮程序性死亡后，細胞產(chǎn)生角化并移向表皮。體外培養(yǎng)的表皮角化細胞容易導致終末分化，不能充分增殖。角質(zhì)形成細胞最終產(chǎn)生角質(zhì)蛋白，在其向角質(zhì)細胞演變過程中，一般可以分為四層，即基底層、棘層、顆粒層以及角質(zhì)層。有人把前三層或前二層稱為生發(fā)層或馬爾匹基層。此外，在某些部位，特別在掌跖部位，角質(zhì)層下方還可見到透明層。 5.方法簡介： 實驗室分離的大鼠表皮角質(zhì)形成層細胞先中性蛋白酶消化、后胰蛋白酶-膠原酶混合消化法制備而來，細胞總量約為5×10?cells/瓶。 6.質(zhì)量檢測： 實驗室分離的大鼠表皮角質(zhì)形成細胞經(jīng)PCK免疫熒光鑒定，純度可達90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細菌、酵母和真菌等。 7.培養(yǎng)信息： 包被條件鼠尾膠原Ⅰ（2-5μg/cm2） 培養(yǎng)基含FBS、生長添加劑、Penicillin、Streptomycin等 產(chǎn)品貨號CM-R094 換液頻率每2-3天換液一次 生長特性貼壁 細胞形態(tài)上皮細胞樣 傳代特性可傳1-2代 消化液0.25%胰蛋白酶 培養(yǎng)條件氣相：空氣，95%；CO2，5% |
冷凍保存細胞之方法？
冷凍保存方法一: 冷凍管置于4℃ 30~60 分鐘→ （-20 ℃30 分鐘*） → -80 ℃16~18 小時（或隔夜） → 液氮槽vaporphase 長期儲存。
冷凍保存方法二: 冷凍管置于已設(shè)定程序之可程序降溫機中每分鐘降1-3 ℃ 至–80 ℃ 以下， 再放入液氮槽vapor phase長期儲存。*-20 ℃不可超過1 小時， 以防止冰晶過大，造成細胞大量死亡，亦可跳過此步驟直接放入-80℃ 冰箱中，惟存活率稍微降低一些。
實驗報告：
一、分離與培養(yǎng)：
1、無菌條件下，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織，然后用PBS將此組織塊清洗2次，將成1mm3左右大?。?/span>
2、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型膠原酶），混懸10s，置37℃條件下消化10min，之后用滴管吹打制成單細胞懸液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置；
3、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液，混懸10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置，重復此步驟2-3次，直至組織*被消化；
4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過濾細胞消化液，1200r/min 離心10min，棄去上清，沉淀細胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸，接種于25cm2培養(yǎng)瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；
5、差速貼壁1h后，吸出培養(yǎng)基，按實驗需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng)；
二、免疫熒光鑒定：
1、待心房肌細胞生長至80%融合時，棄去培養(yǎng)基，用溫育的PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細胞15min；
2、PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后在4℃條件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；
3、PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后在室溫條件下，用4% BSA封閉細胞30min；
4、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗，然后將其放在4℃冰箱中孵育細胞過夜；
5、PBS沖洗細胞3次，每次10min，按1：150的比例稀釋抗α-actin的二抗， 37℃條件下放置1h；
6、用PBS沖洗3次，每次10min，在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。
食蟹猴 CD80 基因全長ORF克隆
食蟹猴 TNFSF13B 基因全長ORF克隆
食蟹猴 ATP1B3 / LOC716682 基因全長ORF克隆
食蟹猴 IL2RA 基因全長ORF克隆
食蟹猴 CD300LB 基因全長ORF克隆
食蟹猴 IFITM1 基因全長ORF克隆
食蟹猴 TLR8 基因全長ORF克隆
食蟹猴 TLR9 基因全長ORF克隆
食蟹猴 ENPEP 基因全長ORF克隆
食蟹猴 TLR3 基因全長ORF克隆
大鼠表皮角質(zhì)形成細胞0.156-10 ng/mL 人干擾素誘導,雙激活蛋白激滯留RNA(EIF2AK2)ELISA試劑盒
大腸菌群培養(yǎng)基（日本） 英文名稱：Coliform Medium（Japan） 產(chǎn)品規(guī)格：250g
硫乙醇酸鹽流體培養(yǎng)基管 英文名稱： 產(chǎn)品規(guī)格：7.5ml*20支/盒
0.312-20 ng/mL ELISA Kit for Human Myogenin
15.6-1000 pg/mL 番茄特定基因序列PG)核酸檢測試劑盒(PCR-熒光探針法)
0.156-10 ng/mL ELISA Kit for Human Solute carrier family 2, facilitated glucose transporter member 3
0.156-10 ng/mL ELISA Kit for Human Proteasome subunit beta type-9
V-J瓊脂培養(yǎng)基（USP） 英文名稱：Vogeljohnson Agar Medium 產(chǎn)品規(guī)格：250g
GC瓊脂 英文名稱：GC Agar Base 產(chǎn)品規(guī)格：250g
0.156-10 ng/mL 病毒H9亞型(AIV-H9)核酸檢測試劑盒(PCR-熒光探針法)
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