實(shí)驗(yàn)要點(diǎn)及說(shuō)明:
1.本方法適用于貼壁細(xì)胞培養(yǎng),而不適用于懸浮細(xì)胞培養(yǎng),懸浮細(xì)胞可使用滴片法;
2.所使用的蓋玻片應(yīng)該為優(yōu)質(zhì)玻璃,并經(jīng)過(guò)鉻酸洗液處理;
3.蓋玻片非常薄,易碎,取放蓋玻片時(shí)動(dòng)作要輕;
4.如果需要更多生長(zhǎng)狀態(tài)一致的細(xì)胞,可以使用較大的培養(yǎng)皿,但不宜過(guò)大,以避免培養(yǎng)液的浪費(fèi)和增加污染機(jī)率;
5.如果細(xì)胞貼壁生長(zhǎng)能力較差,可將蓋玻片在0.5%多聚賴氨酸溶液中浸泡5-10分鐘并自然晾干。
產(chǎn)品屬性:
商品介紹:
冷凍保存細(xì)胞之方法?
冷凍保存方法一: 冷凍管置于4℃ 30~60 分鐘→ (-20 ℃30 分鐘*) → -80 ℃16~18 小時(shí)(或隔夜) → 液氮槽vaporphase 長(zhǎng)期儲(chǔ)存。
冷凍保存方法二: 冷凍管置于已設(shè)定程序之可程序降溫機(jī)中每分鐘降1-3 ℃ 至–80 ℃ 以下, 再放入液氮槽vapor phase長(zhǎng)期儲(chǔ)存。*-20 ℃不可超過(guò)1 小時(shí), 以防止冰晶過(guò)大,造成細(xì)胞大量死亡,亦可跳過(guò)此步驟直接放入-80℃ 冰箱中,惟存活率稍微降低一些。
實(shí)驗(yàn)報(bào)告:
一、分離與培養(yǎng):
1、無(wú)菌條件下,取出1-3d 齡SD大鼠心房組織,然后用PBS將此組織塊清洗2次,將成1mm3左右大??;
2、往組織塊中加入4 mL酶消化液(0.1% 和0.1% I型膠原酶),混懸10s,置37℃條件下消化10min,之后用滴管吹打制成單細(xì)胞懸液,自然沉淀并收集上清,用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置;
3、剩下的組織再加入3~4mL酶消化液,混懸10s,置37℃消化10 min后,按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置,重復(fù)此步驟2-3次,直至組織*被消化;
4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過(guò)濾細(xì)胞消化液,1200r/min 離心10min,棄去上清,沉淀細(xì)胞用含有10% FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸,接種于25cm2培養(yǎng)瓶,放置于37℃ ,5%CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng);
5、差速貼壁1h后,吸出培養(yǎng)基,按實(shí)驗(yàn)需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng);
二、免疫熒光鑒定:
1、待心房肌細(xì)胞生長(zhǎng)至80%融合時(shí),棄去培養(yǎng)基,用溫育的PBS沖洗細(xì)胞2次,每次10min,然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細(xì)胞15min;
2、PBS沖洗細(xì)胞2次,每次10min,然后在4℃條件下,用0.1%Triton X-100透膜15min;
3、PBS沖洗細(xì)胞2次,每次10min,然后在室溫條件下,用4% BSA封閉細(xì)胞30min;
4、按1: 100的比例稀釋?duì)?actin一抗,然后將其放在4℃冰箱中孵育細(xì)胞過(guò)夜;
5、PBS沖洗細(xì)胞3次,每次10min,按1:150的比例稀釋抗α-actin的二抗, 37℃條件下放置1h;
6、用PBS沖洗3次,每次10min,在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。
狗 KIM1 / TIM1 基因全長(zhǎng)ORF克隆
pCMV / hygro (C端FLAG標(biāo)簽) 陽(yáng)性對(duì)照載體
pCMV / hygro (C端Myc標(biāo)簽) 陽(yáng)性對(duì)照載體
pCMV / hygro (C端His標(biāo)簽) 陽(yáng)性對(duì)照載體
pCMV / hygro (C端HA標(biāo)簽) 陽(yáng)性對(duì)照載體
pCMV / hygro (FLAG標(biāo)簽) 陰性對(duì)照載體
pCMV / hygro (Myc標(biāo)簽) 陰性對(duì)照載體
pCMV / hygro (His標(biāo)簽) 陰性對(duì)照載體
pCMV / hygro (HA標(biāo)簽) 陰性對(duì)照載體
pCMV / hygro (無(wú)標(biāo)簽) 陰性對(duì)照載體
大鼠視網(wǎng)膜微血管周細(xì)胞15.6-1000 pg/mL ELISA Kit for Human Calumenin
葡萄糖天門冬素培養(yǎng)基 英文名稱:Glucose Asparagine Medium 產(chǎn)品規(guī)格:250g
3.12-200 ng/mL 人細(xì)胞間粘附分子4(ICAM4)ELISA試劑盒
0.156-10 ng/mL ELISA Kit for Human UDP-glucuronosyltransferase 1-6
0.156-10 ng/mL 人組織內(nèi)轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子β結(jié)合蛋白2(LTBP2)ELISA試劑盒
含0.2%可溶性淀粉的BCP脫脂奶粉平板計(jì)數(shù)培養(yǎng)基 英文名稱:BCP Medium with 0.2% Soluble Starch 產(chǎn)品規(guī)格:250g
15.6-1000 pg/mL ELISA Kit for Human Vascular endothelial growth factor B
3.12-200 ng/mL 人腎上腺髓質(zhì)素(ADM)ELISA試劑盒
0.156-10 ng/mL ELISA Kit for Human Phosphoenolpyruvate carboxykinase [GTP], mitochondrial
78-5000 pg/mL 人鱗狀細(xì)胞癌抗原1(SCCA1)ELISA試劑盒