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詳細(xì)介紹
產(chǎn)品屬性：
產(chǎn)品名稱 | 規(guī)格 | 貨號(hào) |
| 大鼠腦膜成纖維細(xì)胞 | 5×10?Cells/T25培養(yǎng)瓶 | GOY-01X1385 |
商品介紹：
名稱 大鼠腦膜成纖維細(xì)胞 2.組織來源：腦膜組織 3.產(chǎn)品規(guī)格：5×105cells/T25細(xì)胞培養(yǎng)瓶 4.細(xì)胞簡(jiǎn)介： 大鼠腦膜細(xì)胞分離自腦膜組織；腦膜是顱骨與腦間的隔膜，一共有三層，由外向內(nèi)為硬腦膜、蛛網(wǎng)膜和軟腦膜。硬腦膜，是一厚而堅(jiān)韌的雙層膜，外層是顱骨內(nèi)面的骨膜，僅疏松地附于顱蓋，特別是在枕部與顳部附著更疏松，稱為骨膜層。蛛網(wǎng)膜是一層半透明的膜，位于硬腦膜深部，其間有潛在性腔隙為硬腦膜下隙。軟腦膜是緊貼于腦表面的一層透明薄膜，并伸入溝裂。在腦室壁的某些部位，軟腦膜及其血管與室管膜上皮共同形成脈絡(luò)組織。脈絡(luò)組織中的血管反復(fù)分支成叢，突入腦室形成脈絡(luò)叢。腦膜細(xì)胞圍繞著大腦，參與中樞神經(jīng)系統(tǒng)的正常發(fā)育，能穩(wěn)定腦軟膜表面的細(xì)胞外基質(zhì)、組織放射狀膠質(zhì)細(xì)胞網(wǎng)絡(luò)和小腦皮層分層結(jié)構(gòu)。 5.方法簡(jiǎn)介： 實(shí)驗(yàn)室分離的大鼠腦膜成纖維細(xì)胞采用混合膠原酶消化法結(jié)合差速貼壁法制備而來，細(xì)胞總量約為5×10?cells/瓶。 6.質(zhì)量檢測(cè)： 實(shí)驗(yàn)室分離的大鼠腦膜成纖維細(xì)胞經(jīng)Vimentin免疫熒光鑒定，純度可達(dá)90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細(xì)菌、酵母和真菌等。 7.培養(yǎng)信息： 培養(yǎng)基含FBS、生長(zhǎng)添加劑、Penicillin、Streptomycin等 產(chǎn)品貨號(hào)CM-R301 換液頻率每2-3天換液一次 生長(zhǎng)特性貼壁 細(xì)胞形態(tài)成纖維細(xì)胞樣 傳代特性可傳3代左右；1-2代以內(nèi)狀態(tài)最佳 消化液0.25%胰蛋白酶 培養(yǎng)條件氣相：空氣，95%；CO2，5% |
冷凍保存細(xì)胞之方法？
冷凍保存方法一: 冷凍管置于4℃ 30~60 分鐘→ （-20 ℃30 分鐘*） → -80 ℃16~18 小時(shí)（或隔夜） → 液氮槽vaporphase 長(zhǎng)期儲(chǔ)存。
冷凍保存方法二: 冷凍管置于已設(shè)定程序之可程序降溫機(jī)中每分鐘降1-3 ℃ 至–80 ℃ 以下， 再放入液氮槽vapor phase長(zhǎng)期儲(chǔ)存。*-20 ℃不可超過1 小時(shí)， 以防止冰晶過大，造成細(xì)胞大量死亡，亦可跳過此步驟直接放入-80℃ 冰箱中，惟存活率稍微降低一些。
實(shí)驗(yàn)要點(diǎn)及說明：
1．本方法適用于貼壁細(xì)胞培養(yǎng)，而不適用于懸浮細(xì)胞培養(yǎng)，懸浮細(xì)胞可使用滴片法；
2．所使用的蓋玻片應(yīng)該為優(yōu)質(zhì)玻璃，并經(jīng)過鉻酸洗液處理；
3．蓋玻片非常薄，易碎，取放蓋玻片時(shí)動(dòng)作要輕；
4．如果需要更多生長(zhǎng)狀態(tài)一致的細(xì)胞，可以使用較大的培養(yǎng)皿，但不宜過大，以避免培養(yǎng)液的浪費(fèi)和增加污染機(jī)率；
5．如果細(xì)胞貼壁生長(zhǎng)能力較差，可將蓋玻片在0.5%多聚賴氨酸溶液中浸泡5-10分鐘并自然晾干。
實(shí)驗(yàn)報(bào)告：
一、分離與培養(yǎng)：
1、無菌條件下，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織，然后用PBS將此組織塊清洗2次，將成1mm3左右大??；
2、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型膠原酶），混懸10s，置37℃條件下消化10min，之后用滴管吹打制成單細(xì)胞懸液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置；
3、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液，混懸10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置，重復(fù)此步驟2-3次，直至組織*被消化；
4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過濾細(xì)胞消化液，1200r/min 離心10min，棄去上清，沉淀細(xì)胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸，接種于25cm2培養(yǎng)瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；
5、差速貼壁1h后，吸出培養(yǎng)基，按實(shí)驗(yàn)需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng)；
二、免疫熒光鑒定：
1、待心房肌細(xì)胞生長(zhǎng)至80%融合時(shí)，棄去培養(yǎng)基，用溫育的PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細(xì)胞15min；
2、PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后在4℃條件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；
3、PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后在室溫條件下，用4% BSA封閉細(xì)胞30min；
4、按1: 100的比例稀釋?duì)?actin一抗，然后將其放在4℃冰箱中孵育細(xì)胞過夜；
5、PBS沖洗細(xì)胞3次，每次10min，按1：150的比例稀釋抗α-actin的二抗， 37℃條件下放置1h；
6、用PBS沖洗3次，每次10min，在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。
小鼠 Art4 / CD297 細(xì)胞裂解液 (陽性對(duì)照) (變性)
CD20 / MS4A1 (aa 213-297) 細(xì)胞裂解液 (陽性對(duì)照) (變性)
/ 恒河猴 HER4 / ErbB4 細(xì)胞裂解液 (陽性對(duì)照) (變性)
/ 恒河猴 HER4 / ErbB4 細(xì)胞裂解液 (陽性對(duì)照) (變性)
小鼠 FCGRT & B2M Heterodimer 細(xì)胞裂解液 (陽性對(duì)照) (變性)
大鼠 Ninjurin-1 / NINJ1 細(xì)胞裂解液 (陽性對(duì)照) (變性)
小鼠 TWSG1 細(xì)胞裂解液 (陽性對(duì)照) (變性)
小鼠 CD40L / CD154 / TNFSF5 細(xì)胞裂解液 (陽性對(duì)照) (變性)
GDNF 細(xì)胞裂解液 (陽性對(duì)照) (變性)
大鼠 B2M / Beta-2-microglobulin 細(xì)胞裂解液 (陽性對(duì)照) (變性)
大鼠腦膜成纖維細(xì)胞2,6-二酸 98%7-頭孢霉烷酸 98%Anti-CD133 Anti-gen/FITC 熒光素標(biāo)記造血干抗原CD133抗體IgG
3-乙氧羰基苯酸 97%6-青霉烷酸 98%Anti-OX40/CD134/TNFRSF4/FITC 熒光素標(biāo)記CD134抗體IgG
4-乙氧羰基苯酸 97%肉桂酸芐酯 98%Anti-IL-7Ra/CD127/PE 熒光素PE標(biāo)記兔抗人、大、小鼠、馬、兔白介素-7受體a抗體IgG
3-乙氧基苯酸 98%反式2-溴肉桂酸 98%Anti-CD137/TNFRSF9/FITC 熒光素標(biāo)記CD137抗體IgG
2-乙基苯酸 98%α-溴肉桂 98%Anti-CD133 antigen/PE 熒光素藻紅蛋白標(biāo)記兔抗人、大、小鼠和果蠅CD133抗體IgG
3-乙氧羰基苯酸頻哪酯 97% 4-溴代苯乙烯, 包含100 - 500 ppm 4-叔丁基鄰苯二酚阻聚劑, 95%Anti-HVEM/TNFRSF14/FITC 熒光素標(biāo)記腫瘤壞死因子受體超家族成員14抗體IgG
4-(乙基硫代)苯酸 98%3-溴-4-羥基苯甲 97%Anti-Syndecan-1/CD138/FITC 熒光素標(biāo)記多配體聚糖抗體IgG
乙基酸 98%4-溴-2-氟肉桂酸 98%Anti-CD141/FITC 熒光素標(biāo)記凝血調(diào)節(jié)蛋白抗體IgG
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