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詳細介紹
冷凍保存細胞之方法？
冷凍保存方法一: 冷凍管置于4℃ 30~60 分鐘→ （-20 ℃30 分鐘*） → -80 ℃16~18 小時（或隔夜） → 液氮槽vaporphase 長期儲存。
冷凍保存方法二: 冷凍管置于已設(shè)定程序之可程序降溫機中每分鐘降1-3 ℃ 至–80 ℃ 以下， 再放入液氮槽vapor phase長期儲存。*-20 ℃不可超過1 小時， 以防止冰晶過大，造成細胞大量死亡，亦可跳過此步驟直接放入-80℃ 冰箱中，惟存活率稍微降低一些。
產(chǎn)品屬性：
產(chǎn)品名稱 | 規(guī)格 | 貨號 |
| 大鼠神經(jīng)干細胞 | 5×10?Cells/T25培養(yǎng)瓶 | GOY-01X1117 |
商品介紹：
名稱 大鼠神經(jīng)干細胞 2.組織來源：腦組織 3.產(chǎn)品規(guī)格：5×105cells/T25細胞培養(yǎng)瓶 4.細胞簡介： 大鼠神經(jīng)干細胞分離自腦皮層組織；大腦分左右兩個半球，大腦皮質(zhì)（灰質(zhì)）覆蓋著每個大腦半球的大部分，它是神經(jīng)元胞體集中的地方。內(nèi)部則是由神經(jīng)纖維或髓鞘構(gòu)成的白質(zhì)。每一個半球都有三個面，即外側(cè)面（約占整個皮質(zhì)面積的1/3）、內(nèi)側(cè)面和底面（占2/3的面積）；半球表面有很多深淺不等的溝或裂，溝或裂之間的隆起叫回，它們大大增加了大腦的表面積；大腦外側(cè)面重要的溝、裂有大腦外側(cè)裂、頂枕裂和中央溝。由于三溝裂之界隔，使大腦皮質(zhì)組分為額葉、頂葉、顳葉、枕葉四大部分。神經(jīng)干細胞具有分化為神經(jīng)神經(jīng)元、星形膠質(zhì)細胞和少突膠質(zhì)細胞的能力，能自我更新，并足以提供大量腦組織細胞的細胞群。神經(jīng)干細胞是一類具有分裂潛能和自更新能力的母細胞，它可以通過不對等的分裂方式產(chǎn)生神經(jīng)組織的各類細胞。需要強調(diào)的是，在腦脊髓等所有神經(jīng)組織中，不同的神經(jīng)干細胞類型產(chǎn)生的子代細胞種類不同，分布也不同。神經(jīng)干細胞作為干細胞的一種，它具有其它所有干細胞的基本特征：具有自我維持和自我更新能力，具有多種分化潛能，具有分化為本系統(tǒng)大部分類型細胞的能力，這種自我更新和分化潛能可以維持相當長的時間甚至終生，對損傷和疾病具有反應能力。神經(jīng)干細胞在疾病、損傷狀態(tài)下具有增殖、遷移，并向神經(jīng)細胞、星形膠質(zhì)細胞和少突膠質(zhì)細胞分化的能力，已成為神經(jīng)系統(tǒng)損傷修復和再生研究的熱點，體外建立穩(wěn)定的神經(jīng)干細胞培養(yǎng)模型是其基礎(chǔ)和臨床應用的前提。神經(jīng)干細胞在培養(yǎng)3-4d后，可形成神經(jīng)球，神經(jīng)球在培養(yǎng)基中呈懸浮生長，予以更換半量培基，1周后用吸管輕柔吹打球形克隆成為小的神經(jīng)球和單細胞懸液，將部分細胞接種到新的培養(yǎng)瓶中，2×105個細胞/瓶，每7-10d傳代1次，每隔3d離心更換半量培養(yǎng)基1次，培養(yǎng)條件不變。 5.方法簡介： 實驗室分離的大鼠神經(jīng)干細胞采用胰蛋白酶消化后差速貼壁，結(jié)合神經(jīng)干細胞專用培養(yǎng)基培養(yǎng)篩選制備而來，總量約為5×10?cells/瓶。 6.質(zhì)量檢測： 實驗室分離的大鼠神經(jīng)干細胞經(jīng)Nestin免疫熒光鑒定，純度可達90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細菌、酵母和真菌等。 7.培養(yǎng)信息： 培養(yǎng)基含B-27 Supplement、EGF、bFGF、Penicillin、Streptomycin等 產(chǎn)品貨號CM-R139 換液頻率每2-3天換液一次 生長特性懸浮 細胞形態(tài)球形 傳代特性可傳2-3代 消化液0.25%胰蛋白酶，Accutase 培養(yǎng)條件氣相：空氣，95%；CO2，5% |
實驗要點及說明：
1．本方法適用于貼壁細胞培養(yǎng)，而不適用于懸浮細胞培養(yǎng)，懸浮細胞可使用滴片法；
2．所使用的蓋玻片應該為優(yōu)質(zhì)玻璃，并經(jīng)過鉻酸洗液處理；
3．蓋玻片非常薄，易碎，取放蓋玻片時動作要輕；
4．如果需要更多生長狀態(tài)一致的細胞，可以使用較大的培養(yǎng)皿，但不宜過大，以避免培養(yǎng)液的浪費和增加污染機率；
5．如果細胞貼壁生長能力較差，可將蓋玻片在0.5%多聚賴氨酸溶液中浸泡5-10分鐘并自然晾干。
實驗報告：
一、分離與培養(yǎng)：
1、無菌條件下，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織，然后用PBS將此組織塊清洗2次，將成1mm3左右大??；
2、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型膠原酶），混懸10s，置37℃條件下消化10min，之后用滴管吹打制成單細胞懸液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置；
3、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液，混懸10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置，重復此步驟2-3次，直至組織*被消化；
4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過濾細胞消化液，1200r/min 離心10min，棄去上清，沉淀細胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸，接種于25cm2培養(yǎng)瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；
5、差速貼壁1h后，吸出培養(yǎng)基，按實驗需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng)；
二、免疫熒光鑒定：
1、待心房肌細胞生長至80%融合時，棄去培養(yǎng)基，用溫育的PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細胞15min；
2、PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后在4℃條件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；
3、PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后在室溫條件下，用4% BSA封閉細胞30min；
4、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗，然后將其放在4℃冰箱中孵育細胞過夜；
5、PBS沖洗細胞3次，每次10min，按1：150的比例稀釋抗α-actin的二抗， 37℃條件下放置1h；
6、用PBS沖洗3次，每次10min，在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。
小鼠 IL22RA2 基因全長ORF克隆 (表達載體), 無標簽
Integrin beta5 基因全長ORF克隆 (表達載體), 無標簽
類缺陷病毒Ⅰ型 HIV-1 (group M, CRF07_BC) GP120 基因全長ORF克隆 (表達載體), 無標簽
HNF4A 轉(zhuǎn)錄變體3 基因全長ORF克隆 (表達載體), 帶FLAG標簽
B7-H1 / PD-L1 基因全長ORF克隆 (表達載體), 帶Myc標簽
POT1 基因全長ORF克隆 (表達載體), 無標簽
VSIG4 基因全長ORF克隆 (表達載體), 帶FLAG標簽
ITGAV 基因全長ORF克隆 (表達載體), 無標簽
雪貂 IFNG 基因全長ORF克隆 (表達載體), 帶His標簽
AMD1 基因全長ORF克隆 (表達載體), 帶FLAG標簽
大鼠神經(jīng)干細胞0.156-10 ng/mL ELISA Kit for Human Keratin, type II cytoskeletal 1
0.156-10 ng/mL ELISA Kit for Human Protein O-linked-mannose beta-1, 2-N-acetylglucosaminyltransferase 1
0.312-20 ng/mL ELISA Kit for Human B-lymphocyte antigen CD19
0.156-10 ng/mL ELISA Kit for Human Granzyme A
芽孢桿菌培養(yǎng)基 英文名稱：Bacillus Megatherium Medium 產(chǎn)品規(guī)格：250g
平板計數(shù)瓊脂（PCA） 英文名稱：Plate Count Agar 產(chǎn)品規(guī)格：250g
15.6-1000 pg/mL ELISA Kit for Human Interferon-induced transmembrane protein 10
乳糖發(fā)酵培養(yǎng)基 英文名稱：Lactose Broth 產(chǎn)品規(guī)格：250g
0.156-10 ng/mL 人解偶聯(lián)蛋白2(UCP-2)ELISA試劑盒
胰蛋白胨大豆肉湯 英文名稱： 產(chǎn)品規(guī)格：250g
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