詳細(xì)介紹
冷凍保存細(xì)胞之方法?
冷凍保存方法一: 冷凍管置于4℃ 30~60 分鐘→ (-20 ℃30 分鐘*) → -80 ℃16~18 小時(或隔夜) → 液氮槽vaporphase 長期儲存。
冷凍保存方法二: 冷凍管置于已設(shè)定程序之可程序降溫機中每分鐘降1-3 ℃ 至–80 ℃ 以下, 再放入液氮槽vapor phase長期儲存。*-20 ℃不可超過1 小時, 以防止冰晶過大,造成細(xì)胞大量死亡,亦可跳過此步驟直接放入-80℃ 冰箱中,惟存活率稍微降低一些。
產(chǎn)品屬性:
產(chǎn)品名稱 | 規(guī)格 | 貨號 |
大鼠外周血樹突狀細(xì)胞(DC細(xì)胞) | 5×10?Cells/T25培養(yǎng)瓶 | GOY-01X1241 |
商品介紹:
名稱 大鼠外周血樹突狀細(xì)胞(DC細(xì)胞)
|
實驗要點及說明:
1.本方法適用于貼壁細(xì)胞培養(yǎng),而不適用于懸浮細(xì)胞培養(yǎng),懸浮細(xì)胞可使用滴片法;
2.所使用的蓋玻片應(yīng)該為優(yōu)質(zhì)玻璃,并經(jīng)過鉻酸洗液處理;
3.蓋玻片非常薄,易碎,取放蓋玻片時動作要輕;
4.如果需要更多生長狀態(tài)一致的細(xì)胞,可以使用較大的培養(yǎng)皿,但不宜過大,以避免培養(yǎng)液的浪費和增加污染機率;
5.如果細(xì)胞貼壁生長能力較差,可將蓋玻片在0.5%多聚賴氨酸溶液中浸泡5-10分鐘并自然晾干。
實驗報告:
一、分離與培養(yǎng):
1、無菌條件下,取出1-3d 齡SD大鼠心房組織,然后用PBS將此組織塊清洗2次,將成1mm3左右大??;
2、往組織塊中加入4 mL酶消化液(0.1% 和0.1% I型膠原酶),混懸10s,置37℃條件下消化10min,之后用滴管吹打制成單細(xì)胞懸液,自然沉淀并收集上清,用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置;
3、剩下的組織再加入3~4mL酶消化液,混懸10s,置37℃消化10 min后,按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置,重復(fù)此步驟2-3次,直至組織*被消化;
4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過濾細(xì)胞消化液,1200r/min 離心10min,棄去上清,沉淀細(xì)胞用含有10% FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸,接種于25cm2培養(yǎng)瓶,放置于37℃ ,5%CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng);
5、差速貼壁1h后,吸出培養(yǎng)基,按實驗需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng);
二、免疫熒光鑒定:
1、待心房肌細(xì)胞生長至80%融合時,棄去培養(yǎng)基,用溫育的PBS沖洗細(xì)胞2次,每次10min,然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細(xì)胞15min;
2、PBS沖洗細(xì)胞2次,每次10min,然后在4℃條件下,用0.1%Triton X-100透膜15min;
3、PBS沖洗細(xì)胞2次,每次10min,然后在室溫條件下,用4% BSA封閉細(xì)胞30min;
4、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗,然后將其放在4℃冰箱中孵育細(xì)胞過夜;
5、PBS沖洗細(xì)胞3次,每次10min,按1:150的比例稀釋抗α-actin的二抗, 37℃條件下放置1h;
6、用PBS沖洗3次,每次10min,在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。
甲型流感 H9N2 (A/Hong Kong/1073/99) 神經(jīng) (Neuraminidase / NA) 細(xì)胞裂解液 (陽性對照) (變性)
甲型流感 H1N1 (A/Ohio/07/2009) 血凝素HA1 (Hemagglutinin) 細(xì)胞裂解液 (陽性對照) (變性)
KIAA1279 桿狀病毒-昆蟲細(xì)胞裂解液 (陽性對照) (變性)
BRCA2 / BCCIP 桿狀病毒-昆蟲細(xì)胞裂解液 (陽性對照) (變性)
PILR-alpha / PILRA 細(xì)胞裂解液 (陽性對照) (變性)
PILR-alpha / PILRA 細(xì)胞裂解液 (陽性對照) (變性)
PRELP 細(xì)胞裂解液 (陽性對照) (變性)
PRELP 細(xì)胞裂解液 (陽性對照) (變性)
甲型流感 H2N2 (A/Japan/305/1957) 血凝素HA1 (Hemagglutinin) 細(xì)胞裂解液 (陽性對照) (變性)
/ 恒河猴 HER4 / ErbB4 桿狀病毒-昆蟲細(xì)胞裂解液 (陽性對照) (變性)
大鼠外周血樹突狀細(xì)胞(DC細(xì)胞)四己基氫銨 用于離子色譜, ≥99.0% (T)N,N'-二環(huán)己基碳二亞 99.0%Anti-CD74/MHC II CD74抗體
N,N,N',N'-四甲基-1,3-二 99%N,N'-琥珀酰亞基碳酸酯 98%Anti-CLEC2D/OCIL CLEC2D蛋白抗體
N,N,N',N'-四甲基-1,3-二 97%4-二甲吡 99%Anti-CD80/B7-1 激分子B7-1蛋白抗體
2,4,5-三氯苯 分析標(biāo)準(zhǔn)品,99%4,4'-二甲氧基三苯基氯 98%Anti-CD71/TFR 轉(zhuǎn)鐵蛋白受體抗體
1,2,3,4-四氯苯 分析標(biāo)準(zhǔn)品,98%4,5-二基咪唑 98%Anti-B7-1/CD80 激分子B7-1蛋白抗體
5-硫代-D-葡萄糖 96%4,5-二基咪唑 99%Anti-CD73 胞漿-5′-核苷酸-Ⅱ抗體
三溶液 50%溶液二吡咯烷基(N-琥珀酰亞氨氧基)碳六氟鹽 98%Anti-CD79A/IGBP-1 球蛋白結(jié)合蛋白-1抗體
二十三烷 分析標(biāo)準(zhǔn)品,99.5%4-(4,6-二甲氧基三)-4-甲基嗎啉鹽酸鹽 97%Anti-CD82/KAI1 腫瘤轉(zhuǎn)移抑制蛋白1抗體