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詳細介紹
產品屬性：
產品名稱 | 規(guī)格 | 貨號 |
| 外周血來源內皮祖細胞 | 5×10?Cells/T25培養(yǎng)瓶 | GOY-01X1179 |
商品介紹：
名稱 外周血來源內皮祖細胞 2.組織來源：外周血 3.產品規(guī)格：5×105cells/T25細胞培養(yǎng)瓶 4.細胞簡介： 人外周血來源內皮祖細胞分離自外周血；外周血是除骨髓之外的血液，臨床上常用一些方法把骨髓中的造血干細胞釋放到血液中，再在從血液中提取分離得到造血干細胞，我們把這樣得到的干細胞稱為外周血干細胞，在二十一世紀初人類開始的生命方舟計劃中提出外周血這一新概念。內皮祖細胞是血管內皮細胞的前體細胞，亦稱為成血管細胞（Angioblast），是一群具有游走特性，能進一步增殖分化的幼稚內皮細胞，缺乏成熟內皮細胞的特征性表型，不能形成管腔樣結構，其功能主要為參與了出生后缺血組織的血管發(fā)生和血管損傷后的修復。研究顯示，內皮祖細胞在心腦血管疾病、外周血管疾病、腫瘤血管形成及創(chuàng)傷愈合等方面均發(fā)揮重要作用，并為缺血性疾病的研究治療提供了新思路，EPCs生物學特性和治療作用的研究成為這一領域新的熱點。 5.方法簡介： 實驗室分離的人外周血來源內皮祖細胞采用采集外周血、密度梯度離心、差速貼壁法結合內皮細胞專用培養(yǎng)基培養(yǎng)篩選制備而來，細胞總量約為5×10?cells/瓶。 6.質量檢測： 實驗室分離的人外周血來源內皮祖細胞經CD34免疫熒光鑒定，純度可達90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細菌、酵母和真菌等。 7.培養(yǎng)信息： 包被條件PLL（0.1mg/ml），明膠（0.1%） 培養(yǎng)基含FBS、生長添加劑、Penicillin、Streptomycin等 產品貨號CM-H163 換液頻率每2-3天換液一次 生長特性貼壁 細胞形態(tài)內皮細胞樣 傳代特性可傳1-2代；不建議多次傳代 消化液0.25%胰蛋白酶 培養(yǎng)條件氣相：空氣，95%；CO2，5% |
冷凍保存細胞之方法？
冷凍保存方法一: 冷凍管置于4℃ 30~60 分鐘→ （-20 ℃30 分鐘*） → -80 ℃16~18 小時（或隔夜） → 液氮槽vaporphase 長期儲存。
冷凍保存方法二: 冷凍管置于已設定程序之可程序降溫機中每分鐘降1-3 ℃ 至–80 ℃ 以下， 再放入液氮槽vapor phase長期儲存。*-20 ℃不可超過1 小時， 以防止冰晶過大，造成細胞大量死亡，亦可跳過此步驟直接放入-80℃ 冰箱中，惟存活率稍微降低一些。
實驗要點及說明：
1．本方法適用于貼壁細胞培養(yǎng)，而不適用于懸浮細胞培養(yǎng)，懸浮細胞可使用滴片法；
2．所使用的蓋玻片應該為優(yōu)質玻璃，并經過鉻酸洗液處理；
3．蓋玻片非常薄，易碎，取放蓋玻片時動作要輕；
4．如果需要更多生長狀態(tài)一致的細胞，可以使用較大的培養(yǎng)皿，但不宜過大，以避免培養(yǎng)液的浪費和增加污染機率；
5．如果細胞貼壁生長能力較差，可將蓋玻片在0.5%多聚賴氨酸溶液中浸泡5-10分鐘并自然晾干。
實驗報告：
一、分離與培養(yǎng)：
1、無菌條件下，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織，然后用PBS將此組織塊清洗2次，將成1mm3左右大?。?/span>
2、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型膠原酶），混懸10s，置37℃條件下消化10min，之后用滴管吹打制成單細胞懸液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置；
3、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液，混懸10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置，重復此步驟2-3次，直至組織*被消化；
4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過濾細胞消化液，1200r/min 離心10min，棄去上清，沉淀細胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸，接種于25cm2培養(yǎng)瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；
5、差速貼壁1h后，吸出培養(yǎng)基，按實驗需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng)；
二、免疫熒光鑒定：
1、待心房肌細胞生長至80%融合時，棄去培養(yǎng)基，用溫育的PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細胞15min；
2、PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后在4℃條件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；
3、PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后在室溫條件下，用4% BSA封閉細胞30min；
4、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗，然后將其放在4℃冰箱中孵育細胞過夜；
5、PBS沖洗細胞3次，每次10min，按1：150的比例稀釋抗α-actin的二抗， 37℃條件下放置1h；
6、用PBS沖洗3次，每次10min，在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。
小鼠 Smad1 基因全長ORF克隆 (表達載體), 帶HA標簽
小鼠 MAPK14 基因全長ORF克隆 (表達載體), 無標簽
小鼠 Smad5 基因全長ORF克隆 (表達載體), 帶HA標簽
小鼠 CD54 / ICAM1 基因全長ORF克隆 (表達載體), 無標簽
小鼠 VEGF-C 基因全長ORF克隆 (表達載體), 帶His標簽
小鼠 ALK-2 / ACVR1 基因全長ORF克隆 (表達載體), 帶HA標簽
GLP1R 基因全長ORF克隆 (表達載體), 無標簽
Spp1 轉錄變體1 基因全長ORF克隆 (表達載體), 帶FLAG標簽
MMP-12 基因全長ORF克隆 (表達載體), 帶Myc標簽
小鼠 ACVR2A 基因全長ORF克隆 (表達載體), 無標簽
外周血來源內皮祖細胞四丁基氯化銨 離子色譜級, ≥99.0%2-啉 98%Anti-MYOG/Myogenin 肌紅蛋白抗體(肌生成素)
四丁基氯化銨 97%8-羥基喹啉 AR,99.0%Anti-Nephrin 去氧素抗體
四乙基氫氧化銨 AR,25%水溶液8-羥基喹啉-5-磺酸 水合物 98%Anti-nectin 2/CD112 黏附分子CD112抗體
四乙基氫氧化銨 AR,25%甲溶液8-羥基喹啉銅 94%Anti-Nestin 巢蛋白/神經上皮干蛋白抗體
三鹽酸鹽 98%5-硝基-2-酚 98%Anti-Nestin 巢蛋白/神經上皮干蛋白抗體（大、小鼠）
四丁基氫氧化銨溶液 ～25% in H2O (～0.8 M)8-羥基喹啉半鹽 98%Anti-Neurobeachin 蛋白激錨定蛋白抗體
四丁基氫氧化銨溶液 10% in H2O1，2-環(huán)己二 99%Anti-AKAP95 蛋白激A錨定蛋白95抗體
四丁基氫氧化銨溶液 ～25% in methanol (～0.8 M)4-溴苯乙 99%Anti-NeuN 神經元核抗原抗體
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