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詳細(xì)介紹
冷凍保存細(xì)胞之方法？
冷凍保存方法一: 冷凍管置于4℃ 30~60 分鐘→ （-20 ℃30 分鐘*） → -80 ℃16~18 小時(shí)（或隔夜） → 液氮槽vaporphase 長(zhǎng)期儲(chǔ)存。
冷凍保存方法二: 冷凍管置于已設(shè)定程序之可程序降溫機(jī)中每分鐘降1-3 ℃ 至–80 ℃ 以下， 再放入液氮槽vapor phase長(zhǎng)期儲(chǔ)存。*-20 ℃不可超過(guò)1 小時(shí)， 以防止冰晶過(guò)大，造成細(xì)胞大量死亡，亦可跳過(guò)此步驟直接放入-80℃ 冰箱中，惟存活率稍微降低一些。
產(chǎn)品屬性：
產(chǎn)品名稱 | 規(guī)格 | 貨號(hào) |
| 小鼠脈絡(luò)膜血管內(nèi)皮細(xì)胞 | 5×10?Cells/T25培養(yǎng)瓶 | GOY-01X1077 |
商品介紹：
名稱 小鼠脈絡(luò)膜血管內(nèi)皮細(xì)胞 2.組織來(lái)源：脈絡(luò)膜組織 3.產(chǎn)品規(guī)格：5×105cells/T25細(xì)胞培養(yǎng)瓶 4.細(xì)胞簡(jiǎn)介： 小鼠脈絡(luò)膜血管內(nèi)皮細(xì)胞分離自眼球脈絡(luò)膜組織；脈絡(luò)膜在視網(wǎng)膜和鞏膜之間，含有豐富血管和色素細(xì)胞，對(duì)外力沖擊的耐受性較視網(wǎng)膜差，當(dāng)眼球受到從前面來(lái)的外力的沖擊作用通過(guò)玻璃體傳到后極部時(shí)，堅(jiān)硬的鞏膜在其外面又有抵抗作用，使脈絡(luò)膜在內(nèi)外兩種作用夾攻下而發(fā)生破裂和出血。脈絡(luò)膜呈暗褐色，圍繞視神經(jīng)乳頭部有照膜，為青綠色帶金屬光澤的三角形區(qū)。脈絡(luò)膜是眼球中膜的后2/3處的薄膜，由纖維組織、小血管和毛細(xì)血管組成，軟而薄，棕紅色，在鞏膜和視網(wǎng)膜之間，續(xù)連于睫狀體后方。脈絡(luò)膜的血循環(huán)營(yíng)養(yǎng)視網(wǎng)膜外層，其含有的豐富色素起遮光暗房作用。主要功能是營(yíng)養(yǎng)視網(wǎng)膜外層及玻璃體，并有遮光作用，使反射的物象清楚。同時(shí)對(duì)視覺(jué)系統(tǒng)起保護(hù)作用，對(duì)整個(gè)視覺(jué)神經(jīng)有調(diào)節(jié)作用。續(xù)連于睫狀體后方，含豐富的血管和色素細(xì)胞，有營(yíng)養(yǎng)和遮光作用。 5.方法簡(jiǎn)介： 實(shí)驗(yàn)室分離的小鼠脈絡(luò)膜血管內(nèi)皮細(xì)胞采用膠原酶-中性蛋白酶混合消化法并通過(guò)內(nèi)皮細(xì)胞專用培養(yǎng)基培養(yǎng)篩選制備而來(lái)，細(xì)胞總量約為5×10?cells/瓶。 6.質(zhì)量檢測(cè)： 實(shí)驗(yàn)室分離的小鼠脈絡(luò)膜血管內(nèi)皮細(xì)胞經(jīng)CD31免疫熒光鑒定，純度可達(dá)90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細(xì)菌、酵母和真菌等。 7.培養(yǎng)信息： 包被條件PLL（0.1mg/ml），明膠（0.1%） 培養(yǎng)基含FBS、生長(zhǎng)添加劑、Penicillin、Streptomycin等 產(chǎn)品貨號(hào)CM-M124 換液頻率每2-3天換液一次 生長(zhǎng)特性貼壁 細(xì)胞形態(tài)內(nèi)皮細(xì)胞樣 傳代特性可傳2-3代 消化液0.25%胰蛋白酶 培養(yǎng)條件氣相：空氣，95%；CO2，5% |
實(shí)驗(yàn)要點(diǎn)及說(shuō)明：
1．本方法適用于貼壁細(xì)胞培養(yǎng)，而不適用于懸浮細(xì)胞培養(yǎng)，懸浮細(xì)胞可使用滴片法；
2．所使用的蓋玻片應(yīng)該為優(yōu)質(zhì)玻璃，并經(jīng)過(guò)鉻酸洗液處理；
3．蓋玻片非常薄，易碎，取放蓋玻片時(shí)動(dòng)作要輕；
4．如果需要更多生長(zhǎng)狀態(tài)一致的細(xì)胞，可以使用較大的培養(yǎng)皿，但不宜過(guò)大，以避免培養(yǎng)液的浪費(fèi)和增加污染機(jī)率；
5．如果細(xì)胞貼壁生長(zhǎng)能力較差，可將蓋玻片在0.5%多聚賴氨酸溶液中浸泡5-10分鐘并自然晾干。
實(shí)驗(yàn)報(bào)告：
一、分離與培養(yǎng)：
1、無(wú)菌條件下，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織，然后用PBS將此組織塊清洗2次，將成1mm3左右大小；
2、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型膠原酶），混懸10s，置37℃條件下消化10min，之后用滴管吹打制成單細(xì)胞懸液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置；
3、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液，混懸10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置，重復(fù)此步驟2-3次，直至組織*被消化；
4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過(guò)濾細(xì)胞消化液，1200r/min 離心10min，棄去上清，沉淀細(xì)胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸，接種于25cm2培養(yǎng)瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；
5、差速貼壁1h后，吸出培養(yǎng)基，按實(shí)驗(yàn)需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng)；
二、免疫熒光鑒定：
1、待心房肌細(xì)胞生長(zhǎng)至80%融合時(shí)，棄去培養(yǎng)基，用溫育的PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細(xì)胞15min；
2、PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后在4℃條件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；
3、PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后在室溫條件下，用4% BSA封閉細(xì)胞30min；
4、按1: 100的比例稀釋?duì)?actin一抗，然后將其放在4℃冰箱中孵育細(xì)胞過(guò)夜；
5、PBS沖洗細(xì)胞3次，每次10min，按1：150的比例稀釋抗α-actin的二抗， 37℃條件下放置1h；
6、用PBS沖洗3次，每次10min，在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。
IL1R9 / IL1RAPL2 基因全長(zhǎng)ORF克隆 (表達(dá)載體), 無(wú)標(biāo)簽
IL18RAP / IL1R7 基因全長(zhǎng)ORF克隆 (表達(dá)載體), 無(wú)標(biāo)簽
DCN / Decorin 轉(zhuǎn)錄變體A1 基因全長(zhǎng)ORF克隆 (表達(dá)載體), 無(wú)標(biāo)簽
tPAβ DNA 轉(zhuǎn)錄變體1 基因全長(zhǎng)ORF克隆 (表達(dá)載體), 無(wú)標(biāo)簽
DAN / NBL1 轉(zhuǎn)錄變體2 基因全長(zhǎng)ORF克隆 (表達(dá)載體), 無(wú)標(biāo)簽
S100A4 轉(zhuǎn)錄變體1 基因全長(zhǎng)ORF克隆 (表達(dá)載體), 無(wú)標(biāo)簽
S100B 基因全長(zhǎng)ORF克隆 (表達(dá)載體), 無(wú)標(biāo)簽
CCL22 / MDC 基因全長(zhǎng)ORF克隆 (表達(dá)載體), 無(wú)標(biāo)簽
CNDP2 / CPGL 基因全長(zhǎng)ORF克隆 (表達(dá)載體), 無(wú)標(biāo)簽
APOA1 / ApoAI 基因全長(zhǎng)ORF克隆 (表達(dá)載體), 無(wú)標(biāo)簽
小鼠脈絡(luò)膜血管內(nèi)皮細(xì)胞78-5000 pg/mL 單增李斯特菌(LM)核酸檢測(cè)試劑盒(PCR-熒光探針?lè)?
大豆蛋白胨 英文名稱：Peptone from Soybean Meal 產(chǎn)品規(guī)格：250g
62.5-4000 pg/mL ELISA Kit for Human Galectin-3
1.56-100 ng/mL ELISA Kit for Human Hemoglobin subunit beta
0.312-20 ng/mL 人磷脂酰基醇蛋白聚糖4(Glypican-4)ELISA試劑盒
31.2-2000 pg/mL ELISA Kit for Human Superoxide dismutase [Mn], mitochondrial
0.156-10 ng/mL ELISA Kit for Testosterone
TTC 英文名稱：TTC 產(chǎn)品規(guī)格：10g
78-5000 pg/mL 人肌動(dòng)蛋白抑制蛋白1(PFN1)ELISA試劑盒
0.312-20 ng/mL ELISA Kit for Human Rho-related GTP-binding protein RhoC
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