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詳細介紹
冷凍保存細胞之方法？
冷凍保存方法一: 冷凍管置于4℃ 30~60 分鐘→ （-20 ℃30 分鐘*） → -80 ℃16~18 小時（或隔夜） → 液氮槽vaporphase 長期儲存。
冷凍保存方法二: 冷凍管置于已設(shè)定程序之可程序降溫機中每分鐘降1-3 ℃ 至–80 ℃ 以下， 再放入液氮槽vapor phase長期儲存。*-20 ℃不可超過1 小時， 以防止冰晶過大，造成細胞大量死亡，亦可跳過此步驟直接放入-80℃ 冰箱中，惟存活率稍微降低一些。
產(chǎn)品屬性：
產(chǎn)品名稱 | 規(guī)格 | 貨號 |
| 小鼠表皮黑色素細胞 | 5×10?Cells/T25培養(yǎng)瓶 | GOY-01X1011 |
商品介紹：
名稱 小鼠表皮黑色素細胞 2.組織來源：皮膚組織 3.產(chǎn)品規(guī)格：5×105cells/T25細胞培養(yǎng)瓶 4.細胞簡介： 小鼠表皮黑色素細胞分離自皮膚組織；表皮位于動物皮膚的外層，由胚胎時期外胚層形成，具有抗摩擦和抗損傷的作用。表皮是皮膚的淺層結(jié)構(gòu)，由復(fù)層扁平上皮構(gòu)成。從基底層到表面可分為五層，即基底層、棘層、顆粒層、透明層和角質(zhì)層。黑色素細胞是皮膚產(chǎn)生和維持色素的主要細胞，起源于神經(jīng)嵴，后逐漸遷移到表皮和毛囊。黑色素細胞的異常或功能的失常導(dǎo)致了一系列難治性色素性疾病的發(fā)生，如黃褐斑等。表皮黑色素細胞主要分布于位于表皮的基底層，與表皮細胞共同組成表皮黑素單位，其主要功能是產(chǎn)生黑素小體保護皮膚免受損害。 5.方法簡介： 實驗室分離的小鼠表皮黑色素細胞先中性蛋白酶消化、后胰蛋白酶-膠原酶混合消化法制備而來，細胞總量約為5×10?cells/瓶。 6.質(zhì)量檢測： 實驗室分離的小鼠表皮黑色素細胞經(jīng)S-100免疫熒光鑒定，純度可達90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細菌、酵母和真菌等。 7.培養(yǎng)信息： 培養(yǎng)基含FBS、生長添加劑、Penicillin、Streptomycin等 產(chǎn)品貨號CM-M099 換液頻率每2-3天換液一次 生長特性貼壁 細胞形態(tài)長梭形 傳代特性可傳1-2代 消化液0.25%胰蛋白酶 培養(yǎng)條件氣相：空氣，95%；CO2，5% |
實驗要點及說明：
1．本方法適用于貼壁細胞培養(yǎng)，而不適用于懸浮細胞培養(yǎng)，懸浮細胞可使用滴片法；
2．所使用的蓋玻片應(yīng)該為優(yōu)質(zhì)玻璃，并經(jīng)過鉻酸洗液處理；
3．蓋玻片非常薄，易碎，取放蓋玻片時動作要輕；
4．如果需要更多生長狀態(tài)一致的細胞，可以使用較大的培養(yǎng)皿，但不宜過大，以避免培養(yǎng)液的浪費和增加污染機率；
5．如果細胞貼壁生長能力較差，可將蓋玻片在0.5%多聚賴氨酸溶液中浸泡5-10分鐘并自然晾干。
實驗報告：
一、分離與培養(yǎng)：
1、無菌條件下，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織，然后用PBS將此組織塊清洗2次，將成1mm3左右大?。?/span>
2、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型膠原酶），混懸10s，置37℃條件下消化10min，之后用滴管吹打制成單細胞懸液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置；
3、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液，混懸10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置，重復(fù)此步驟2-3次，直至組織*被消化；
4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過濾細胞消化液，1200r/min 離心10min，棄去上清，沉淀細胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸，接種于25cm2培養(yǎng)瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；
5、差速貼壁1h后，吸出培養(yǎng)基，按實驗需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng)；
二、免疫熒光鑒定：
1、待心房肌細胞生長至80%融合時，棄去培養(yǎng)基，用溫育的PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細胞15min；
2、PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后在4℃條件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；
3、PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后在室溫條件下，用4% BSA封閉細胞30min；
4、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗，然后將其放在4℃冰箱中孵育細胞過夜；
5、PBS沖洗細胞3次，每次10min，按1：150的比例稀釋抗α-actin的二抗， 37℃條件下放置1h；
6、用PBS沖洗3次，每次10min，在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。
食蟹猴 CD33 基因全長ORF克隆
食蟹猴 CD28 基因全長ORF克隆
食蟹猴 DPP4 基因全長ORF克隆
食蟹猴 ITGB1 基因全長ORF克隆
食蟹猴 CD8B 基因全長ORF克隆
食蟹猴 MME 基因全長ORF克隆
食蟹猴 CD5 基因全長ORF克隆
食蟹猴 CD1E 基因全長ORF克隆
食蟹猴 CD14 基因全長ORF克隆
食蟹猴 CD1B 基因全長ORF克隆
小鼠表皮黑色素細胞0.156-10 ng/mL 人半胱天冬7(CASP-7)ELISA試劑盒
丙二酸鹽 英文名稱： 產(chǎn)品規(guī)格：20支
78-5000 pg/mL ELISA Kit for Human Nodal homolog
0.78-50 ng/mL 人酸性神經(jīng)鞘磷脂(Sphingomyelin phosphodiesterase)ELISA試劑盒
0.312-20 ng/mL 人白介素20受體a (IL20Ra)ELISA試劑盒
0.312-20 ng/mL 霍亂弧菌(O1)核酸檢測試劑盒(PCR-熒光探針法)
0.78-50 ng/mL 人分泌型卷曲蛋白1 (FRP-1)ELISA試劑盒
沙氏葡萄糖液體培養(yǎng)基顆粒 英文名稱：Sabouraud’s Glucose Broth Medium 產(chǎn)品規(guī)格：300ml/袋*10
31.2-2000 pg/mL 人硒蛋白S(SelS)ELISA試劑盒
莫匹羅星鋰鹽改良MRS培養(yǎng)基 英文名稱：Li-Mupirocin MRS Medium,Modified 產(chǎn)品規(guī)格：250g
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