實(shí)驗(yàn)要點(diǎn)及說(shuō)明:
1.本方法適用于貼壁細(xì)胞培養(yǎng),而不適用于懸浮細(xì)胞培養(yǎng),懸浮細(xì)胞可使用滴片法;
2.所使用的蓋玻片應(yīng)該為優(yōu)質(zhì)玻璃,并經(jīng)過(guò)鉻酸洗液處理;
3.蓋玻片非常薄,易碎,取放蓋玻片時(shí)動(dòng)作要輕;
4.如果需要更多生長(zhǎng)狀態(tài)一致的細(xì)胞,可以使用較大的培養(yǎng)皿,但不宜過(guò)大,以避免培養(yǎng)液的浪費(fèi)和增加污染機(jī)率;
5.如果細(xì)胞貼壁生長(zhǎng)能力較差,可將蓋玻片在0.5%多聚賴(lài)氨酸溶液中浸泡5-10分鐘并自然晾干。
產(chǎn)品屬性:
商品介紹:
名稱(chēng) 骨髓樹(shù)突狀細(xì)胞(DC細(xì)胞) |
冷凍保存細(xì)胞之方法?
冷凍保存方法一: 冷凍管置于4℃ 30~60 分鐘→ (-20 ℃30 分鐘*) → -80 ℃16~18 小時(shí)(或隔夜) → 液氮槽vaporphase 長(zhǎng)期儲(chǔ)存。
冷凍保存方法二: 冷凍管置于已設(shè)定程序之可程序降溫機(jī)中每分鐘降1-3 ℃ 至–80 ℃ 以下, 再放入液氮槽vapor phase長(zhǎng)期儲(chǔ)存。*-20 ℃不可超過(guò)1 小時(shí), 以防止冰晶過(guò)大,造成細(xì)胞大量死亡,亦可跳過(guò)此步驟直接放入-80℃ 冰箱中,惟存活率稍微降低一些。
實(shí)驗(yàn)報(bào)告:
一、分離與培養(yǎng):
1、無(wú)菌條件下,取出1-3d 齡SD大鼠心房組織,然后用PBS將此組織塊清洗2次,將成1mm3左右大小;
2、往組織塊中加入4 mL酶消化液(0.1% 和0.1% I型膠原酶),混懸10s,置37℃條件下消化10min,之后用滴管吹打制成單細(xì)胞懸液,自然沉淀并收集上清,用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置;
3、剩下的組織再加入3~4mL酶消化液,混懸10s,置37℃消化10 min后,按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置,重復(fù)此步驟2-3次,直至組織*被消化;
4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過(guò)濾細(xì)胞消化液,1200r/min 離心10min,棄去上清,沉淀細(xì)胞用含有10% FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸,接種于25cm2培養(yǎng)瓶,放置于37℃ ,5%CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng);
5、差速貼壁1h后,吸出培養(yǎng)基,按實(shí)驗(yàn)需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng);
二、免疫熒光鑒定:
1、待心房肌細(xì)胞生長(zhǎng)至80%融合時(shí),棄去培養(yǎng)基,用溫育的PBS沖洗細(xì)胞2次,每次10min,然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細(xì)胞15min;
2、PBS沖洗細(xì)胞2次,每次10min,然后在4℃條件下,用0.1%Triton X-100透膜15min;
3、PBS沖洗細(xì)胞2次,每次10min,然后在室溫條件下,用4% BSA封閉細(xì)胞30min;
4、按1: 100的比例稀釋?duì)?actin一抗,然后將其放在4℃冰箱中孵育細(xì)胞過(guò)夜;
5、PBS沖洗細(xì)胞3次,每次10min,按1:150的比例稀釋抗α-actin的二抗, 37℃條件下放置1h;
6、用PBS沖洗3次,每次10min,在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。
PPT1 / Palmitoyl-protein thioesterase 1 細(xì)胞裂解液 (陽(yáng)性對(duì)照) (變性)
NRBF2 桿狀病毒-昆蟲(chóng)細(xì)胞裂解液 (陽(yáng)性對(duì)照) (變性)
INSL4 / EPIL 細(xì)胞裂解液 (陽(yáng)性對(duì)照) (變性)
NKG2D / CD314 / KLRK1 CHO細(xì)胞裂解液 (陽(yáng)性對(duì)照) (變性)
小鼠 M-CSF / CSF-1 細(xì)胞裂解液 (陽(yáng)性對(duì)照) (變性)
甲型流感 H7N9 (A/Hangzhou/3/2013) 血凝素 (Hemagglutinin / HA) 桿狀病毒-昆蟲(chóng)細(xì)胞裂解液 (陽(yáng)性對(duì)照) (變性)
Cardiotrophin-1 / CTF1 細(xì)胞裂解液 (陽(yáng)性對(duì)照) (變性)
甲型流感 H7N9 (A/Shanghai/2/2013) 血凝素 (Hemagglutinin / HA) 桿狀病毒-昆蟲(chóng)細(xì)胞裂解液 (陽(yáng)性對(duì)照) (變性)
甲型流感 H7N9 (A/Shanghai/2/2013) 血凝素 (Hemagglutinin / HA) 細(xì)胞裂解液 (陽(yáng)性對(duì)照) (變性)
狗 CD40 / TNFRSF5 細(xì)胞裂解液 (陽(yáng)性對(duì)照) (變性)
骨髓樹(shù)突狀細(xì)胞(DC細(xì)胞)2,3,4-三羥基苯甲酸 97%間氯 GR,99%Anti-LILRB3/CD85a/PirB 白球蛋白樣受體-B抗體
吖橙 電泳級(jí)間氯 分析標(biāo)準(zhǔn)品,用于環(huán)境分析,>99.6%(GC)Anti-LIX1 LIX1抗體
4-(2-氨乙基)苯磺酰氟鹽酸鹽 98%2,3-二氯 分析標(biāo)準(zhǔn)品Anti-Livin 凋亡抑制蛋白抗體
素D 98%(劇品)2,3-二氯 98%Anti-phospho-LKB1(Thr363) 化/蛋白激抗體
四氮唑藍(lán) 98%1,2,4-三氯苯 GR,99%Anti-phospho-LKB1(Ser334) 化/蛋白激抗體
赫斯特?zé)晒馊剂希?/span>33258 98%1,2,4-三氯苯 Standard for GC, ≥99.5% (GC)Anti-phospho-LKB1(Ser428) 化/蛋白激抗體
赫斯特?zé)晒馊剂希?/span>33342 98%甲中1,2,4-三氯苯標(biāo)樣 分析標(biāo)準(zhǔn)品Anti-Phospho-LKB1(Thr189) 化/蛋白激抗體
貝他定鹽酸 98%1,2,4-三氯苯 CP,96%Anti-LFABP/FABP-1 肝臟型脂肪酸結(jié)合蛋白抗體