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上海谷研實(shí)業(yè)有限公司 |
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| 參考價(jià) | 面議 |
更新時(shí)間：2022-04-18 16:07:39瀏覽次數(shù)：239
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| 供貨周期 | 現(xiàn)貨 | 規(guī)格 | 5×10?Cells/T25培養(yǎng)瓶 |
|---|---|---|---|
| 貨號(hào) | GOY-01X0889 | 應(yīng)用領(lǐng)域 | 化工 |
| 主要用途 | 產(chǎn)品僅供科研使用 |
冷凍保存細(xì)胞之方法？
冷凍保存方法一: 冷凍管置于4℃ 30~60 分鐘→ （-20 ℃30 分鐘*） → -80 ℃16~18 小時(shí)（或隔夜） → 液氮槽vaporphase 長(zhǎng)期儲(chǔ)存。
冷凍保存方法二: 冷凍管置于已設(shè)定程序之可程序降溫機(jī)中每分鐘降1-3 ℃ 至–80 ℃ 以下， 再放入液氮槽vapor phase長(zhǎng)期儲(chǔ)存。*-20 ℃不可超過1 小時(shí)， 以防止冰晶過大，造成細(xì)胞大量死亡，亦可跳過此步驟直接放入-80℃ 冰箱中，惟存活率稍微降低一些。
產(chǎn)品屬性：
產(chǎn)品名稱 | 規(guī)格 | 貨號(hào) |
| 子宮平滑肌細(xì)胞 | 5×10?Cells/T25培養(yǎng)瓶 | GOY-01X0889 |
商品介紹：
名稱 子宮平滑肌細(xì)胞 2.組織來源：子宮組織 3.產(chǎn)品規(guī)格：5×105cells/T25細(xì)胞培養(yǎng)瓶 4.細(xì)胞簡(jiǎn)介： 人子宮平滑肌細(xì)胞分離自子宮組織；子宮是孕育胎兒的器官，位于盆腔中部，膀胱與直腸之間，其位置可隨膀胱與直腸的充盈程度或體位而有變化。子宮的正常位置主要依靠子宮諸韌帶、盆膈、尿生殖膈及會(huì)陰中心腱等結(jié)構(gòu)維持，這些結(jié)構(gòu)受損或松弛時(shí)，可以引起子宮脫垂。子宮肌層比較厚，由成束或成片的平滑肌組成，肌束間以結(jié)締組織分隔。子宮平滑肌具有收縮功能，收縮受激素的調(diào)節(jié)，其收縮活動(dòng)有助于向輸卵管運(yùn)送、經(jīng)血排出以及胎兒娩出。子宮平滑肌層含有大量的血管，如果平滑肌層細(xì)胞過度生長(zhǎng)，勢(shì)必造成血管壁的增厚，管腔堵塞，體外培養(yǎng)平滑肌細(xì)胞有利于研究子宮和其他富含血管器官的血管形成機(jī)制。子宮平滑肌細(xì)胞原代分離培養(yǎng)3天后，可見細(xì)胞貼壁伸展，細(xì)胞形態(tài)大小不一，呈梭形、不規(guī)則形、三角形或扇形，核卵圓形、居中；2周后細(xì)胞匯合，多數(shù)細(xì)胞伸展呈長(zhǎng)梭形，胞漿豐富，有分枝狀突起，細(xì)胞平行排列成單層或部分區(qū)域多層重疊生長(zhǎng)，高低起伏；細(xì)胞密度低時(shí)，常交織成網(wǎng)狀；密度高時(shí)，則排列為旋渦狀或柵欄狀。傳代后細(xì)胞生長(zhǎng)較快，4-6天即可匯合，并保持上述形態(tài)學(xué)特征和生長(zhǎng)特點(diǎn)。子宮平滑肌細(xì)胞的主要功能：①子宮平滑肌能保持子宮的基本形態(tài)，在孕期能的擴(kuò)張子宮容積，保證胎兒孕育環(huán)境；②平滑肌細(xì)胞有收縮舒張能力，在時(shí)能形成生理性的縮腹環(huán)，推動(dòng)胎兒向下移動(dòng)，輔助。 5.方法簡(jiǎn)介： 實(shí)驗(yàn)室分離的人子宮平滑肌細(xì)胞采用胰蛋白酶-膠原酶聯(lián)合消化法結(jié)合組織貼塊法制備而來，細(xì)胞總量約為5×10?cells/瓶。 6.質(zhì)量檢測(cè)： 實(shí)驗(yàn)室分離的人子宮平滑肌細(xì)胞經(jīng)α-SMA免疫熒光鑒定，純度可達(dá)90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細(xì)菌、酵母和真菌等。 7.培養(yǎng)信息： 培養(yǎng)基含FBS、生長(zhǎng)添加劑、Penicillin、Streptomycin等 產(chǎn)品貨號(hào)CM-H053 換液頻率每2-3天換液一次 生長(zhǎng)特性貼壁 細(xì)胞形態(tài)成纖維細(xì)胞樣 傳代特性可傳5代左右；3代以內(nèi)狀態(tài)最佳 消化液0.25%胰蛋白酶 培養(yǎng)條件氣相：空氣，95%；CO2，5% |
實(shí)驗(yàn)要點(diǎn)及說明：
1．本方法適用于貼壁細(xì)胞培養(yǎng)，而不適用于懸浮細(xì)胞培養(yǎng)，懸浮細(xì)胞可使用滴片法；
2．所使用的蓋玻片應(yīng)該為優(yōu)質(zhì)玻璃，并經(jīng)過鉻酸洗液處理；
3．蓋玻片非常薄，易碎，取放蓋玻片時(shí)動(dòng)作要輕；
4．如果需要更多生長(zhǎng)狀態(tài)一致的細(xì)胞，可以使用較大的培養(yǎng)皿，但不宜過大，以避免培養(yǎng)液的浪費(fèi)和增加污染機(jī)率；
5．如果細(xì)胞貼壁生長(zhǎng)能力較差，可將蓋玻片在0.5%多聚賴氨酸溶液中浸泡5-10分鐘并自然晾干。
實(shí)驗(yàn)報(bào)告：
一、分離與培養(yǎng)：
1、無菌條件下，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織，然后用PBS將此組織塊清洗2次，將成1mm3左右大?。?/span>
2、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型膠原酶），混懸10s，置37℃條件下消化10min，之后用滴管吹打制成單細(xì)胞懸液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置；
3、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液，混懸10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置，重復(fù)此步驟2-3次，直至組織*被消化；
4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過濾細(xì)胞消化液，1200r/min 離心10min，棄去上清，沉淀細(xì)胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸，接種于25cm2培養(yǎng)瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；
5、差速貼壁1h后，吸出培養(yǎng)基，按實(shí)驗(yàn)需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng)；
二、免疫熒光鑒定：
1、待心房肌細(xì)胞生長(zhǎng)至80%融合時(shí)，棄去培養(yǎng)基，用溫育的PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細(xì)胞15min；
2、PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后在4℃條件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；
3、PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后在室溫條件下，用4% BSA封閉細(xì)胞30min；
4、按1: 100的比例稀釋?duì)?actin一抗，然后將其放在4℃冰箱中孵育細(xì)胞過夜；
5、PBS沖洗細(xì)胞3次，每次10min，按1：150的比例稀釋抗α-actin的二抗， 37℃條件下放置1h；
6、用PBS沖洗3次，每次10min，在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。
小鼠 CLEC11A 基因全長(zhǎng)ORF克隆
小鼠 NLN / Neurolysin 基因全長(zhǎng)ORF克隆
小鼠 CD147 / BSG 轉(zhuǎn)錄變體2 基因全長(zhǎng)ORF克隆
小鼠 ECM1 基因全長(zhǎng)ORF克隆
小鼠 SEMA4A 轉(zhuǎn)錄變體1 基因全長(zhǎng)ORF克隆
小鼠 PLA2G1B 基因全長(zhǎng)ORF克隆
小鼠 IL17RA / CD217 基因全長(zhǎng)ORF克隆
小鼠 CD40L / TNFSF5 基因全長(zhǎng)ORF克隆
小鼠 TrkC 基因全長(zhǎng)ORF克隆
小鼠 CD157 / BST1 基因全長(zhǎng)ORF克隆
子宮平滑肌細(xì)胞0.156-10 ng/mL ELISA Kit for Human Keratin, type II cytoskeletal 2 epidermal
0.156-10 ng/mL ELISA Kit for Human Putative ATP-dependent Clp protease proteolytic subunit, mitochondrial
15.6-1000 pg/mL ELISA Kit for Human Adiponectin
6.25-400 ng/mL 豬腦心肌炎病毒(EMCV)核酸檢測(cè)試劑盒(PCR-熒光探針法)
15.6-1000 pg/mL 人叉頭框蛋白01(FoxO1)ELISA試劑盒
7.8-500 pg/mL 人β-防御素129(β-DF129)ELISA試劑盒
0.156-10 ng/mL 人載脂蛋白C2(Apo C2)ELISA試劑盒
78-5000 pg/mL ELISA Kit for Human Pro-neuropeptide Y
改良HC瓊脂添加劑 英文名稱： 產(chǎn)品規(guī)格：1ml*5
胰蛋白胨大豆肉湯顆粒 英文名稱：Tryptose Soya Broth 產(chǎn)品規(guī)格：250g
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