使用方法:
收到細(xì)胞后,請(qǐng)按照以下方法進(jìn)行操作。 1. 取出25cm2培養(yǎng)瓶,75%酒精消毒,拆下封口膜,放入37℃,5% CO2細(xì)胞培養(yǎng)箱中靜置6-8小時(shí)或者過(guò)夜,以穩(wěn)定細(xì)胞狀態(tài)。 2. 待細(xì)胞達(dá)到80%匯合時(shí)準(zhǔn)備進(jìn)行傳代培養(yǎng)。 3. 細(xì)胞傳代 1) 吸出25cm2培養(yǎng)瓶中的培養(yǎng)基,用PBS清洗細(xì)胞一次; 2) 添加0.125%胰蛋白酶消化液約1mL至培養(yǎng)瓶中,37℃溫浴3min左右;倒置顯微鏡下觀察,待細(xì)胞回縮變圓后吸棄消化液,再加入*培養(yǎng)液終止消化; 3) 用吸管輕輕吹打混勻,按1:2或1:3等適當(dāng)?shù)谋壤M(jìn)行接種傳代,然后補(bǔ)充新鮮的*培養(yǎng)基至5mL,放入37℃,5% CO2細(xì)胞培養(yǎng)箱中培養(yǎng); 4) 待細(xì)胞*貼壁后,培養(yǎng)觀察。之后每隔2-3天更換新鮮的*培養(yǎng)基。 |
公司細(xì)胞現(xiàn)貨供應(yīng),質(zhì)量有保證、*、實(shí)驗(yàn)效果好,我司為您提供免費(fèi)代測(cè)服務(wù),同時(shí)提供最新價(jià)格、說(shuō)明書(shū)、規(guī)格、用途、實(shí)驗(yàn)原理等相關(guān)操作說(shuō)明。
產(chǎn)品介紹:
名稱 KB (口腔表皮樣癌細(xì)胞) 別稱Strain KB 年齡(性別)30歲 組織來(lái)源起源HeLa細(xì)胞污染 生長(zhǎng)特性貼壁細(xì)胞 細(xì)胞形態(tài)上皮細(xì)胞樣 背景描述最初認(rèn)為,KB細(xì)胞源自口腔表皮癌,但隨后通過(guò)同工酶分析、HeLa標(biāo)記染色體和DNA指紋分析發(fā)現(xiàn),KB細(xì)胞的起源是HeLa細(xì)胞污染的。KB細(xì)胞角蛋白免疫過(guò)氧化物酶染色陽(yáng)性,有報(bào)告稱KB細(xì)胞含有人乳頭狀瘤病毒18(HPV-18)序列。(STR檢測(cè)位點(diǎn)同HELA) 生物安全等級(jí)2 生長(zhǎng)培養(yǎng)基MEM+10% FBS+1% P/S 推薦傳代比例1:3-1:4 推薦換液頻率2~3次/周 倍增時(shí)間~30 hours 凍存條件 凍存液:55% 基礎(chǔ)培養(yǎng)基+40%FBS+5%DMSO 溫度:液氮 培養(yǎng)條件 氣相:空氣,95%;CO2,5% 溫度:37℃ 基因表達(dá)情況keratin |
細(xì)胞特點(diǎn)及處理:
產(chǎn)品特點(diǎn): 1、 使用方便:不需昂貴設(shè)備。 2、 可以處理各種細(xì)菌菌體,包括新鮮菌液和冰凍菌體。 3、 將蛋白提取的時(shí)間縮短至30分鐘-1小時(shí)。 4、 采用溫和的中性裂解組分,保持蛋白活性。 5、 含蛋白穩(wěn)定劑,提取的蛋白穩(wěn)定。 6、 紫外檢測(cè)蛋白濃度時(shí),背景干擾低。 7、 蛋白酶抑制劑抑制了蛋白的降解,蛋白酶抑制劑配方優(yōu)化。蛋白酶抑制劑混合物包含6種獨(dú)立的蛋白酶抑制劑;每一種抑制劑可特異性抑制某一種或幾種蛋白酶活性。該混合物優(yōu)化的組成使其可以抑制幾乎所有重要的蛋白酶活性,包括絲氨酸蛋白酶、半胱氨酸酸蛋白酶、天冬氨酸蛋白酶等。 8、 本試劑盒中不有EDTA,與金屬螯和層析等兼容。 | 細(xì)胞處理: 1) 復(fù)蘇細(xì)胞:將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中(水面要低于凍存管蓋部)搖晃解凍,移入事先準(zhǔn)備好的含有4mL培養(yǎng)基的15ml離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,加入1mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液移入含有5ml培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過(guò)夜。第二天換液并檢查細(xì)胞密度。 2) 細(xì)胞傳代:如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%,即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。 對(duì)于貼壁細(xì)胞,傳代可參考以下方法: 1.棄去培養(yǎng)上清,用不含鈣、鎂離子的PBS潤(rùn)洗細(xì)胞1-2次。 2.加2ml消化液(0.25%Trypsin-0.53mM EDTA)于培養(yǎng)瓶中,置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2分鐘,然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況,若細(xì)胞大部分變圓并脫落,迅速拿回操作臺(tái),輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加少量培養(yǎng)基終止消化。 3.按6-8ml/瓶補(bǔ)加培養(yǎng)基,輕輕打勻后吸出,在1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻。 4.將細(xì)胞懸液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。 |
細(xì)胞培養(yǎng)技巧:
一、凍存時(shí)的注意事項(xiàng): 1. 在冷凍保存之前,應(yīng)觀察細(xì)胞生長(zhǎng)是否良好(log phase) 且存活率高,凍存的細(xì)胞密度為80 – 90 %最佳 2. 冷凍前檢測(cè)細(xì)胞是否保有其*性質(zhì),例如是否有雜細(xì)胞或者支原體等。 3. 使用的DMSO 應(yīng)為試劑級(jí)等級(jí),以5~10 ml 小體積分裝,4 度避光保存,勿作多次解凍。使用的甘油也應(yīng)為試劑級(jí)等級(jí),以高壓蒸汽 滅菌后避光保存。在開(kāi)啟后一年內(nèi)使用,因長(zhǎng)期儲(chǔ)存后對(duì)細(xì)胞會(huì)有毒性。 4. 冷凍保存的細(xì)胞濃度: 4-1. 正常的成纖維細(xì)胞: 1-3x 10^6 cells/ml 4-2 雜交瘤細(xì)胞: 1~3 x 10^6 cells/ml,細(xì)胞濃度不要太高,某些雜交瘤會(huì)因冷凍濃度太高而在解凍24 小時(shí)后。 4-3.貼壁腫瘤細(xì)胞: 1 x 10^6,依細(xì)胞種類而異。腺癌類的細(xì)胞解凍后須較高之濃度,而HeLa 只需1-3 x 10^6 cells/ml。 4-4. 懸浮細(xì)胞: 5~10 x 10^6 cells/ml, 而淋巴類細(xì)胞須至少5 x 10^6 cells/ml。 5. 冷凍保護(hù)劑濃度為5 %或10 % DMSO,若是不確定細(xì)胞之冷凍條件,在做冷凍保存之同時(shí),亦應(yīng)作一個(gè)backup culture,以防止冷凍失敗。 |
下列是公司正銷售的產(chǎn)品:
魚(yú)CD8分子(CD8)免疫試劑盒進(jìn)口、組裝
雞熱休克蛋白40(HSP-40)免疫試劑盒*直銷
小鼠白介素2(IL-2)免疫試劑盒進(jìn)口、組裝
大鼠一氧化碳血紅蛋白(HbCO)免疫試劑盒*直銷
牛血清白蛋白(BSA)免疫試劑盒現(xiàn)貨供應(yīng)
牛胱抑素C(CST3/Cys-C)免疫試劑盒現(xiàn)貨供應(yīng)
犬松弛肽/松弛素(RLN)免疫試劑盒現(xiàn)貨供應(yīng)
HSP60 IgG抗體免疫試劑盒進(jìn)口、組裝
活化素A(ACV-A)免疫試劑盒*直銷
抗凝血III(AT III)免疫試劑盒進(jìn)口、組裝
KB (口腔表皮樣癌細(xì)胞)1Mu G鉀鹽溶液,200mg/mL Penicillin G Potassium 室溫保存,溶液需-20℃保存
2 ug pQCXIH pQCXIH 低溫運(yùn)輸,-20℃保存
麥芽糖 20支
2 ug pCAT3 control pCAT3 control 低溫運(yùn)輸,-20℃保存
3%NaCl堿性蛋白胨水 9ml*10支
25mg 萘 AS-TR 鹽 Naphthol AS-TR Phosphate Disodium Salt -20℃保存
50T 流行性腦膜炎雙球菌PCR檢測(cè)試劑盒 低溫運(yùn)輸,-20℃保存