化工儀器網(wǎng)
詳細介紹
實驗要點及說明：
1．本方法適用于貼壁細胞培養(yǎng)，而不適用于懸浮細胞培養(yǎng)，懸浮細胞可使用滴片法；
2．所使用的蓋玻片應該為優(yōu)質(zhì)玻璃，并經(jīng)過鉻酸洗液處理；
3．蓋玻片非常薄，易碎，取放蓋玻片時動作要輕；
4．如果需要更多生長狀態(tài)一致的細胞，可以使用較大的培養(yǎng)皿，但不宜過大，以避免培養(yǎng)液的浪費和增加污染機率；
5．如果細胞貼壁生長能力較差，可將蓋玻片在0.5%多聚賴氨酸溶液中浸泡5-10分鐘并自然晾干。
產(chǎn)品屬性：
產(chǎn)品名稱 | 規(guī)格 | 貨號 |
| 大鼠胚胎成纖維細胞 | 5×10?Cells/T25培養(yǎng)瓶 | GOY-01X1215 |
商品介紹：
名稱 大鼠胚胎成纖維細胞 2.組織來源：胚胎組織 3.產(chǎn)品規(guī)格：5×105cells/T25細胞培養(yǎng)瓶 4.細胞簡介： 大鼠胚胎成纖維細胞分離自胚胎；成纖維細胞（Fibroblast）是疏松結(jié)締組織的主要細胞成分，由胚胎時期的間充質(zhì)細胞分化而來。成纖維細胞較大，輪廓清楚，多為突起的紡錘形或星形的扁平狀結(jié)構(gòu)，其細胞核呈規(guī)則的卵圓形，核仁大而明顯。成纖維細胞功能活動旺盛，細胞質(zhì)嗜弱堿性，具明顯的蛋白質(zhì)合成和分泌活動，在一定條件下，它可以實現(xiàn)跟纖維細胞的互相轉(zhuǎn)化；成纖維細胞對不同程度的細胞變性、壞死和組織缺損的修復有著十分重要的作用。剛分離的胚胎成纖維細胞呈圓形、折光性良好，懸浮于培養(yǎng)基中。30min細胞貼壁，其中部分開始伸出偽足，表現(xiàn)為小的突起；6h后細胞基本貼壁*，伸展成梭形，胞核清晰，分布較均勻，散在生長，不聚集成團；細胞生長迅速，5-7天即呈融合狀態(tài)，細胞排列緊密，有的交叉重疊生長，平坦、胞體較大，細胞質(zhì)透明，細胞核較大，呈橢圓形，顏色淡。細胞融合，并彼此連接成網(wǎng)狀；細胞呈突起的紡錘形或星形的扁平分布。細胞呈突起的紡錘形或星形的扁平分布。該細胞常用作ES細胞培養(yǎng)常用的飼養(yǎng)層細胞，能產(chǎn)生抑制ES細胞自主分化和促進ES細胞增殖的因子，故能有效地促進ES細胞的增殖并維持其未分化特性和多潛能性，且分泌效果優(yōu)于外源添加的一些因子，而且可以為ES細胞的培養(yǎng)提供類似于體內(nèi)的微環(huán)境，故在研究哺乳動物ES細胞中得到廣泛使用。 5.方法簡介： 實驗室分離的大鼠胚胎成纖維細胞采用胰蛋白酶-膠原酶混合消化法結(jié)合差速貼壁法制備而來，細胞總量約為5×10?cells/瓶。 6.質(zhì)量檢測： 實驗室分離的大鼠胚胎成纖維細胞經(jīng)Vimentin免疫熒光鑒定，純度可達90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細菌、酵母和真菌等。 7.培養(yǎng)信息： 培養(yǎng)基含FBS、生長添加劑、Penicillin、Streptomycin等 產(chǎn)品貨號CM-R175 換液頻率每2-3天換液一次 生長特性貼壁 細胞形態(tài)成纖維細胞樣 傳代特性可傳5代左右；3代以內(nèi)狀態(tài)最佳 消化液0.25%胰蛋白酶 培養(yǎng)條件氣相：空氣，95%；CO2，5% |
冷凍保存細胞之方法？
冷凍保存方法一: 冷凍管置于4℃ 30~60 分鐘→ （-20 ℃30 分鐘*） → -80 ℃16~18 小時（或隔夜） → 液氮槽vaporphase 長期儲存。
冷凍保存方法二: 冷凍管置于已設定程序之可程序降溫機中每分鐘降1-3 ℃ 至–80 ℃ 以下， 再放入液氮槽vapor phase長期儲存。*-20 ℃不可超過1 小時， 以防止冰晶過大，造成細胞大量死亡，亦可跳過此步驟直接放入-80℃ 冰箱中，惟存活率稍微降低一些。
實驗報告：
一、分離與培養(yǎng)：
1、無菌條件下，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織，然后用PBS將此組織塊清洗2次，將成1mm3左右大小；
2、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型膠原酶），混懸10s，置37℃條件下消化10min，之后用滴管吹打制成單細胞懸液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置；
3、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液，混懸10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置，重復此步驟2-3次，直至組織*被消化；
4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過濾細胞消化液，1200r/min 離心10min，棄去上清，沉淀細胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸，接種于25cm2培養(yǎng)瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；
5、差速貼壁1h后，吸出培養(yǎng)基，按實驗需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng)；
二、免疫熒光鑒定：
1、待心房肌細胞生長至80%融合時，棄去培養(yǎng)基，用溫育的PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細胞15min；
2、PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后在4℃條件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；
3、PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后在室溫條件下，用4% BSA封閉細胞30min；
4、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗，然后將其放在4℃冰箱中孵育細胞過夜；
5、PBS沖洗細胞3次，每次10min，按1：150的比例稀釋抗α-actin的二抗， 37℃條件下放置1h；
6、用PBS沖洗3次，每次10min，在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。
小鼠 MEP1A ELISA配對抗體
小鼠 IL18R1 ELISA配對抗體
小鼠 DKK3 ELISA配對抗體
小鼠 CLEC4N / CLEC6A / Dectin-2 ELISA配對抗體
小鼠 CD34 ELISA配對抗體
小鼠 CD5 ELISA配對抗體
小鼠 Axl Kinase ELISA配對抗體
LAIR2 ELISA配對抗體
ICAM-2 / CD102 ELISA配對抗體
DLL1 ELISA配對抗體
大鼠胚胎成纖維細胞苯妥英鈉 98%氧化鉺 99.99%Anti-KLK9/FITC 熒光素標記激肽釋放9抗體IgG
(3H-1,2,3-三唑并[4,5-b]吡-3-氧基)三-1-吡咯烷基六氟鹽 氧化鉺 99.9% metals basisAnti-KLK10/FITC 熒光素標記激肽釋放10抗體IgG
7-氮雜苯并三唑-1-基氧基三(二基)膦六氟鹽 98%氟化鉺 99.99% metals basisAnti-KLK14/FITC 熒光素標記激肽釋放14抗體IgG
2-(7-氮雜苯并三氮唑)-N,N,N',N'-四甲基脲四氟酸鹽 98%金屬鉺 99.9% metals basis,粉末,50目Anti-KLRF1/NKp80/FITC 熒光素標記性受體NK-p80抗體IgG
卡特縮合劑 98% 氟化鉺 99.9% metals basisAnti-K-ras/FITC 熒光素標記原癌基因K-ras抗體IgG
2-溴-1-乙基吡四氟酸鹽 98%氯化鉺(III),六水 99.5% metals basisAnti-KT3 tag/FITC 熒光素標記KT3 tag標簽抗體IgG
雙（2-氧代-3-惡唑烷基）酰氯 97%氯化鉺(III) 六水合物 99.995% metals basisAnti-KT3 tag/HRP 辣根過氧化物標記KT3 tag標簽抗體IgG
(苯并三唑-1-基)-N,N,N',N'-二吡咯基脲六氟酯 98%溴化鉺(III) 超干, 99.99% REOAnti-KCNA5/FITC 熒光素標記通道混合相關蛋白亞型5抗體IgG
化工儀器網(wǎng)