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詳細介紹
實驗要點及說明：
1．本方法適用于貼壁細胞培養(yǎng)，而不適用于懸浮細胞培養(yǎng)，懸浮細胞可使用滴片法；
2．所使用的蓋玻片應該為優(yōu)質(zhì)玻璃，并經(jīng)過鉻酸洗液處理；
3．蓋玻片非常薄，易碎，取放蓋玻片時動作要輕；
4．如果需要更多生長狀態(tài)一致的細胞，可以使用較大的培養(yǎng)皿，但不宜過大，以避免培養(yǎng)液的浪費和增加污染機率；
5．如果細胞貼壁生長能力較差，可將蓋玻片在0.5%多聚賴氨酸溶液中浸泡5-10分鐘并自然晾干。
產(chǎn)品屬性：
產(chǎn)品名稱 | 規(guī)格 | 貨號 |
| 卵巢顆粒細胞 | 5×10?Cells/T25培養(yǎng)瓶 | GOY-01X1257 |
商品介紹：
名稱 卵巢顆粒細胞 2.組織來源：卵巢組織 3.產(chǎn)品規(guī)格：5×105cells/T25細胞培養(yǎng)瓶 4.細胞簡介： 人卵巢顆粒細胞分離自卵巢組織；卵巢是雌性動物的生殖器官，卵巢的功能是產(chǎn)生卵以及類固醇激素。卵巢的位置與睪丸相同，僅左側(cè)發(fā)育（右側(cè)已退化），呈葡萄狀，均為處于不同發(fā)育時期的卵泡，卵泡呈黃色，卵巢表面密布血管。卵巢的大小與年齡和產(chǎn)卵期有關。大多數(shù)脊椎動物有兩個卵巢，但是部分魚類的兩個卵巢融合為單個結(jié)構，而所有鳥類只有左側(cè)卵巢有機能。卵巢是位于子宮兩側(cè)的一對卵圓形的生殖器官，它的外表有一層上皮組織，其下方有薄層的結(jié)締組織。卵巢的內(nèi)部結(jié)構可分為皮質(zhì)和髓質(zhì)。皮質(zhì)位于卵巢的周圍部分，主要由卵泡和結(jié)締組織構成；髓質(zhì)位于中央，由疏松結(jié)締組織構成，其中有許多血管、淋巴管和神經(jīng)。卵巢顆粒細胞是卵巢的主要功能細胞，其增殖與分化直接影響著卵泡的生長啟動、發(fā)育、排卵、黃體形成以及甾體激素分泌等卵巢功能活動。卵巢顆粒細胞是卵泡內(nèi)的最大細胞群，也是主要的功能細胞，卵泡發(fā)育的顯著標志之一就是顆粒細胞迅速生長及增殖，而成年動物的卵泡閉鎖主要是由顆粒細胞凋亡引起，尤其在卵泡發(fā)育后期，此外，顆粒細胞還與卵泡膜細胞共同完成卵巢激素的合成，維持著有利于卵母細胞生長和成熟的微環(huán)境。細胞形狀呈圓形或橢圓形。 5.方法簡介： 實驗室分離的人卵巢顆粒細胞采用先機械分離，而后膠原酶消化，最后差速貼壁法制備而來，細胞總量約為5×10?cells/瓶。 6.質(zhì)量檢測： 實驗室分離的人卵巢顆粒細胞經(jīng)FSHR免疫熒光鑒定，純度可達90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細菌、酵母和真菌等。 7.培養(yǎng)信息： 培養(yǎng)基含FBS、生長添加劑、Penicillin、Streptomycin等 產(chǎn)品貨號CM-H192 換液頻率每2-3天換液一次 生長特性貼壁 細胞形態(tài)上皮細胞樣 傳代特性可傳1-2代 消化液0.25%胰蛋白酶 培養(yǎng)條件氣相：空氣，95%；CO2，5% |
冷凍保存細胞之方法？
冷凍保存方法一: 冷凍管置于4℃ 30~60 分鐘→ （-20 ℃30 分鐘*） → -80 ℃16~18 小時（或隔夜） → 液氮槽vaporphase 長期儲存。
冷凍保存方法二: 冷凍管置于已設定程序之可程序降溫機中每分鐘降1-3 ℃ 至–80 ℃ 以下， 再放入液氮槽vapor phase長期儲存。*-20 ℃不可超過1 小時， 以防止冰晶過大，造成細胞大量死亡，亦可跳過此步驟直接放入-80℃ 冰箱中，惟存活率稍微降低一些。
實驗報告：
一、分離與培養(yǎng)：
1、無菌條件下，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織，然后用PBS將此組織塊清洗2次，將成1mm3左右大小；
2、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型膠原酶），混懸10s，置37℃條件下消化10min，之后用滴管吹打制成單細胞懸液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置；
3、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液，混懸10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置，重復此步驟2-3次，直至組織*被消化；
4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過濾細胞消化液，1200r/min 離心10min，棄去上清，沉淀細胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸，接種于25cm2培養(yǎng)瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；
5、差速貼壁1h后，吸出培養(yǎng)基，按實驗需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng)；
二、免疫熒光鑒定：
1、待心房肌細胞生長至80%融合時，棄去培養(yǎng)基，用溫育的PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細胞15min；
2、PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后在4℃條件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；
3、PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后在室溫條件下，用4% BSA封閉細胞30min；
4、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗，然后將其放在4℃冰箱中孵育細胞過夜；
5、PBS沖洗細胞3次，每次10min，按1：150的比例稀釋抗α-actin的二抗， 37℃條件下放置1h；
6、用PBS沖洗3次，每次10min，在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。
小鼠 IL4 / Interleukin-4 (Q136D,Y139D) 桿狀病毒-昆蟲細胞裂解液 (陽性對照) (變性)
NCF-2 / NCF2 / P67phox 桿狀病毒-昆蟲細胞裂解液 (陽性對照) (變性)
大鼠 IL21 / Interleukin 21 桿狀病毒-昆蟲細胞裂解液 (陽性對照) (變性)
小鼠 Pleiotrophin / PTN / HB-GAM 桿狀病毒-昆蟲細胞裂解液 (陽性對照) (變性)
中東呼吸綜合征 MERS-CoV (HCoV-EMC/2012) Spike Protein fragment (aa 383-502) 桿狀病毒-昆蟲細胞裂解液 (陽性對照) (變性)
Bruton Tyrosine Kinase / BTK Kinase 桿狀病毒-昆蟲細胞裂解液 (陽性對照) (變性)
小鼠 CDC2 Kinase / CDK1 桿狀病毒-昆蟲細胞裂解液 (陽性對照) (變性)
小鼠 CDC37 / CDC37A 桿狀病毒-昆蟲細胞裂解液 (陽性對照) (變性)
GCAP1 / GUCA1A 桿狀病毒-昆蟲細胞裂解液 (陽性對照) (變性)
ALOX15B / 15 Lipoxygenase 2 桿狀病毒-昆蟲細胞裂解液 (陽性對照) (變性)
卵巢顆粒細胞乙酰苯 99.8%，升華純化十二 >99.0%(GC)Anti-PHD3 /FITC 熒光素標記脯羥化抗體IgG
乙酰苯 99.95%，升華純化1-二十二 80-85%Anti-phospho-FAK(pTyr577)/FITC 熒光素標記抗化粘著斑激抗體IgG
莰烯 75%甘油 AR,99%Anti-phospho-JNK1/2(pThr183/pTyr185)/FITC 熒光素標記抗化末端激1/2抗體IgG
(±)-樟腦（合成） 96%甘油 EP, BP, JP, USP級Anti-phospho GAP-43(pSer41)/FITC 熒光素標記抗化神經(jīng)生長相關蛋白43抗體IgG
乙酸異龍腦酯 90%正己 98%Anti-phospho-FAK(pSer732)/FITC 熒光素標記抗化粘著斑激抗體IgG
2-苯乙 CP,98%十六 CP,97%Anti-Phospho-FAK (Tyr861) /FITC 熒光素標記兔抗人、大、小鼠化粘著斑激抗體IgG
水楊酸 ACS, ≥99.0% 十六 98%Anti-Phospho-FAK (Tyr576/577) /FITC 熒光素標記兔抗人、大、小鼠化粘著斑激抗體IgG
苯甲 standard for GC, ≥99.5% (GC)月桂酸 natural, ≥98%, FCCAnti-Phospho-FAK (Tyr925) /FITC 熒光素標記兔抗人、大、小鼠化粘著斑激抗體IgG
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