化工儀器網(wǎng)
詳細(xì)介紹
冷凍保存細(xì)胞之方法？
冷凍保存方法一: 冷凍管置于4℃ 30~60 分鐘→ （-20 ℃30 分鐘*） → -80 ℃16~18 小時(shí)（或隔夜） → 液氮槽vaporphase 長期儲(chǔ)存。
冷凍保存方法二: 冷凍管置于已設(shè)定程序之可程序降溫機(jī)中每分鐘降1-3 ℃ 至–80 ℃ 以下， 再放入液氮槽vapor phase長期儲(chǔ)存。*-20 ℃不可超過1 小時(shí)， 以防止冰晶過大，造成細(xì)胞大量死亡，亦可跳過此步驟直接放入-80℃ 冰箱中，惟存活率稍微降低一些。
產(chǎn)品屬性：
產(chǎn)品名稱 | 規(guī)格 | 貨號(hào) |
| 前列腺癌組織源細(xì)胞 | 5×10?Cells/T25培養(yǎng)瓶 | GOY-01X1159 |
商品介紹：
名稱 前列腺癌組織源細(xì)胞 2.組織來源：前列腺癌組織 3.產(chǎn)品規(guī)格：5×105cells/T25細(xì)胞培養(yǎng)瓶 4.細(xì)胞簡介： 人前列腺癌組織源細(xì)胞分離自患有前列腺癌病人的前列腺癌組織；前列腺癌是指發(fā)生在前列腺的上皮性惡性腫瘤。2004年WHO《泌尿系統(tǒng)及男性生殖器官腫瘤病理學(xué)和遺傳學(xué)》中前列腺癌病理類型上包括腺癌（腺泡腺癌）、導(dǎo)管腺癌、尿路上皮癌、鱗狀細(xì)胞癌、腺鱗癌。其中前列腺腺癌占95%以上，因此，通常我們所說的前列腺癌就是指前列腺腺癌。前列腺癌的發(fā)生與遺傳因素有關(guān)，如果家族中無患前列腺癌者的相對(duì)危險(xiǎn)度為1，絕對(duì)危險(xiǎn)度為8；則遺傳型前列腺癌家族成員患前列腺癌的相對(duì)危險(xiǎn)度為5，絕對(duì)危險(xiǎn)度為35～45。此外，前列腺癌的發(fā)病與性活動(dòng)、飲食習(xí)慣有關(guān)。性活動(dòng)較多者患前列腺癌的風(fēng)險(xiǎn)增加。高脂肪飲食與發(fā)病也有一定關(guān)系。此外，前列腺癌的發(fā)病與種族、地區(qū)、宗教信仰可能有關(guān)。 5.方法簡介： 實(shí)驗(yàn)室分離的癌組織源細(xì)胞采用膠原酶消化、經(jīng)Percoll離心純化制備而來，細(xì)胞總量約為5×10?cells/瓶。 6.質(zhì)量檢測： 實(shí)驗(yàn)室分離的人前列腺癌組織源細(xì)胞經(jīng)檢測，純度可達(dá)90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細(xì)菌、酵母和真菌等。 7.培養(yǎng)信息： 培養(yǎng)基含FBS、生長添加劑、Penicillin、Streptomycin等 產(chǎn)品貨號(hào)CM-H155 換液頻率每2-3天換液一次 生長特性貼壁 細(xì)胞形態(tài)梭形、多角形 傳代特性可傳5代左右；3代以內(nèi)狀態(tài)最佳 消化液0.25%胰蛋白酶 培養(yǎng)條件氣相：空氣，95%；CO2，5% |
實(shí)驗(yàn)要點(diǎn)及說明：
1．本方法適用于貼壁細(xì)胞培養(yǎng)，而不適用于懸浮細(xì)胞培養(yǎng)，懸浮細(xì)胞可使用滴片法；
2．所使用的蓋玻片應(yīng)該為優(yōu)質(zhì)玻璃，并經(jīng)過鉻酸洗液處理；
3．蓋玻片非常薄，易碎，取放蓋玻片時(shí)動(dòng)作要輕；
4．如果需要更多生長狀態(tài)一致的細(xì)胞，可以使用較大的培養(yǎng)皿，但不宜過大，以避免培養(yǎng)液的浪費(fèi)和增加污染機(jī)率；
5．如果細(xì)胞貼壁生長能力較差，可將蓋玻片在0.5%多聚賴氨酸溶液中浸泡5-10分鐘并自然晾干。
實(shí)驗(yàn)報(bào)告：
一、分離與培養(yǎng)：
1、無菌條件下，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織，然后用PBS將此組織塊清洗2次，將成1mm3左右大小；
2、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型膠原酶），混懸10s，置37℃條件下消化10min，之后用滴管吹打制成單細(xì)胞懸液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置；
3、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液，混懸10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置，重復(fù)此步驟2-3次，直至組織*被消化；
4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過濾細(xì)胞消化液，1200r/min 離心10min，棄去上清，沉淀細(xì)胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸，接種于25cm2培養(yǎng)瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；
5、差速貼壁1h后，吸出培養(yǎng)基，按實(shí)驗(yàn)需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng)；
二、免疫熒光鑒定：
1、待心房肌細(xì)胞生長至80%融合時(shí)，棄去培養(yǎng)基，用溫育的PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細(xì)胞15min；
2、PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后在4℃條件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；
3、PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后在室溫條件下，用4% BSA封閉細(xì)胞30min；
4、按1: 100的比例稀釋?duì)?actin一抗，然后將其放在4℃冰箱中孵育細(xì)胞過夜；
5、PBS沖洗細(xì)胞3次，每次10min，按1：150的比例稀釋抗α-actin的二抗， 37℃條件下放置1h；
6、用PBS沖洗3次，每次10min，在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。
Wnt-1 基因全長ORF克隆 (表達(dá)載體), 帶HA標(biāo)簽
Wnt-1 基因全長ORF克隆 (表達(dá)載體), 帶His標(biāo)簽
Wnt-1 基因全長ORF克隆 (表達(dá)載體), 帶FLAG標(biāo)簽
BMP-4 基因全長ORF克隆 (表達(dá)載體), 帶FLAG標(biāo)簽
ErbB4 / HER4 轉(zhuǎn)錄變體JM-a / CVT-2 基因全長ORF克隆 (表達(dá)載體), 帶His標(biāo)簽
PDCD1LG2 / PD-L2 基因全長ORF克隆 (表達(dá)載體), 帶His標(biāo)簽
DCN / Decorin 轉(zhuǎn)錄變體A1 基因全長ORF克隆 (表達(dá)載體), 帶HA標(biāo)簽
小鼠 FLT3 基因全長ORF克隆 (表達(dá)載體), 無標(biāo)簽
ATPIF1 基因全長ORF克隆 (表達(dá)載體), 帶Myc標(biāo)簽
PLXNA1 基因全長ORF克隆 (表達(dá)載體), 無標(biāo)簽
前列腺癌組織源細(xì)胞15.6-1000 pg/mL ELISA Kit for Biopterin
15.6-1000 pg/mL ELISA Kit for Human Integrin beta-1
15.6-1000 ng/mL 妊娠特異性β1-糖蛋白1ELISA試劑盒
0.78-50 ng/mL 人堿性成纖維細(xì)胞生長因子(bFGF)ELISA試劑盒
0.156-10 ng/mL 人犬尿(Kynureninase)ELISA試劑盒
吡哆醇Y培養(yǎng)基 英文名稱：Pyridoxine Y medium 產(chǎn)品規(guī)格：250g
1.56-100 ng/mL 豬乙型腦炎病毒(JEV)核酸檢測試劑盒(RT-PCR法)
改良Camp-BAP氏瓊脂添加劑B 英文名稱：Modified Camp-BAP Agar additive B 產(chǎn)品規(guī)格：1ml*5
78-5000 pg/mL 人血管性血友病因子裂解蛋白(ADAMTS13/vWF-cp)ELISA試劑盒
3.12-200 pg/mL 人神經(jīng)絲重鏈(NFH)ELISA試劑盒
化工儀器網(wǎng)