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上海谷研實業(yè)有限公司 |
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| 參考價 | 面議 |
更新時間：2022-04-24 14:18:58瀏覽次數(shù)：232
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| 供貨周期 | 現(xiàn)貨 | 規(guī)格 | 5×10?Cells/T25培養(yǎng)瓶 |
|---|---|---|---|
| 貨號 | GOY-01X1413 | 應(yīng)用領(lǐng)域 | 化工 |
| 主要用途 | 產(chǎn)品僅供科研使用 |
產(chǎn)品屬性：
產(chǎn)品名稱 | 規(guī)格 | 貨號 |
| 大鼠陰莖白膜成纖維細(xì)胞 | 5×10?Cells/T25培養(yǎng)瓶 | GOY-01X1413 |
商品介紹：
名稱 大鼠陰莖白膜成纖維細(xì)胞 2.組織來源： 陰莖白膜組織 3.產(chǎn)品規(guī)格：5×105cells/T25細(xì)胞培養(yǎng)瓶 4.細(xì)胞簡介： 大鼠陰莖白膜成纖維細(xì)胞分離自陰莖白膜組織；海綿體，又稱海綿體肌，是最硬的平滑肌和結(jié)締組織。海綿體是一種勃起組織，外面包有堅厚的白膜，內(nèi)部由結(jié)締組織和平滑肌組成海綿狀支架，其腔隙與血管相通。成纖維細(xì)胞（Fibroblast）是疏松結(jié)締組織的主要細(xì)胞成分，由胚胎時期的間充質(zhì)細(xì)胞分化而來。成纖維細(xì)胞較大，輪廓清楚，多為突起的紡錘形或星形的扁平狀結(jié)構(gòu)，其細(xì)胞核呈規(guī)則的卵圓形，核仁大而明顯。成纖維細(xì)胞功能活動旺盛，細(xì)胞質(zhì)嗜弱堿性，具明顯的蛋白質(zhì)合成和分泌活動，在一定條件下，它可以實現(xiàn)跟纖維細(xì)胞的互相轉(zhuǎn)化；成纖維細(xì)胞對不同程度的細(xì)胞變性、壞死和組織缺損的修復(fù)有著十分重要的作用。剛分離的陰莖白膜成纖維細(xì)胞呈圓形、折光性良好，懸浮于培養(yǎng)基中。30min細(xì)胞貼壁，其中部分開始伸出偽足，表現(xiàn)為小的突起；6h后細(xì)胞基本貼壁*，伸展成梭形，胞核清晰，分布較均勻，散在生長，不聚集成團；細(xì)胞生長迅速，5-7天即呈融合狀態(tài)，細(xì)胞排列緊密，有的交叉重疊生長，平坦、胞體較大，細(xì)胞質(zhì)透明，細(xì)胞核較大，呈橢圓形，顏色淡。細(xì)胞融合，并彼此連接成網(wǎng)狀；細(xì)胞呈突起的紡錘形或星形的扁平分布。陰莖白膜成纖維細(xì)胞（PLFs）作為牙周膜的主體細(xì)胞，是牙周膜主要的間質(zhì)細(xì)胞，它不僅具有合成膠原、基質(zhì)、彈力纖維和糖蛋白的功能，還有吸收膠原吞噬異物的能力，還參與了牙周組織的病變、修復(fù)及再生過程?，F(xiàn)在，利用牙周膜細(xì)胞建立體外模型，已經(jīng)成為有關(guān)員研究牙周組織疾病的重要手段。 本公司的大鼠陰莖白膜成纖維細(xì)胞采用膠原酶-胰蛋白酶聯(lián)合消化法制備而來，細(xì)胞總量約為5×105cells/瓶；細(xì)胞經(jīng)Vimentin免疫熒光鑒定，純度可達(dá)90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細(xì)菌、酵母和真菌等。 5.培養(yǎng)基信息： DMEM[H]、FBS、成纖維細(xì)胞生長添加劑、Penicillin、Streptomycin等 |
冷凍保存細(xì)胞之方法？
冷凍保存方法一: 冷凍管置于4℃ 30~60 分鐘→ （-20 ℃30 分鐘*） → -80 ℃16~18 小時（或隔夜） → 液氮槽vaporphase 長期儲存。
冷凍保存方法二: 冷凍管置于已設(shè)定程序之可程序降溫機中每分鐘降1-3 ℃ 至–80 ℃ 以下， 再放入液氮槽vapor phase長期儲存。*-20 ℃不可超過1 小時， 以防止冰晶過大，造成細(xì)胞大量死亡，亦可跳過此步驟直接放入-80℃ 冰箱中，惟存活率稍微降低一些。
實驗要點及說明：
1．本方法適用于貼壁細(xì)胞培養(yǎng)，而不適用于懸浮細(xì)胞培養(yǎng)，懸浮細(xì)胞可使用滴片法；
2．所使用的蓋玻片應(yīng)該為優(yōu)質(zhì)玻璃，并經(jīng)過鉻酸洗液處理；
3．蓋玻片非常薄，易碎，取放蓋玻片時動作要輕；
4．如果需要更多生長狀態(tài)一致的細(xì)胞，可以使用較大的培養(yǎng)皿，但不宜過大，以避免培養(yǎng)液的浪費和增加污染機率；
5．如果細(xì)胞貼壁生長能力較差，可將蓋玻片在0.5%多聚賴氨酸溶液中浸泡5-10分鐘并自然晾干。
實驗報告：
一、分離與培養(yǎng)：
1、無菌條件下，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織，然后用PBS將此組織塊清洗2次，將成1mm3左右大??；
2、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型膠原酶），混懸10s，置37℃條件下消化10min，之后用滴管吹打制成單細(xì)胞懸液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置；
3、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液，混懸10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置，重復(fù)此步驟2-3次，直至組織*被消化；
4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過濾細(xì)胞消化液，1200r/min 離心10min，棄去上清，沉淀細(xì)胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸，接種于25cm2培養(yǎng)瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；
5、差速貼壁1h后，吸出培養(yǎng)基，按實驗需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng)；
二、免疫熒光鑒定：
1、待心房肌細(xì)胞生長至80%融合時，棄去培養(yǎng)基，用溫育的PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細(xì)胞15min；
2、PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后在4℃條件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；
3、PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后在室溫條件下，用4% BSA封閉細(xì)胞30min；
4、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗，然后將其放在4℃冰箱中孵育細(xì)胞過夜；
5、PBS沖洗細(xì)胞3次，每次10min，按1：150的比例稀釋抗α-actin的二抗， 37℃條件下放置1h；
6、用PBS沖洗3次，每次10min，在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。
GPR56 / TM7LN4 細(xì)胞裂解液 (陽性對照) (變性)
RET Kinase 細(xì)胞裂解液 (陽性對照) (變性)
小鼠 AGRP / AgRP 細(xì)胞裂解液 (陽性對照) (變性)
CD93 / C1QR1 細(xì)胞裂解液 (陽性對照) (變性)
小鼠 EGF / Epidermal Growth Factor 細(xì)胞裂解液 (陽性對照) (變性)
小鼠 CD59a / MAC-IP 細(xì)胞裂解液 (陽性對照) (變性)
小鼠 CD79B / B29 細(xì)胞裂解液 (陽性對照) (變性)
小鼠 LRIG1 / LIG-1 細(xì)胞裂解液 (陽性對照) (變性)
小鼠 CD33 / Siglec-3 細(xì)胞裂解液 (陽性對照) (變性)
CD93 / C1QR1 細(xì)胞裂解液 (陽性對照) (變性)
大鼠陰莖白膜成纖維細(xì)胞白凡士林 醫(yī)用級5-羧基熒光素琥珀酰亞酯 90%Anti-DDB2/FITC 熒光素標(biāo)記損傷DNA結(jié)合蛋白2抗體IgG
黃凡士林 醫(yī)用級5(6)-羧基熒光素 95%Anti-DDC/FITC 熒光素標(biāo)記多巴脫羧抗體IgG
氫加蘭他敏 98%5(6)-羧基熒光素琥珀酰亞酯 96%Anti-DEC-205/CD205/Ly75/FITC 熒光素標(biāo)記CD205抗體IgG
2,2,6-基-4H-1,3-二噁英-4-酮 90%6-羧基熒光素琥珀酰亞酯 90%Anti-Dectin-1/CLECSF12/FITC 熒光素標(biāo)記C型凝集素結(jié)構(gòu)域家族7成員A抗體IgG
Amberlite? IR-120陽離子交換樹脂 鈉型6-羧基四甲基羅丹明 for fluorescence, ≥90%Anti-Dectin-2/CLECSF10/CLEC6A/FITC 熒光素標(biāo)記C型凝集素結(jié)構(gòu)域家族6成員A抗體IgG
Amberlyst® 15離子交換樹脂 濕6-羧基四甲基羅丹明琥珀酰亞酯 for fluorescenceAnti-Dectin-1/CLECSF12/RBITC 紅色熒光素羅丹明標(biāo)記C型凝集素結(jié)構(gòu)域家族7成員A抗體IgG
Amberlite® XAD16非離子型大孔樹脂 20-60 mesh4,’6-二脒基-2-苯基 98%Anti-DDX4/MVH/FITC 熒光素標(biāo)記DDX4抗體IgG
Amberlite XAD7HP 離子交換樹脂 Mesh 20-60二氫羅丹明123 95%Anti-Defensin Beta1/FITC 熒光素標(biāo)記防御素β1抗體IgG
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