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詳細介紹
產(chǎn)品屬性：
產(chǎn)品名稱 | 規(guī)格 | 貨號 |
| 鼻黏膜成纖維細胞 | 5×10?Cells/T25培養(yǎng)瓶 | GOY-01X1337 |
商品介紹：
名稱 鼻黏膜成纖維細胞 2.組織來源：鼻粘膜組織 3.產(chǎn)品規(guī)格：5×105cells/T25細胞培養(yǎng)瓶 4.細胞簡介： 人鼻黏膜成纖維細胞分離自鼻黏膜組織；黏膜是覆蓋在人體內(nèi)消化、呼吸、泌尿、生殖等器官管腔內(nèi)壁的一層組織結(jié)構(gòu)，由上皮組織和疏松結(jié)締組織構(gòu)成。根據(jù)部位不同，有口腔黏膜、胃腸黏膜、鼻腔黏膜、氣管黏膜、陰道黏膜、眼瞼黏膜等不同名稱。它們的結(jié)構(gòu)也因功能、部位不一而不盡相同。鼻腔黏膜，簡稱鼻黏膜，覆蓋于鼻腔表面，黏膜下方為軟骨、骨或骨骼肌。成纖維細胞是結(jié)締組織的主要細胞成分，由胚胎時期的間充質(zhì)細胞分化而來。成纖維細胞較大，輪廓清楚，多為突起的紡錘形或星形的扁平狀結(jié)構(gòu)，其細胞核呈規(guī)則的卵圓形，核仁大而明顯。成纖維細胞功能活動旺盛，細胞質(zhì)嗜弱堿性，具明顯的蛋白質(zhì)合成和分泌活動，在一定條件下，它可以實現(xiàn)跟纖維細胞的互相轉(zhuǎn)化；成纖維細胞對不同程度的細胞變性、壞死和組織缺損的修復有著十分重要的作用。剛分離的成纖維細胞呈圓形、折光性良好，懸浮于培養(yǎng)基中。30min細胞貼壁，其中部分開始伸出偽足，表現(xiàn)為小的突起；6h后細胞基本貼壁*，伸展成梭形，胞核清晰，分布較均勻，散在生長，不聚集成團；細胞排列緊密，有的交叉重疊生長，平坦、胞體較大，細胞質(zhì)透明，細胞核較大，呈橢圓形，顏色淡。細胞融合，并彼此連接成網(wǎng)狀；細胞呈突起的紡錘形或星形的扁平分布。 5.方法簡介： 實驗室分離的人鼻黏膜成纖維細胞采用胰蛋白酶-膠原酶混合消化法結(jié)合差速貼壁法，并通過成纖維細胞專用培養(yǎng)基培養(yǎng)篩選制備而來，細胞總量約為5×105cells/瓶。 6.質(zhì)量檢測： 實驗室分離的人鼻黏膜成纖維細胞經(jīng)Vimentin免疫熒光鑒定，純度可達90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細菌、酵母和真菌等。 7.培養(yǎng)信息： 培養(yǎng)基含FBS、生長添加劑、Penicillin、Streptomycin等 產(chǎn)品貨號CM-H227 換液頻率每2-3天換液一次 生長特性貼壁 細胞形態(tài)成纖維細胞樣 傳代特性可傳3-5代左右 消化液0.25%胰蛋白酶 培養(yǎng)條件氣相：空氣，95%；CO2，5% |
冷凍保存細胞之方法？
冷凍保存方法一: 冷凍管置于4℃ 30~60 分鐘→ （-20 ℃30 分鐘*） → -80 ℃16~18 小時（或隔夜） → 液氮槽vaporphase 長期儲存。
冷凍保存方法二: 冷凍管置于已設(shè)定程序之可程序降溫機中每分鐘降1-3 ℃ 至–80 ℃ 以下， 再放入液氮槽vapor phase長期儲存。*-20 ℃不可超過1 小時， 以防止冰晶過大，造成細胞大量死亡，亦可跳過此步驟直接放入-80℃ 冰箱中，惟存活率稍微降低一些。
實驗要點及說明：
1．本方法適用于貼壁細胞培養(yǎng)，而不適用于懸浮細胞培養(yǎng)，懸浮細胞可使用滴片法；
2．所使用的蓋玻片應該為優(yōu)質(zhì)玻璃，并經(jīng)過鉻酸洗液處理；
3．蓋玻片非常薄，易碎，取放蓋玻片時動作要輕；
4．如果需要更多生長狀態(tài)一致的細胞，可以使用較大的培養(yǎng)皿，但不宜過大，以避免培養(yǎng)液的浪費和增加污染機率；
5．如果細胞貼壁生長能力較差，可將蓋玻片在0.5%多聚賴氨酸溶液中浸泡5-10分鐘并自然晾干。
實驗報告：
一、分離與培養(yǎng)：
1、無菌條件下，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織，然后用PBS將此組織塊清洗2次，將成1mm3左右大??；
2、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型膠原酶），混懸10s，置37℃條件下消化10min，之后用滴管吹打制成單細胞懸液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置；
3、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液，混懸10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置，重復此步驟2-3次，直至組織*被消化；
4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過濾細胞消化液，1200r/min 離心10min，棄去上清，沉淀細胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸，接種于25cm2培養(yǎng)瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；
5、差速貼壁1h后，吸出培養(yǎng)基，按實驗需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng)；
二、免疫熒光鑒定：
1、待心房肌細胞生長至80%融合時，棄去培養(yǎng)基，用溫育的PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細胞15min；
2、PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后在4℃條件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；
3、PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后在室溫條件下，用4% BSA封閉細胞30min；
4、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗，然后將其放在4℃冰箱中孵育細胞過夜；
5、PBS沖洗細胞3次，每次10min，按1：150的比例稀釋抗α-actin的二抗， 37℃條件下放置1h；
6、用PBS沖洗3次，每次10min，在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。
CLM-9 / TREM4 / CD300LG 細胞裂解液 (陽性對照) (變性)
BTC / Betacellulin 細胞裂解液 (陽性對照) (變性)
Siglec-2 / CD22 (aa 176-687) 細胞裂解液 (陽性對照) (變性)
TSPAN8 / Tetraspanin 8 / TM4SF3 細胞裂解液 (陽性對照) (變性)
食蟹猴 Tie2 / TEK 細胞裂解液 (陽性對照) (變性)
食蟹猴 CD86 / B7-2 細胞裂解液 (陽性對照) (變性)
食蟹猴 ACE2 / Angiotensin-Converting Enzyme 2 細胞裂解液 (陽性對照) (變性)
大鼠 TrkA / NTRK1 細胞裂解液 (陽性對照) (變性)
小鼠 CREG / CREG1 細胞裂解液 (陽性對照) (變性)
小鼠 IL17RA / IL17R / CD217 細胞裂解液 (陽性對照) (變性)
鼻黏膜成纖維細胞人H-rasAnti-Phospho PTPN3 (PTPH1)(Ser459) AntibodyAKT蛋白檢測試劑盒
大鼠α1酸性糖蛋白Anti-Phospho RAD17 (Ser646) AntibodyAP2A2檢測試劑盒
人c-sisAnti-Phospho RAF1 (Ser301) Antibody脂肪炎癥因子檢測試劑盒
小鼠一氧化氮合成Anti-Phospho RAF1 (Ser642) Antibodyapelin 12檢測試劑盒
小鼠誘導型一氧化氮合成Anti-Phospho RAPGEF1 (Tyr504) Antibodyapelin 13檢測試劑盒
大鼠內(nèi)皮型一氧化氮合成3Anti-Phospho RB1 (Ser780) Antibodyapelin 36檢測試劑盒
人c-junAnti-Phospho RHO (Ser334) AntibodyArgonaut-2蛋白檢測試劑盒
人c-fosAnti-Phospho RPA2 (S33) AntibodyATP檢測試劑盒
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