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詳細(xì)介紹
冷凍保存細(xì)胞之方法？
冷凍保存方法一: 冷凍管置于4℃ 30~60 分鐘→ （-20 ℃30 分鐘*） → -80 ℃16~18 小時（或隔夜） → 液氮槽vaporphase 長期儲存。
冷凍保存方法二: 冷凍管置于已設(shè)定程序之可程序降溫機(jī)中每分鐘降1-3 ℃ 至–80 ℃ 以下， 再放入液氮槽vapor phase長期儲存。*-20 ℃不可超過1 小時， 以防止冰晶過大，造成細(xì)胞大量死亡，亦可跳過此步驟直接放入-80℃ 冰箱中，惟存活率稍微降低一些。
產(chǎn)品屬性：
產(chǎn)品名稱 | 規(guī)格 | 貨號 |
| 小鼠小腸Cajal間質(zhì)細(xì)胞 | 5×10?Cells/T25培養(yǎng)瓶 | GOY-01X1265 |
商品介紹：
名稱 小鼠小腸Cajal間質(zhì)細(xì)胞 2.組織來源：小腸組織 3.產(chǎn)品規(guī)格：5×105cells/T25細(xì)胞培養(yǎng)瓶 4.細(xì)胞簡介： 小鼠小腸Cajal間質(zhì)細(xì)胞分離自小腸組織；小腸位于腹中，上端接幽門與胃相通，下端通過闌門與大腸相連，是食物消化吸收的主要場所。小腸盤曲于腹腔內(nèi)，上連胃幽門，下接盲腸，分為十二指腸、空腸和回腸三部分。小腸內(nèi)消化是至關(guān)重要的，因?yàn)槭澄锝?jīng)過小腸內(nèi)胰液、膽汁和小腸液的化學(xué)性消化及小腸運(yùn)動的機(jī)械性消化后，基本上完成了消化過程，同時營養(yǎng)物質(zhì)被小腸粘膜吸收了。小腸管壁由粘膜、粘膜下層、肌層和漿膜構(gòu)成。其結(jié)構(gòu)特點(diǎn)是管壁有環(huán)形皺襞，粘膜有許多絨毛，絨毛根部的上皮下陷至固有層，形成管狀的腸腺，其開口位于絨毛根部之間。絨毛和腸腺與小腸的消化和吸收功能關(guān)系密切；構(gòu)成腸腺的細(xì)胞有柱狀細(xì)胞、杯狀細(xì)胞、潘氏細(xì)胞和未分化細(xì)胞。柱狀細(xì)胞和內(nèi)分泌細(xì)胞與絨毛上皮相似，接近絨毛的柱狀細(xì)胞與吸收細(xì)胞相似，絨毛深部的柱狀細(xì)胞微絨毛少而短，不形成紋狀緣。Cajal間質(zhì)細(xì)胞（ICC）是一類主要分布于胃腸道的間質(zhì)細(xì)胞，是胃腸道的起搏細(xì)胞和信號傳導(dǎo)細(xì)胞，與肌細(xì)胞以及末梢神經(jīng)元有著緊密的關(guān)系，具有激發(fā)和促進(jìn)胃腸蠕動的作用。借助于電子顯微鏡技術(shù)，清楚觀察到了ICC位置分布和內(nèi)部精細(xì)結(jié)構(gòu)；應(yīng)用免疫熒光等生化技術(shù)，發(fā)現(xiàn)了其特殊表達(dá)的c-kit蛋白；利用電生理技術(shù)，得知多種胃腸動力障礙疾病也與其異常有關(guān)。多年來，學(xué)者逐漸在胃腸道、膽道、膀胱、子宮等部位發(fā)現(xiàn)了ICC的蹤跡，并試圖闡述其與某些疾病的發(fā)生機(jī)制。 5.方法簡介： 實(shí)驗(yàn)室分離的小鼠小腸Cajal間質(zhì)細(xì)胞采用膠原酶消化法結(jié)合組織貼塊法制備而來，細(xì)胞總量約為5×10?cells/瓶。 6.質(zhì)量檢測： 實(shí)驗(yàn)室分離的小鼠小腸Cajal間質(zhì)細(xì)胞經(jīng)c-kit免疫熒光鑒定，純度可達(dá)90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細(xì)菌、酵母和真菌等。 7.培養(yǎng)信息： 培養(yǎng)基含FBS、生長添加劑、Penicillin、Streptomycin等 產(chǎn)品貨號CM-M195 換液頻率每2-3天換液一次 生長特性貼壁 細(xì)胞形態(tài)成纖維細(xì)胞樣 傳代特性可傳1-2代 消化液0.25%胰蛋白酶 培養(yǎng)條件氣相：空氣，95%；CO2，5% |
實(shí)驗(yàn)要點(diǎn)及說明：
1．本方法適用于貼壁細(xì)胞培養(yǎng)，而不適用于懸浮細(xì)胞培養(yǎng)，懸浮細(xì)胞可使用滴片法；
2．所使用的蓋玻片應(yīng)該為優(yōu)質(zhì)玻璃，并經(jīng)過鉻酸洗液處理；
3．蓋玻片非常薄，易碎，取放蓋玻片時動作要輕；
4．如果需要更多生長狀態(tài)一致的細(xì)胞，可以使用較大的培養(yǎng)皿，但不宜過大，以避免培養(yǎng)液的浪費(fèi)和增加污染機(jī)率；
5．如果細(xì)胞貼壁生長能力較差，可將蓋玻片在0.5%多聚賴氨酸溶液中浸泡5-10分鐘并自然晾干。
實(shí)驗(yàn)報(bào)告：
一、分離與培養(yǎng)：
1、無菌條件下，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織，然后用PBS將此組織塊清洗2次，將成1mm3左右大小；
2、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型膠原酶），混懸10s，置37℃條件下消化10min，之后用滴管吹打制成單細(xì)胞懸液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置；
3、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液，混懸10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置，重復(fù)此步驟2-3次，直至組織*被消化；
4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過濾細(xì)胞消化液，1200r/min 離心10min，棄去上清，沉淀細(xì)胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸，接種于25cm2培養(yǎng)瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；
5、差速貼壁1h后，吸出培養(yǎng)基，按實(shí)驗(yàn)需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng)；
二、免疫熒光鑒定：
1、待心房肌細(xì)胞生長至80%融合時，棄去培養(yǎng)基，用溫育的PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細(xì)胞15min；
2、PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后在4℃條件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；
3、PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后在室溫條件下，用4% BSA封閉細(xì)胞30min；
4、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗，然后將其放在4℃冰箱中孵育細(xì)胞過夜；
5、PBS沖洗細(xì)胞3次，每次10min，按1：150的比例稀釋抗α-actin的二抗， 37℃條件下放置1h；
6、用PBS沖洗3次，每次10min，在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。
TLR4 / CD284 桿狀病毒-昆蟲細(xì)胞裂解液 (陽性對照) (變性)
大鼠 CLP1 / COLEC12 桿狀病毒-昆蟲細(xì)胞裂解液 (陽性對照) (變性)
小鼠 Tie2 / TEK (aa 770-1122) 桿狀病毒-昆蟲細(xì)胞裂解液 (陽性對照) (變性)
小鼠 ENPEP / Aminopeptidase A 桿狀病毒-昆蟲細(xì)胞裂解液 (陽性對照) (變性)
PSG6 / PSG10 桿狀病毒-昆蟲細(xì)胞裂解液 (陽性對照) (變性)
MAX / MYC 桿狀病毒-昆蟲細(xì)胞裂解液 (陽性對照) (變性)
IL17 / IL17A 桿狀病毒-昆蟲細(xì)胞裂解液 (陽性對照) (變性)
STK40 桿狀病毒-昆蟲細(xì)胞裂解液 (陽性對照) (變性)
nemo-like kinase / NLK 桿狀病毒-昆蟲細(xì)胞裂解液 (陽性對照) (變性)
AMPK (G1/B1/A2) Heterotrimer 桿狀病毒-昆蟲細(xì)胞裂解液 (陽性對照) (變性)
小鼠小腸Cajal間質(zhì)細(xì)胞N,N'-二環(huán)己基碳二亞 CP，95.0% 乙酸 98%chloramphenicol/OVA 偶聯(lián)雞卵白蛋白蛋白
胍硝酸鹽 99%D-泛 分析標(biāo)準(zhǔn)品Gentamicin/BSA 素偶聯(lián)牛血清白蛋白
N-芐乙 96%D-泛 98%Gentamicin/OVA 素偶聯(lián)雞卵白蛋白
1,1-環(huán)丁烷二甲酸 99%DL-泛 99%Tetracycline/BSA 四環(huán)素偶聯(lián)牛血清白蛋白
12-冠-4 98%化鈣 CP,98%Gentamicin/FITC 熒光素標(biāo)記素
二苯并-18-冠-6- 98%酸鈣 SUTetracycline/OVA 四環(huán)素偶聯(lián)雞卵白蛋白
N-十二烷基-2-吡咯烷酮 99%酸鈣 98%Oxytetracycline/BSA 土霉素偶聯(lián)牛血清白蛋白
太古油 CP,70%氫酸 AR,≥47.0%Oxytetracycline/OVA 土霉素偶聯(lián)雞卵白蛋白
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