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詳細介紹
實驗要點及說明：
1．本方法適用于貼壁細胞培養(yǎng)，而不適用于懸浮細胞培養(yǎng)，懸浮細胞可使用滴片法；
2．所使用的蓋玻片應該為優(yōu)質玻璃，并經過鉻酸洗液處理；
3．蓋玻片非常薄，易碎，取放蓋玻片時動作要輕；
4．如果需要更多生長狀態(tài)一致的細胞，可以使用較大的培養(yǎng)皿，但不宜過大，以避免培養(yǎng)液的浪費和增加污染機率；
5．如果細胞貼壁生長能力較差，可將蓋玻片在0.5%多聚賴氨酸溶液中浸泡5-10分鐘并自然晾干。
產品屬性：
產品名稱 | 規(guī)格 | 貨號 |
| 小鼠視網膜Muller細胞 | 5×10?Cells/T25培養(yǎng)瓶 | GOY-01X1057 |
商品介紹：
名稱 小鼠視網膜Muller細胞 2.組織來源：視網膜組織 3.產品規(guī)格：5×105cells/T25細胞培養(yǎng)瓶 4.細胞簡介： 小鼠視網膜Muller細胞分離自視網膜組織；視網膜居于眼球壁的內層，是一層透明的薄膜。視網膜由色素上皮層和視網膜感覺層組成，兩層間在病理情況下可分開，稱為視網膜脫離。色素上皮層與脈絡膜緊密相連，由色素上皮細胞組成，它們具有支持和營養(yǎng)光感受器細胞、遮光、散熱以及再生和修復等作用。組織學上視網膜分為10層，由外向內分別為：色素上皮層、視錐、視桿細胞層、外界膜、外顆粒層、外叢狀層、內顆粒層、內叢狀層、神經節(jié)細胞層、神經纖維層、內界膜。視網膜內層為襯于血管膜內面的一層薄膜，有感光作用；后部鼻側有一視神經乳頭。視網膜上的感覺層是由三個神經元組成。第一神經元是視細胞層，專司感光，它包括錐細胞和桿細胞。視桿細胞主要在離中心凹較遠的視網膜上，而視錐細胞則在中心凹處最多。第二層叫雙節(jié)細胞，約有10到數(shù)百個視細胞通過雙節(jié)細胞與一個神經節(jié)細胞相聯(lián)系，負責聯(lián)絡作用。第三層叫節(jié)細胞層，專管傳導。視網膜是一層菲薄的但又非常復雜的結構，它貼于眼球的后壁部，傳遞來自視網膜感受器沖動的神經纖維跨越視網膜表面，經由視神經到達出口。視網膜的分辨力是不均勻的，在黃斑區(qū)，其分辨能力*。視網膜Muller細胞作為視網膜中的主要膠質細胞，大約占視網膜膠質細胞的90%，因而在視網膜疾病中起著何種作用也受到越來越多的關注。在超微結構水平上，Muller細胞的胞質似乎比臨近的其他細胞更高的電子密度，更發(fā)達的內質網，細胞核是典型的卵圓形或多角形。但在不同物種中或同一物種中的不同部位，Muller細胞形態(tài)也會有所差異的。視網膜Muller細胞是一種特化的神經膠質細胞，不僅具有維持視網膜的正常結構和功能的作用，并調制視網膜神經元活動，還能參與多種病理過程，尤其是眼底增殖性病變，如增生性玻璃體視網膜病變、增生性糖尿病視網膜病變等，體外培養(yǎng)Muller細胞是研究這些增殖性病變途徑之一。 5.方法簡介： 實驗室分離的小鼠視網膜Muller細胞采用膠原酶消化法和胰蛋白酶反復消化法制備而來，細胞總量約為5×10?cells/瓶。 6.質量檢測： 實驗室分離的小鼠視網膜Muller細胞經GFAP免疫熒光鑒定，純度可達90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細菌、酵母和真菌等。 7.培養(yǎng)信息： 培養(yǎng)基含FBS、生長添加劑、Penicillin、Streptomycin等 產品貨號CM-M117 換液頻率每2-3天換液一次 生長特性貼壁 細胞形態(tài)梭形、多角形 傳代特性可傳3代左右 消化液0.25%胰蛋白酶 培養(yǎng)條件氣相：空氣，95%；CO2，5% |
冷凍保存細胞之方法？
冷凍保存方法一: 冷凍管置于4℃ 30~60 分鐘→ （-20 ℃30 分鐘*） → -80 ℃16~18 小時（或隔夜） → 液氮槽vaporphase 長期儲存。
冷凍保存方法二: 冷凍管置于已設定程序之可程序降溫機中每分鐘降1-3 ℃ 至–80 ℃ 以下， 再放入液氮槽vapor phase長期儲存。*-20 ℃不可超過1 小時， 以防止冰晶過大，造成細胞大量死亡，亦可跳過此步驟直接放入-80℃ 冰箱中，惟存活率稍微降低一些。
實驗報告：
一、分離與培養(yǎng)：
1、無菌條件下，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織，然后用PBS將此組織塊清洗2次，將成1mm3左右大?。?/span>
2、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型膠原酶），混懸10s，置37℃條件下消化10min，之后用滴管吹打制成單細胞懸液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置；
3、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液，混懸10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置，重復此步驟2-3次，直至組織*被消化；
4、用200目不銹鋼篩網過濾細胞消化液，1200r/min 離心10min，棄去上清，沉淀細胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸，接種于25cm2培養(yǎng)瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；
5、差速貼壁1h后，吸出培養(yǎng)基，按實驗需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng)；
二、免疫熒光鑒定：
1、待心房肌細胞生長至80%融合時，棄去培養(yǎng)基，用溫育的PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細胞15min；
2、PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后在4℃條件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；
3、PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后在室溫條件下，用4% BSA封閉細胞30min；
4、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗，然后將其放在4℃冰箱中孵育細胞過夜；
5、PBS沖洗細胞3次，每次10min，按1：150的比例稀釋抗α-actin的二抗， 37℃條件下放置1h；
6、用PBS沖洗3次，每次10min，在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。
大鼠 EFNB2 基因全長ORF克隆
大鼠 EFNB1 基因全長ORF克隆
大鼠 EFNA5 基因全長ORF克隆
大鼠 FIGF 基因全長ORF克隆
大鼠 VEGFC 基因全長ORF克隆
大鼠 FLT1 基因全長ORF克隆
大鼠 EGFR 基因全長ORF克隆
大鼠 INSR 基因全長ORF克隆
大鼠 TFRC 基因全長ORF克隆
大腸桿 (Shiga toxin) STX2 基因全長ORF克隆
小鼠視網膜Muller細胞0.156-10 ng/mL ELISA Kit for Human Prion-like protein doppel
大腸桿菌顯色培養(yǎng)基 英文名稱：E.Coli Chromogenic Medium 產品規(guī)格：1000(ML)
0.312-20 ng/mL ELISA Kit for Human Prosalusin
62.5-4000 pg/mL 人絨毛膜促性腺激素β(β-CG)ELISA試劑盒
15.6-1000 pg/mL 人C-C模體趨化因子26(C-C motif hemokine26)ELISA試劑盒
0.47-30 ng/mL ELISA Kit for Human EF-hand domain-containing protein D2
0.312-20 ng/mL 人多聚腺苷二核糖聚合2(PARP-2)ELISA試劑盒
乳酸桿菌選擇性培養(yǎng)基 英文名稱：LBS Agar 產品規(guī)格：250g
31.2-2000 pg/mL ELISA Kit for Human Arginase-1
0.78-50 ng/mL ELISA Kit for Human High affinity copper uptake protein 1
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