化工儀器網(wǎng)
詳細(xì)介紹
產(chǎn)品屬性：
產(chǎn)品名稱 | 規(guī)格 | 貨號(hào) |
| 外周血單個(gè)核細(xì)胞 | 5×10?Cells/T25培養(yǎng)瓶 | GOY-01X1167 |
商品介紹：
名稱 外周血單個(gè)核細(xì)胞 2.組織來源：外周血 3.產(chǎn)品規(guī)格：5×105cells/T25細(xì)胞培養(yǎng)瓶 4.細(xì)胞簡(jiǎn)介： 人外周血單個(gè)核細(xì)胞分離自外周血；外周血是除骨髓之外的血液，臨床上常用一些方法把骨髓中的造血干細(xì)胞釋放到血液中，再在從血液中提取分離得到造血干細(xì)胞，我們把這樣得到的干細(xì)胞稱為外周血干細(xì)胞，在二十一世紀(jì)初人類開始的生命方舟計(jì)劃中提出外周血這一新概念。外周血單個(gè)核細(xì)胞(PBMC)即外周血中具有單個(gè)核的細(xì)胞，包括淋巴細(xì)胞和單核細(xì)胞。目前，主要的分離方法是密度梯度離心法，因?yàn)檠褐懈饔行纬煞值谋戎卮嬖诓町?，因此得以分離出不同的細(xì)胞。 5.方法簡(jiǎn)介： 實(shí)驗(yàn)室分離的人外周血單個(gè)核細(xì)胞采用取外周血、通過密度梯度離心法制備而來，細(xì)胞總量約為5×10?cells/瓶。 6.質(zhì)量檢測(cè)： 實(shí)驗(yàn)室分離的人外周血單個(gè)核細(xì)胞經(jīng)過檢測(cè)，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細(xì)菌、酵母和真菌等。 7.培養(yǎng)信息： 培養(yǎng)基含FBS、生長添加劑、Penicillin、Streptomycin等 產(chǎn)品貨號(hào)CM-H158 換液頻率每2-3天換液一次 生長特性半貼半懸浮 細(xì)胞形態(tài)圓形 傳代特性不增殖；不傳代 消化液0.25%胰蛋白酶 培養(yǎng)條件氣相：空氣，95%；CO2，5% |
冷凍保存細(xì)胞之方法？
冷凍保存方法一: 冷凍管置于4℃ 30~60 分鐘→ （-20 ℃30 分鐘*） → -80 ℃16~18 小時(shí)（或隔夜） → 液氮槽vaporphase 長期儲(chǔ)存。
冷凍保存方法二: 冷凍管置于已設(shè)定程序之可程序降溫機(jī)中每分鐘降1-3 ℃ 至–80 ℃ 以下， 再放入液氮槽vapor phase長期儲(chǔ)存。*-20 ℃不可超過1 小時(shí)， 以防止冰晶過大，造成細(xì)胞大量死亡，亦可跳過此步驟直接放入-80℃ 冰箱中，惟存活率稍微降低一些。
實(shí)驗(yàn)要點(diǎn)及說明：
1．本方法適用于貼壁細(xì)胞培養(yǎng)，而不適用于懸浮細(xì)胞培養(yǎng)，懸浮細(xì)胞可使用滴片法；
2．所使用的蓋玻片應(yīng)該為優(yōu)質(zhì)玻璃，并經(jīng)過鉻酸洗液處理；
3．蓋玻片非常薄，易碎，取放蓋玻片時(shí)動(dòng)作要輕；
4．如果需要更多生長狀態(tài)一致的細(xì)胞，可以使用較大的培養(yǎng)皿，但不宜過大，以避免培養(yǎng)液的浪費(fèi)和增加污染機(jī)率；
5．如果細(xì)胞貼壁生長能力較差，可將蓋玻片在0.5%多聚賴氨酸溶液中浸泡5-10分鐘并自然晾干。
實(shí)驗(yàn)報(bào)告：
一、分離與培養(yǎng)：
1、無菌條件下，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織，然后用PBS將此組織塊清洗2次，將成1mm3左右大??；
2、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型膠原酶），混懸10s，置37℃條件下消化10min，之后用滴管吹打制成單細(xì)胞懸液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置；
3、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液，混懸10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置，重復(fù)此步驟2-3次，直至組織*被消化；
4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過濾細(xì)胞消化液，1200r/min 離心10min，棄去上清，沉淀細(xì)胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸，接種于25cm2培養(yǎng)瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；
5、差速貼壁1h后，吸出培養(yǎng)基，按實(shí)驗(yàn)需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng)；
二、免疫熒光鑒定：
1、待心房肌細(xì)胞生長至80%融合時(shí)，棄去培養(yǎng)基，用溫育的PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細(xì)胞15min；
2、PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后在4℃條件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；
3、PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后在室溫條件下，用4% BSA封閉細(xì)胞30min；
4、按1: 100的比例稀釋?duì)?actin一抗，然后將其放在4℃冰箱中孵育細(xì)胞過夜；
5、PBS沖洗細(xì)胞3次，每次10min，按1：150的比例稀釋抗α-actin的二抗， 37℃條件下放置1h；
6、用PBS沖洗3次，每次10min，在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。
glypican 4 基因全長ORF克隆 (表達(dá)載體), 無標(biāo)簽
bFGF 基因全長ORF克隆 (表達(dá)載體), 無標(biāo)簽
CD309 / VEGFR2 基因全長ORF克隆 (表達(dá)載體), 帶His標(biāo)簽
小鼠 TGF-beta2 基因全長ORF克隆 (表達(dá)載體), 帶FLAG標(biāo)簽
CHRFAM7A 基因全長ORF克隆 (表達(dá)載體), 帶FLAG標(biāo)簽
NAMPT 基因全長ORF克隆 (表達(dá)載體), 帶His標(biāo)簽
GOLM1 基因全長ORF克隆 (表達(dá)載體), 帶His標(biāo)簽
小鼠 SCARB1 基因全長ORF克隆 (表達(dá)載體), 無標(biāo)簽
小鼠 KDR 基因全長ORF克隆 (表達(dá)載體), 無標(biāo)簽
KLKB1 基因全長ORF克隆 (表達(dá)載體), 無標(biāo)簽
外周血單個(gè)核細(xì)胞Candida antarctica酸檢測(cè)試劑盒
Sporobolomyces odoratus連蛋白抗體檢測(cè)試劑盒
Bensingtonia naganoensis血小板衍生生長因子β受體檢測(cè)試劑盒
Pichia rhodanensis硒蛋白P檢測(cè)試劑盒
Sporobolomyces inositophilus谷草轉(zhuǎn)氨;天門冬轉(zhuǎn)移1檢測(cè)試劑盒
Candida boidinii谷草轉(zhuǎn)氨;天門冬轉(zhuǎn)移2檢測(cè)試劑盒
Pichia sp.血小板內(nèi)皮粘附分子1檢測(cè)試劑盒
Pichia galeiformis腫瘤壞死因子受體超家族成員4檢測(cè)試劑盒
化工儀器網(wǎng)