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人神經(jīng)母細(xì)胞瘤細(xì)胞;SK-N-BE(2)培養(yǎng)如何處理
閱讀:102 發(fā)布時(shí)間:2024-9-5收到人神經(jīng)母細(xì)胞瘤細(xì)胞;SK-N-BE(2)培養(yǎng)如何處理?
1、首先,觀察細(xì)胞培養(yǎng)瓶是否完好,培養(yǎng)液是否有漏液、渾濁等現(xiàn)象。若有,請(qǐng)拍照,并及時(shí)與技(所拍照片將作為后續(xù)服務(wù)依據(jù))。
2、用75%酒精擦拭細(xì)胞培養(yǎng)瓶表面,顯微鏡下觀察細(xì)胞狀態(tài)。因運(yùn)輸問(wèn)題,部分貼壁細(xì)胞會(huì)有少量從瓶壁脫落;先不要打開(kāi)培養(yǎng)瓶蓋,將細(xì)胞置于細(xì)胞培養(yǎng)箱內(nèi)靜置培養(yǎng)2-4小時(shí),以便穩(wěn)定細(xì)胞狀態(tài)。
3、仔細(xì)閱讀細(xì)胞說(shuō)明書(shū),了解細(xì)胞相關(guān)信息,如貼壁特性(貼壁/懸?。⒓?xì)胞形態(tài)、所用基礎(chǔ)培養(yǎng)基、血清比例、所需細(xì)胞因子、傳代比例、換液頻率等。
4、靜置完成后,取出細(xì)胞培養(yǎng)瓶,鏡檢、拍照,記錄細(xì)胞狀態(tài)(所拍照片將作為后續(xù)服務(wù)依據(jù));建議細(xì)胞傳代培養(yǎng)后,定期拍照、記錄細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)。
5、貼壁細(xì)胞:若細(xì)胞生長(zhǎng)密度超過(guò)80%,可正常傳代;若未超過(guò)80%,移除細(xì)胞培養(yǎng)瓶?jī)?nèi)培養(yǎng)基,預(yù)留5ml左右繼續(xù)培養(yǎng),直至細(xì)胞密度達(dá)80%左右再進(jìn)行傳代操作,瓶蓋可稍微擰松。
6、懸浮細(xì)胞:將細(xì)胞培養(yǎng)瓶?jī)?nèi)液體全部轉(zhuǎn)移至50ml無(wú)菌離心管內(nèi),1200rpm離心5min,離心后上清培養(yǎng)基可收集備用,管底細(xì)胞沉淀加入5ml培養(yǎng)基吹打、重懸。鏡檢時(shí),若細(xì)胞密度超過(guò)80%,可將細(xì)胞懸液分至2個(gè)細(xì)胞培養(yǎng)瓶?jī)?nèi)培養(yǎng),補(bǔ)加培養(yǎng)基至5ml;若細(xì)胞密度未超過(guò)80%,將細(xì)胞懸液移至原瓶繼續(xù)培養(yǎng),直至細(xì)胞密度達(dá)80%左右時(shí)再進(jìn)行傳代操作。接下來(lái),對(duì)于SK-N-BE(2)這種特定的人神經(jīng)母細(xì)胞瘤細(xì)胞系,我們還需要特別注意其生長(zhǎng)環(huán)境的細(xì)微調(diào)整。由于SK-N-BE(2)細(xì)胞對(duì)溫度、濕度及CO2濃度較為敏感,確保細(xì)胞培養(yǎng)箱設(shè)定為37°C、5% CO2濃度及飽和濕度至關(guān)重要。此外,考慮到該細(xì)胞系可能存在的特定生長(zhǎng)偏好,如偏好高糖培養(yǎng)基或需要特定的生長(zhǎng)因子支持,應(yīng)根據(jù)實(shí)驗(yàn)需求調(diào)整培養(yǎng)基配方。
在傳代過(guò)程中,為了避免細(xì)胞污染和保持細(xì)胞活力,所有操作都應(yīng)遵循嚴(yán)格的無(wú)菌技術(shù)。使用一次性無(wú)菌吸管和移液器,確保培養(yǎng)基、胰酶等試劑在有效期內(nèi)且未受污染。傳代時(shí),輕柔地處理細(xì)胞,避免過(guò)度吹打?qū)е录?xì)胞損傷。
同時(shí),為了監(jiān)控細(xì)胞的生長(zhǎng)狀況和健康狀態(tài),除了定期拍照記錄外,還可以利用細(xì)胞計(jì)數(shù)儀進(jìn)行細(xì)胞密度的精確測(cè)量。這有助于更科學(xué)地評(píng)估傳代時(shí)機(jī),確保細(xì)胞在最佳狀態(tài)下進(jìn)行擴(kuò)增。
此外,考慮到長(zhǎng)期培養(yǎng)可能引起的細(xì)胞特性改變或污染風(fēng)險(xiǎn),建議定期進(jìn)行細(xì)胞系的鑒定和污染檢測(cè),如通過(guò)流式細(xì)胞術(shù)分析細(xì)胞表面標(biāo)記物,或使用PCR方法檢測(cè)支原體、真菌等微生物污染,確保實(shí)驗(yàn)結(jié)果的準(zhǔn)確性和可靠性。
綜上所述,對(duì)于SK-N-BE(2)人神經(jīng)母細(xì)胞瘤細(xì)胞的培養(yǎng),除了遵循基本的細(xì)胞培養(yǎng)流程外,還需根據(jù)細(xì)胞特性進(jìn)行細(xì)致入微的調(diào)整和監(jiān)控,以確保細(xì)胞健康生長(zhǎng),為后續(xù)的科學(xué)研究提供高質(zhì)量的細(xì)胞材料。