目錄:愛必信（上海）生物科技有限公司>>免疫學(xué)試劑>>WB常用試劑>> abs9160NP-40裂解液
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更新時(shí)間：2024-07-08 20:29:31瀏覽次數(shù)：1012評(píng)價(jià)
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| 供貨周期 | 現(xiàn)貨 | 貨號(hào) | abs9160 |
|---|---|---|---|
| 應(yīng)用領(lǐng)域 | 生物產(chǎn)業(yè) |
| 產(chǎn)品描述 | |
| NP-40裂解液描述 | NP-40，也稱 Nonidet P-40（乙基苯基聚乙二醇），是一種常見的非離子型去垢劑。 NP-40 裂解液（NP-40 Lysis Buffer）是一種比較溫和的細(xì)胞組織裂解液，主要成分為 50mM Tris-HCl （pH 7.4），150mM NaCl，1% NP-40 以及焦磷酸鈉，正釩酸鈉，氟化鈉，EDTA 和抑肽酶等多種抑制劑，可廣譜且有效抑制蛋白降解，經(jīng)本品裂解所得的蛋白樣品，適用于常規(guī)的蛋白免疫印跡（Western Blot），免疫沉淀（IP）和免疫共沉淀（Co-IP）等實(shí)驗(yàn)。經(jīng)本品裂解收集的蛋白樣品，可使用增強(qiáng)型 BCA 蛋白濃度測(cè)定試劑盒測(cè)定總蛋白濃度。由于本品含有較高濃度的去垢劑，不適合用 Bradford 法來(lái)測(cè)定總蛋白濃度。 |
| 使用方法 | A培養(yǎng)的細(xì)胞樣品 （1）充分融解 NP-40 裂解液，之后混勻。取適當(dāng)量的裂解液，使用前數(shù)分鐘內(nèi)加入 PMSF（Mw：174.2 g/mol），使其最終濃度為 1mM。 （2）貼壁細(xì)胞：吸除培養(yǎng)液，用 PBS、生理鹽水或無(wú)血清培養(yǎng)液洗一遍（如果血清中的蛋白沒(méi)有干擾，可忽略此步）。按照六孔板的每孔細(xì)胞加入 150-250ul 裂解液的比例加量。用槍吹打數(shù)下，使裂解液和細(xì)胞充分接觸。裂解 15-30 分鐘，通常裂解液接觸細(xì)胞 1-3 秒后，細(xì)胞就會(huì)被裂解。 懸浮細(xì)胞：離心收集細(xì)胞，用手指彈散細(xì)胞。按照六孔板的每孔細(xì)胞加入 150-250ul 裂解液的比例加入裂解液。再用手指輕彈以充分裂解細(xì)胞。充分裂解后應(yīng)沒(méi)有明顯的細(xì)胞沉淀。如果細(xì)胞量較多，必需分裝成 50-100 萬(wàn)細(xì)胞/管，然后再裂解。 （3）充分裂解后，10,000-14,000g 離心 3-5 分鐘，取上清，即可進(jìn)行后續(xù)的 PAGE、WB 和免疫沉淀等實(shí)驗(yàn)。 【裂解液用量說(shuō)明】：通常 6 孔板每孔細(xì)胞加入 150ul 裂解液已經(jīng)足夠，如果細(xì)胞密度非常高可以適當(dāng)加大裂解液的用量到 200ul 或 250ul。 NP-40裂解液 B組織樣品 （1）將剪切成細(xì)小的碎片。 （2）充分融解 NP-40 裂解液，之后混勻。取適當(dāng)量的裂解液，使用前數(shù)分鐘內(nèi)加入 PMSF（Mw：174.2 g/mol），使其最終濃度為 1mM。 （3）按照每 20mg 組織加入 150-250ul 裂解液的比例加量?！咀⒁猓喝绻呀獠怀浞挚梢赃m當(dāng)添加用量，如果需要高濃度的蛋白樣品，可適當(dāng)降低用量。】 （4）用玻璃勻漿器勻漿直至充分裂解，此過(guò)程盡量控制在 1-2 分鐘內(nèi)，以減少蛋白的降解。 （5）充分裂解后，10,000-14,000g 離心 3-5 分鐘，取上清，即可進(jìn)行后續(xù)的 PAGE、WB 和免疫沉淀等實(shí)驗(yàn)。 （6）如果組織樣品本身非常細(xì)小，可以適當(dāng)剪切后直接加入裂解液裂解，通過(guò)高強(qiáng)度的漩渦混勻器使樣品裂解充分，之后同樣離心取上清，用于后續(xù)實(shí)驗(yàn)。直接裂解的優(yōu)點(diǎn)是比較方便，不必使用勻漿器，缺點(diǎn)是不如使用勻漿器那樣裂解的足夠充分. |
| 注意事項(xiàng) | 1、裂解樣品的所有步驟都需在冰上或 4℃進(jìn)行。 2、不同的細(xì)胞需要加入的裂解液的量可能會(huì)不同，需要根據(jù)具體條件進(jìn)行條件篩選； 3、為了您的自身安全，使用試劑前，請(qǐng)做好防護(hù)，如穿實(shí)驗(yàn)服，帶手套等。 |
| 基本信息 | |
| 儲(chǔ)存/保存方法 | -20℃凍存 |
| 溫馨提示：本產(chǎn)品僅作科研實(shí)驗(yàn)使用，不支持臨床等研究 |
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