Q1:收到化合物后如何處理?
A1:收到化合物后若最近一段時間不使用,建議粉末狀態(tài)下-20℃儲存。正式實(shí)驗(yàn)時,可提前一天按照說明書的要求選擇合適的溶劑配制儲存液(不穩(wěn)定的化合物需現(xiàn)配現(xiàn)用),并于-20℃分裝保存,避免反復(fù)凍融造成的藥物使用效果不佳。
Q2:按照產(chǎn)品說明書的要求操作,化合物沒有溶解好應(yīng)該如何處理?
A2:一般情況下,按照說明書推薦的溶解方式是可以溶解的,個別比較特殊的化合物不溶可以采取以下助溶措施:
1)水浴加熱45℃以下,20-30min;
2)超聲處理,15min左右。
Q3:DMSO含量多少對細(xì)胞/動物沒有損傷?
A3:一般情況下,細(xì)胞(體外)實(shí)驗(yàn)要求DMSO的終濃度不超過0.1%;動物(體內(nèi))實(shí)驗(yàn)中,若是正常鼠,DMSO的終濃度最好不超過10%,若是裸鼠或體弱鼠,DMSO的終濃度建議不超過2%。建議在實(shí)驗(yàn)中設(shè)置溶劑對照,排除DMSO對實(shí)驗(yàn)造成的影響。
Q4:化合物摩爾濃度如何計(jì)算?
A4:愛必信→技術(shù)資源→產(chǎn)品資訊,參考軟文《細(xì)胞培養(yǎng)小分子藥物配制方法解析》
愛必信→技術(shù)資源→常用工具→摩爾濃度計(jì)算器
Q5:動物/細(xì)胞實(shí)驗(yàn)化合物如何稀釋?用什么溶劑稀釋?
A5:一般情況下,化合物先溶于某一溶劑(如DMSO)配成儲存液,再用另一種溶劑(如PBS)進(jìn)行稀釋,不能將2種溶劑混合再去溶解。細(xì)胞(體外)實(shí)驗(yàn)可選擇培養(yǎng)基、生物緩沖液等進(jìn)行稀釋;動物(體內(nèi))實(shí)驗(yàn)溶解方式以下方案僅供參考(現(xiàn)配現(xiàn)用,當(dāng)天使用):
1)依序添加每種溶劑: 10% DMSO→90%(20% SBE-β-CD in saline)
2)依序添加每種溶劑:10% DMSO→ 90% Corn Oil(建議實(shí)驗(yàn)周期半個月以內(nèi))
3)依序添加每種溶劑: 10% DMSO →40% PEG300→5% Tween 80 →45% saline
備注:以1mL工作液為例,取100μL澄清DMSO溶解的儲存液加到400μL PEG300中,混合均勻;再向上述體系中加入50μL Tween-80,混合均勻;然后再繼續(xù)加入450μL生理鹽水定容至1mL。
生理鹽水的配制:將 0.9g氯化鈉,溶解于ddH?O并定容至100mL,可以得到澄清透明的生理鹽水溶液。
Q6:化合物保存條件是什么,能保存多久?
A6:一般情況下,粉末在-20℃儲存一年有效;溶解后分裝保存,避免反復(fù)凍融,-20℃儲存6個月有效,2-4℃保存兩周有效。對于不穩(wěn)定的化合物,需現(xiàn)配現(xiàn)用。
Q7:說明書沒有提到我購買的化合物是否無菌,需要做滅菌處理嗎?如何滅菌?
A7:愛必信小分子化合物都沒有做無菌處理,使用時需要除菌。若儲存液用DMSO溶解,因DMSO具有很強(qiáng)的殺菌能力,可認(rèn)為配制好的溶液即為無菌溶液。對于用其它溶劑(如水)溶解的化合物可用0.22μm濾膜進(jìn)行過濾除菌。避免使用紫外滅菌和高壓蒸汽滅菌,可能會破壞化合物的結(jié)構(gòu),影響其生物活性。
Q8:為什么參考文獻(xiàn)或之前的實(shí)驗(yàn)濃度,對我的細(xì)胞沒有效果了?是化合物有問題嗎?
A8:小分子藥物的使用濃度受細(xì)胞種類,傳代次數(shù)、細(xì)胞通透性,孵育時間等多種因素的影響。不同實(shí)驗(yàn)作用效果不同、文獻(xiàn)只能作參考,不能作為標(biāo)準(zhǔn)。除參考文獻(xiàn)外,還需要做濃度梯度曲線確定最佳作用濃度。若之前用過這個化合物,已經(jīng)摸索最佳濃度,可以排查是不是由于化合物批次不同或保存不當(dāng)超過有效期引起的差異。
Q9:配制的澄清儲存液,使用時從冰箱取出發(fā)現(xiàn)有沉淀,這個該怎么處理?
A9:如果儲存液的濃度接近化合物溶解度,凍融會產(chǎn)生沉淀。這種沉淀是暫時的,當(dāng)溶液的溫度恢復(fù)到室溫時會溶解。如果沉淀溶解緩慢,可以適當(dāng)水浴加熱或超聲處理。
Q10:是否可以使用小分子化合物作為分析標(biāo)準(zhǔn)品或者對照品?
A10:貨號以abs8開頭的小分子化合物適用于細(xì)胞/動物實(shí)驗(yàn),不用作分析標(biāo)準(zhǔn)品或者對照品。標(biāo)注有標(biāo)準(zhǔn)品和貨號以abs4開頭的植物提取物,可作為標(biāo)準(zhǔn)品使用。
本期小愛推薦小分子激動劑/抑制劑:
貨號 | 品名 | CAS號 | 規(guī)格 |
abs810001 | LY 294002(PI3K抑制劑) | 154447-36-6 | 25mg |
abs810002 | SB 203580(p38 MAPK抑制劑) | 152121-47-6 | 100mg |
abs810003 | U0126(MEK抑制劑) | 109511-58-2 | 100mg |
abs810008 | SP600125(JNK抑制劑) | 129-56-6 | 50mg |
abs810010 | PD 98059(MEK抑制劑) | 167869-21-8 | 50mg |
abs810012 | Brefeldin A(蛋白轉(zhuǎn)運(yùn)抑制劑) | 20350-15-6 | 25mg |
abs810013 | BAY 11-7082(IKK抑制劑) | 19542-67-7 | 25mg |
abs810030 | Rapamycin(mTOR抑制劑) | 53123-88-9 | 100mg |
abs810111 | MCC-950 sodium(NLRP3抑制劑) | 256373-96-3 | 100mg |
abs810466 | Cisplatin(DNA烷化劑) | 15663-27-1 | 50mg |
abs810575 | 3-Methyladenine(自噬抑制劑) | 5142-23-4 | 500mg |
abs810640 | Y-27632 2HCl(ROCK1抑制劑) | 129830-38-2 | 5mg |
abs810744 | Erastin(鐵死亡誘導(dǎo)劑) | 571203-78-6 | 50mg |
abs812852 | PMSF(蛋白酶抑制劑) | 329-98-6 | 200mg |
abs812864 | Y-27632(ROCK1抑制劑) | 146986-50-7 | 10mg |
abs812972 | Poly(I:C)(TLR3激動劑) | 24939-03-5 | 50mg |
abs813072 | Ferrostatin-1(鐵死亡抑制劑) | 347174-05-4 | 50mg |
abs815889 | MOG (35-55)(EAE誘導(dǎo)劑) | 149635-73-4 | 5mg |
abs817025 | Capsaicin (TRPV1激動劑) | 404-86-4 | 100mg |
abs817348 | IBMX(PDE抑制劑) | 28822-58-4 | 100mg |
abs817874 | MG-132(蛋白酶抑制劑) | 133407-82-6 | 5mg |
abs819421 | Prostaglandin E2(PGE2受體激活劑) | 363-24-6 | 50mg |
abs822945 | Carperitide(內(nèi)皮素受體抑制劑) | 89213-87-6 | 500μg |
好消息!Absin文獻(xiàn)獎勵重磅升級!
Absin特色產(chǎn)品線:
WB相關(guān):ECL發(fā)光液、預(yù)染marker、預(yù)制膠;IHC相關(guān):二抗試劑盒、組化筆;IP/CoIP試劑盒;激動劑/抑制劑;血清、BSA、蛋白酶K、CTB、TTX、CEE;凋亡試劑盒;呼吸爆發(fā)試劑盒;ELISA試劑盒;重組蛋白;抗體: 二抗、標(biāo)簽抗體、對照抗體;定制服務(wù)(抗體/多肽/蛋白/標(biāo)記/檢測)...
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