背景介紹:
銅濃度檢測在藥物發(fā)現(xiàn)和環(huán)境監(jiān)測中得到廣泛應(yīng)用。銅是人體必需的微量元素。銅蛋白酶在鐵和兒茶酚胺代謝,在清除自由基,血紅蛋白,彈性蛋白,膠原等方面扮演著重要角色。銅主要存在于肝臟中的銅藍(lán)蛋白中。銅含量過低會導(dǎo)致智力低下、色素缺失、貧血、肌肉緊張癥、骨質(zhì)壞血病等疾病。
銅離子檢測在腫瘤研究中的應(yīng)用:
歷史研究表明,銅穩(wěn)態(tài)失調(diào)與多種腫瘤有關(guān),如婦科腫瘤、結(jié)直腸癌等,而癌癥患者血清銅水平的升高與癌癥分級和化療耐藥性有關(guān),如果銅的濃度超過一定的閾值,就會中毒,導(dǎo)致一種新細(xì)胞死亡形式,稱為銅中毒,這種方式也被視為癌癥治療的潛在方法。
2023年10月20日,上海市第一人民醫(yī)院黃陳教授和范廣建教授團(tuán)隊(duì)在Nature Communications雜志上發(fā)表了題為“Lactylation of METTL16 promotes cuproptosis via m6A-modification on FDX1 mRNA in gastric cancer"的研究論文。本研究揭示了METTL16調(diào)控胃癌細(xì)胞銅死亡的分子機(jī)制,闡明乳酰化修飾及m6A修飾在胃癌進(jìn)展中的重要意義,為胃癌的治療提供新的靶標(biāo)和策略。
圖 運(yùn)用銅離子檢測試劑盒abs580140對48例胃癌患者的胃癌組織裂解物進(jìn)行了銅含量檢測
銅離子檢測試劑盒:
試劑盒組分 | 規(guī)格 | 儲存條件 |
96-Well Microplate | 1 plate | 常溫 |
Assay Buffer | 30 mL x 4 | 4℃ |
Reaction Buffer | 4 mL x 1 | 4℃ |
Masking Reagent | Powder x 1 | 4℃ |
Dye Reagent | Powder x 1 | 4℃,避光保存 |
Dye Reagent Diluent | 1 mL x 1 | 4℃ |
Standard (250 μmol/L) | 1 mL x 1 | 4℃ |
另需自備的材料:酶標(biāo)儀(可讀取605nm處的吸光度)、蒸餾水、移液器與槍頭、離心機(jī)、計(jì)時(shí)器等。
操作步驟(以組織樣本為例):
1、樣本處理:稱取1g組織,與1mL Assay buffer在冰上勻漿,10000g 4℃離心10min,取上清液至新離心管中,冰上保存待檢測。
2、試劑準(zhǔn)備:
標(biāo)準(zhǔn)品:用蒸餾水二倍連續(xù)稀釋標(biāo)準(zhǔn)品;
圖 標(biāo)準(zhǔn)品二倍連續(xù)稀釋示例
Masking Reagent:使用1mL蒸餾水溶解(現(xiàn)配現(xiàn)用);
Dye Reagent:使用1mL Dye Reagent Diluent溶解Dye Reagent,70℃加熱助溶(現(xiàn)配現(xiàn)用)。
3、上樣:分別將140uL不同濃度的標(biāo)準(zhǔn)品、樣品加入相應(yīng)孔中,另設(shè)置空白孔加入140uL蒸餾水;每孔分別加入40uL Reaction Buffer,10uL Masking Reagent以及10uL Dye Reagent,混合均勻,室溫孵育15min。
試劑 | 標(biāo)準(zhǔn)品孔 | 樣品孔 | 空白孔 |
標(biāo)準(zhǔn)品 | 140uL | -- | -- |
樣品 | -- | 140uL | -- |
蒸餾水 | -- | -- | 140uL |
Reaction Buffer | 40uL | 40uL | 40uL |
Masking Reagent | 10uL | 10uL | 10uL |
Dye Reagent | 10uL | 10uL | 10uL |
4、檢測與計(jì)算:使用酶標(biāo)儀測量605nm處的吸光度,擬合標(biāo)準(zhǔn)曲線并計(jì)算樣本濃度。
圖 標(biāo)曲示例
注意事項(xiàng):
1)金屬螯合劑(如EDTA)會干擾此分析,在樣品制備中應(yīng)避免使用;
2)對于未知的樣品,建議多做幾個稀釋梯度進(jìn)行預(yù)實(shí)驗(yàn),確保讀數(shù)在標(biāo)準(zhǔn)曲線范圍內(nèi);
3)試劑盒中的Dye Reagent需要現(xiàn)配現(xiàn)用,配好的溶液無法儲存,可能影響顯色讀數(shù)進(jìn)而影響檢測;如果樣本需要分批檢測,建議分批收樣儲存,待樣本收齊后統(tǒng)一檢測;
4)每次實(shí)驗(yàn)必須重新檢測并繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。
Absin生化檢測試劑盒——離子檢測系列:
貨號 | 品名 | 用途 |
abs580105 | 鐵離子檢測試劑盒 | 鐵離子(Fe3+)含量檢測 |
abs580140 | 銅離子檢測試劑盒 | 銅離子(Cu2+)含量檢測 |
abs580188 | 硒離子檢測試劑盒 | 硒離子含量檢測 |
abs580103 | 鉀離子檢測試劑盒 | 鉀離子(K+)含量檢測 |
abs580104 | 鈣離子檢測試劑盒 | 鈣離子(Ca2+)含量檢測 |
abs580106 | 鎂離子檢測試劑盒 | 鎂離子(Mg2+)含量檢測 |
abs580107 | 磷離子檢測試劑盒 | 磷離子含量檢測 |
abs580108 | 鋅離子檢測試劑盒 | 鋅離子(Zn2+)含量檢測 |
abs580110 | 孔雀綠磷離子檢測試劑盒 | 孔雀綠磷離子含量檢測 |
abs580146 | 鉻離子檢測試劑盒 | 鉻(Cr)離子含量檢測 |
好消息!Absin文獻(xiàn)獎勵重磅升級!
Absin特色產(chǎn)品線:
WB相關(guān):ECL發(fā)光液、預(yù)染marker、預(yù)制膠;IHC相關(guān):二抗試劑盒、組化筆;IP/CoIP試劑盒;激動劑/抑制劑;血清、BSA、蛋白酶K、CTB、TTX、CEE;凋亡試劑盒;呼吸爆發(fā)試劑盒;ELISA試劑盒;重組蛋白;抗體: 二抗、標(biāo)簽抗體、對照抗體;定制服務(wù)(抗體/多肽/蛋白/標(biāo)記/檢測)...
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