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細(xì)胞培養(yǎng)小分子藥物配制方法解析

閱讀:1467      發(fā)布時(shí)間:2023-3-27
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科研實(shí)驗(yàn)中我們經(jīng)常需要配制各種濃度的試劑。例如細(xì)胞實(shí)驗(yàn)一般需要加入小分子激動(dòng)劑/抑制劑;分子轉(zhuǎn)化實(shí)驗(yàn)一般會(huì)加入抗生素;免疫實(shí)驗(yàn)需要加入免疫刺激物/免疫佐劑等。這些昂貴的試劑濃度一旦計(jì)算錯(cuò)誤,不僅挑燈夜戰(zhàn)得來(lái)的數(shù)據(jù)毀于一旦,早日發(fā)文的愿望也隨之破滅,可謂一失足成千古恨。今天小愛(ài)就為大家解決這一難題,讓我們學(xué)會(huì)快速換算試劑濃度,擺脫科研失誤。


案例一

抑制劑儲(chǔ)存液配制



我們買(mǎi)來(lái)的小分子抑制劑一般是凍干粉,需要把它配制成溶液。首先,我們應(yīng)該知道藥物的分子量、溶解度以及規(guī)格。如果是毫克級(jí)小包裝,一般不需要稱量分裝,直接在原瓶中溶解配成儲(chǔ)存液。

以ROCK抑制劑Y-27632為例,產(chǎn)品信息如下:

CAS號(hào)

規(guī)格

分子量

 可溶性/溶解性

146986-50-7

5mg

247.34

DMSO:≥ 32mg/mL (129.38mM)


該藥物推薦溶劑DMSO,同時(shí),最大只能配成129.38mM的儲(chǔ)存液。這一點(diǎn)非常重要。有些人沒(méi)有注意藥物溶解性,直接在非水溶性藥物中加入PBS配置,結(jié)果藥物不溶,“損失慘重"。


假如我們需要配置10mM儲(chǔ)存液,計(jì)算公式如下:

  質(zhì)量(mg)= 濃度(mM)x 體積(L)x 分子量  (1)
5(mg)= 10(mM)x ?(L)x 247.34


即向含5mg Y-27632的原瓶中加入2.02mL DMSO,即可配制成10mM溶液。(注:此處要預(yù)估原瓶的容量,如果原瓶容量小于2 mL,應(yīng)考慮配置更大濃度的儲(chǔ)存液,如20mM,加入1.01 mL DMSO)。

此外,我們也會(huì)經(jīng)常遇到質(zhì)量濃度和摩爾濃度單位轉(zhuǎn)換,同樣以10mM Y-27632為例:

10mM=10mmol/L,化合物分子量為247.34,即247.34g/mol=247.34mg/mmol

10mmol/L x 247.34mg/mmol = 2473.4mg/L= 2.4734mg/mL

即10mM Y-27632溶液相當(dāng)于2.4734mg/mL

濃度快速換算法則

1)mM轉(zhuǎn)換mg/mL,摩爾濃度數(shù)值乘以分子量再除以1000;


2)mg/mL轉(zhuǎn)換mM,質(zhì)量濃度數(shù)值除以分子量再乘以1000。


案例二

抑制劑儲(chǔ)存液稀釋


我們買(mǎi)來(lái)抑制劑的凍干粉,配制儲(chǔ)存液的濃度為10mM,如果需要使用終濃度為25uM進(jìn)行細(xì)胞實(shí)驗(yàn),需要加入多少抑制劑儲(chǔ)存液呢?記住下面這個(gè)稀釋公式就可以了:

起始濃度 x 起始體積 = 最終濃度 x 最終體積

  C1(mM) x V1(mL)= C2(mM)x V2(mL) (2)

首先,

注意單位,我們假設(shè)最終體積為2mL,代入公式:

10(mM)x V1(mL)= 0.025(mM)x 2(mL)




即我們需要吸取5uL的儲(chǔ)存液進(jìn)行實(shí)驗(yàn)操作。


案例三

百分比濃度換算



我們?cè)谑褂枚蛱K糖醇(DTT)做實(shí)驗(yàn)時(shí),會(huì)遇到這樣的問(wèn)題:已發(fā)表的文獻(xiàn)中使用0.1%的DTT溶液,而你購(gòu)買(mǎi)的DTT為1mol/L的儲(chǔ)存液,那么這該如何換算呢?請(qǐng)聽(tīng)小愛(ài)為您解答:

DTT的分子量為154,即154g/mol,儲(chǔ)存液換算成質(zhì)量濃度C1為

154g/mol x 1mol/L = 154g/L




假設(shè)需配制1L的0.1%DTT溶液,即V2 = 1L = 1000mL

0.1% DTT溶液為0.1g/100mL = 1g/1000mL = 1g/L,即C2 = 1g/L

再使用公式(2)C1 x V1 = C2 x V2 可得:

154(g/L)x V1(L)= 1(g/L)x 1(L)



V1 = 6.5mL,即吸取6.5mL 1mol/L的DTT儲(chǔ)存液,加入993.5mL稀釋液中即可獲得0.1%的DTT溶液。

如果我們購(gòu)買(mǎi)的是固體二硫蘇糖醇,配制0.1%的DTT溶液方法如下:精確稱取1g二硫蘇糖醇,用水定容至1000mL即可。


DL-二硫蘇糖醇科普

DL-二硫蘇糖醇(DL-Dithiothreitol,DTT)具有很強(qiáng)的還原性,其還原性很大程度上是由于其氧化狀態(tài)六元環(huán)(含二硫鍵)的構(gòu)象穩(wěn)定性。DTT有抗氧化作用,它能保護(hù)酶分子上的還原性基團(tuán),維持還原性環(huán)境,穩(wěn)定酶的活性。DTT中還含有一定RNA酶抑制劑,具有抑制RNA酶活性的作用。具有巰基乙醇相似的作用,但DTT的刺激性氣味要小很多,毒性也比巰基乙醇低很多。用作蛋白質(zhì)巰基保護(hù)劑和蛋白質(zhì)二硫鍵的裂解和順序分析。

DL-二硫蘇糖醇應(yīng)用:

※ 作為牛奶中主要過(guò)敏原αs1-酪蛋白的還原和烷基化反應(yīng)物之一;

※ 作為精子去膜和再激活培養(yǎng)基的一個(gè)組分;

※ 因硫醇可有效保護(hù)生物催化劑的活性位點(diǎn)而維持酶的穩(wěn)定性;

※ 作為還原劑用于測(cè)試N-乙基馬來(lái)酰亞胺與巰基反應(yīng)的特異性。


產(chǎn)品信息:

貨號(hào)

產(chǎn)品名稱

規(guī)格

貨期

abs9226

DTT溶液(1mol/L)

5mL

現(xiàn)貨

abs47002083

DL-二硫蘇糖醇(>98%,BR級(jí))

5g/25g

現(xiàn)貨

abs42017588

DL-二硫蘇糖醇(>97%)

1g/5g

現(xiàn)貨


小分子抑制劑產(chǎn)品推薦:

貨號(hào)

產(chǎn)品名稱

規(guī)格

貨期

abs810012

Brefeldin A

10mg/25mg

現(xiàn)貨

abs812852

PMSF

50mg/100mg/200mg

現(xiàn)貨

abs810003

U0126

5mg/10mg/25mg/50mg/100mg

現(xiàn)貨

abs810466

Cisplatin

5mg/50mg

現(xiàn)貨

abs810001

LY 294002

10mg/25mg/100mg

現(xiàn)貨

abs812864

Y-27632

5mg/10mg/50mg

現(xiàn)貨

abs812972

Poly(I:C)

10mg/50mg

1-2周

abs810008

SP600125

10mg/50mg

現(xiàn)貨

abs810744

Erastin

5mg/10mg/50mg/100mg

現(xiàn)貨

abs817419

Suramin Sodium Salt

25mg

現(xiàn)貨

abs817348

IBMX

25mg/100mg

現(xiàn)貨

abs810006

Staurosporine

5mg/25mg

現(xiàn)貨

abs812846

Geneticin (G418 Sulfate)

250mg/500mg

現(xiàn)貨

abs810030

Rapamycin

5mg/10mg/100mg/1g

現(xiàn)貨

abs810575

3-Methyladenine

25mg/50mg/200mg/500mg

現(xiàn)貨

abs819421

Prostaglandin E2

5mg/50mg

現(xiàn)貨

abs817025

Capsaicin

25mg/50mg/100mg

現(xiàn)貨

abs810009

SB202190(FHPI)

5mg/50mg

現(xiàn)貨

abs810016

Cyclosporin A

5mg/25mg/50mg

現(xiàn)貨

abs810010

PD 98059

5mg/10mg/50mg

現(xiàn)貨

abs819747

Nigericin sodium salt

5mg/10mg/25mg

現(xiàn)貨

abs812975

Monensin sodium salt

25mg/100mg

現(xiàn)貨

abs810716

Doxorubicin hydrochloride

5mg/50mg

現(xiàn)貨

abs810020

Paclitaxel

5mg/10mg/25mg/50mg/100mg

現(xiàn)貨

abs810481

SB-431542

5mg/10mg/50mg

現(xiàn)貨

abs810640

Y-27632 2HCl

5mg/50mg

現(xiàn)貨

abs812033

Leupeptin Hemisulfate

5mg/10mg/25mg

現(xiàn)貨

abs817902

Pepstatin A

10mg/25mg/50mg/100mg

現(xiàn)貨

abs811913

GsMTx4

1mg/5mg

現(xiàn)貨

abs814916

Gastrin I (human)

1mg/5mg

現(xiàn)貨

abs817694

A-83-01

5mg/10mg/25mg/50mg

現(xiàn)貨

abs810052

CHIR-99021(CT99021)

5mg/25mg

現(xiàn)貨

abs810473

DAPT

5mg/10mg/50mg

現(xiàn)貨

abs810530

Dorsomorphin free base

5mg/50mg

現(xiàn)貨

abs810050

Forskolin

5mg/25mg/100mg

現(xiàn)貨

abs816969

Nicotinamide

50mg/100mg/200mg/500mg

現(xiàn)貨

abs810009

SB202190(FHPI)

5mg/50mg

現(xiàn)貨

溫馨提示:Absin所有產(chǎn)品僅用于科學(xué)研究,請(qǐng)勿藥物、家用或其他用途。

Absin特色產(chǎn)品線:


WB相關(guān):ECL發(fā)光液、預(yù)染marker、預(yù)制膠;IHC相關(guān):二抗試劑盒、組化筆;IP/CoIP試劑盒;激動(dòng)劑/抑制劑;血清、BSA、蛋白酶K、CTB、TTX、CEE;凋亡試劑盒;呼吸爆發(fā)試劑盒;ELISA試劑盒;重組蛋白;抗體: 二抗、標(biāo)簽抗體、對(duì)照抗體;定制服務(wù)(抗體/多肽/蛋白/標(biāo)記/檢測(cè))...



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