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SH-SY5Y細(xì)胞培養(yǎng)攻略

閱讀:1097      發(fā)布時間:2023-1-19
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人神經(jīng)母細(xì)胞瘤細(xì)胞(SH-SY5Y) 是于1970年建自骨瘤轉(zhuǎn)移灶的神經(jīng)母細(xì)胞瘤 SK-N-SH細(xì)胞系經(jīng)3次克隆后的亞系(SK-N-SH→SH-SY→SH-SY5→SH-SY5Y)。該細(xì)胞的密度可高達(dá)106 cells/cm2,具有中等水平的多巴胺β羥化酶的活性?;拘螒B(tài)上皮樣,多數(shù)貼壁,少數(shù)懸?。?營養(yǎng)體系:推薦DMEM:F12(abs9561)+10%FBS(abs972)+1%P/S(abs9244)。

表1 SH-SY5Y細(xì)胞基本信息

SH-SY5Y(人神經(jīng)母細(xì)胞瘤細(xì)胞)

  形態(tài)

上皮樣

生長特性

多數(shù)貼壁,少數(shù)懸浮

營養(yǎng)體系

DMEM:F12(abs9561)+10%FBS(abs972)+1%P/S(abs9244)

圖1 SH-SY5Y(人神經(jīng)母細(xì)胞瘤細(xì)胞)

首先,我們討論的是SY5Y五天傳一代算不算正常?SH-SY5Y 增殖緩慢,再加上喜歡聚團(tuán)生長,鏡下觀察融合率不高,但細(xì)胞簇實際密度大,需要5-7天才能達(dá)到80%以上的融合率,所以5-7天傳一代很正常(如圖2所示,融合率約為70%的SY5Y)。如果細(xì)胞培養(yǎng)達(dá)到一周都無法傳代,建議把細(xì)胞消化下來,接種到更小的孔板中,增加細(xì)胞密度,促進(jìn)細(xì)胞生長。

接下來我們討論第二個話題SY5Y懸浮細(xì)胞過多正不正常?SY5Y的生長特點為大部分貼壁,呈上皮樣,有短觸角延伸出來,傾向于成簇生長,容易成團(tuán);少部分懸浮,圓潤有光澤。 如果SY5Y出現(xiàn)大量懸浮是不正?,F(xiàn)象。如圖3所示,懸浮細(xì)胞居多的SY5Y。

圖2 懸浮細(xì)胞居多的SY5Y


如何解決這種情況呢?如果貼壁細(xì)胞生長狀態(tài)良好、密度適中,可以舍棄懸浮細(xì)胞;如果貼壁細(xì)胞很少,用胰酶消化并離心,將細(xì)胞用新鮮的完培重懸并接種到培養(yǎng)瓶,隔段時間觀察細(xì)胞是否貼壁。

最后我們討論一下不同營養(yǎng)體系培養(yǎng)的SY5Y形態(tài)差異大不大。我們對比了兩種營養(yǎng)體系培養(yǎng)的SY5Y細(xì)胞形態(tài)。體系一是DMEM+20%FBS-熱滅活,體系2是DMEM-F12 + 10%FBS(如圖4所示)。在培養(yǎng)的第2天和第5天進(jìn)行了相應(yīng)的形態(tài)比較。傳代第2天,低密度下,兩種營養(yǎng)體系培養(yǎng)的SY5Y形態(tài)沒有明顯區(qū)別,均為少數(shù)懸浮,多數(shù)呈上皮樣,有短觸角延伸出來,傾向于聚團(tuán)生長;傳代第5天,體系2培養(yǎng)的SY5Y團(tuán)塊話過于嚴(yán)重,細(xì)胞黏在一起,細(xì)胞輪廓難以分辨清楚,體系1細(xì)胞有略微聚團(tuán)(SY5Y本身有聚團(tuán)生長特性),細(xì)胞形態(tài)正常。體系1更適合細(xì)胞增殖。

圖3 兩種營養(yǎng)體系培養(yǎng)的SY5Y形態(tài)對比圖(兩種營養(yǎng)體系所用血清批號一致)


本期講解就到這里了,下一期您想了解哪種細(xì)胞的培養(yǎng)攻略呢?歡迎留言評論哦。如有細(xì)胞培養(yǎng)問題,歡迎掃碼加我微信哦。

 

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