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細(xì)胞消化液的使用方法介紹

閱讀：1419 發(fā)布時(shí)間：2022-7-20

一般細(xì)胞長(zhǎng)至80%-90%密度則需要傳代消化，貼壁細(xì)胞傳代前，需要把細(xì)胞用消化試劑從培養(yǎng)容器表面解離出來，細(xì)胞得以分離成單個(gè)懸液傳代至含新鮮培養(yǎng)基的新容器內(nèi)。

　　細(xì)胞消化液使用原料為基因工程方法生產(chǎn)的胰蛋白酶，無動(dòng)物源性，無病毒污染可能性，且內(nèi)毒素水平低于藥典標(biāo)準(zhǔn)（<0.06EU/mL）。可以替代動(dòng)物源性胰蛋白酶?？捎糜诓溉閯?dòng)物細(xì)胞、間充質(zhì)干細(xì)胞等原代細(xì)胞。

　　使用方法：

　　1、在顯微鏡下觀察細(xì)胞，當(dāng)細(xì)胞融合度達(dá)到90%，即可傳代。

　　2、在超凈臺(tái)/安全柜中，吸走培養(yǎng)瓶中舊的培養(yǎng)液，加入PBS溶液洗一次，加入細(xì)胞消化液使之*覆蓋皿/瓶底。

　　3、室溫孵育4-5分鐘或37℃孵育2-3分鐘（不同細(xì)胞類型消化時(shí)間略有差異），顯微鏡下觀察到大部分細(xì)胞邊緣開始脫離皿/瓶底。

　　4、加入與消化液等倍體積細(xì)胞培養(yǎng)基，用移液器輕輕吹打瓶壁上未*脫離的細(xì)胞，并輕輕吹打混勻，使細(xì)胞*分散。

　　5、將細(xì)胞懸液轉(zhuǎn)移到離心管中，1200rpm離心3min。

　　6、棄上清，加入對(duì)應(yīng)細(xì)胞培養(yǎng)液，重懸細(xì)胞，按比例進(jìn)行傳代，均勻鋪在培養(yǎng)皿/瓶中，置于37℃，5%CO2條件下培養(yǎng)。

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