愛必信提供細胞培養(yǎng)一站式解決方案,培養(yǎng)基、培養(yǎng)基添加物、培養(yǎng)耗材、細胞檢測…… 點擊查看一站式解決方案》》
一般細胞長至80%-90%密度則需要傳代消化,貼壁細胞傳代前,需要把細胞用消化試劑從培養(yǎng)容器表面解離出來,細胞得以分離成單個懸液傳代至含新鮮培養(yǎng)基的新容器內(nèi)。
細胞消化常用方法 酶消化法 胰酶。這是用得最多的。一般濃度在0.25-0.5%。作用時間根據(jù)細胞種類、作用溫度等因素而變化很大,從幾分鐘到幾十分鐘不等。 0.25%的胰酶作用于單層貼壁的細胞,在37度條件下,一般消化1-5分鐘就足夠了。終止是用血清。主要作用于細胞間。配制時不能用含鈣、鎂的平衡液,否則影響活性。保存于-20度。
不破壞細胞表面分子,僅與CAMs螯合,因此,如果檢測細胞表面分子的話,盡量,甚至是一定不要用酶消化法。 EDTA。一般濃度在0.02%左右。作用于細胞與間質(zhì),對細胞間也有一定作用。注意,它能顯著影響pH值,而且在弱堿性條件下才易溶。因此,配制時應調(diào)節(jié)好酸堿度。它不能被終和。因此,消化下來的細胞要洗一遍。
直接吹打或用細胞刮子將細胞刮下來。
細胞消化液
1、在顯微鏡下觀察細胞 ,當細胞融合度達到 90%,即可傳代。 2、在超凈臺/安全柜中,吸走培養(yǎng)瓶中舊的培養(yǎng)液,加入 PBS 溶液洗一次,加入細胞消化液使之*覆蓋皿/瓶底。 3、室溫孵育 4-5 分鐘或 37℃孵育 2-3 分鐘(不同細胞類型消化時間略有差異),顯微鏡下觀察到大 部分細胞邊緣開始脫離皿/瓶底。 4、加入與消化液等倍體積細胞培養(yǎng)基,用移液器輕輕吹打瓶壁上未*脫離的細胞,并輕輕吹打混 勻,使細胞*分散。 5、將細胞懸液轉(zhuǎn)移到離心管中,1200 rpm 離心 3 min。 6、棄上清,加入對應細胞培養(yǎng)液,重懸細胞,按比例進行傳代,均勻鋪在培養(yǎng)皿/瓶中,置于 37℃, 5%CO2 條件下培養(yǎng)。
|
立即詢價
您提交后,專屬客服將第一時間為您服務(wù)