詳細介紹
產(chǎn)品名稱:小鼠皮下結締組織細胞;L Wnt-3A
規(guī)格:1×10?cells/T25培養(yǎng)瓶
貨號:YS-02X9881
細胞生長實驗 :細胞生長良好,形態(tài)正常
儲存條件:2℃-8℃,避光儲存
運輸條件:冰袋冷藏運輸
公司產(chǎn)品僅用于科研
細胞培養(yǎng)步驟
一.培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準備:
1) 準備RPMI-1640 培養(yǎng)基;優(yōu)質胎牛血清,10%;Glutamax(invitrogen 35050061),1%;Sodium pyruvate(invitrogen 11360070),1%;雙抗,1%。
2) 培養(yǎng)條件: 氣相:空氣,95%;二氧化碳,5%。 溫度:37攝氏度,培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3) 凍存液:90%血清,10%DMSO,現(xiàn)用現(xiàn)配。
二. 細胞處理:
1) 復蘇細胞:將含有1mL細胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍,加入4mL培養(yǎng)基混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,補加1-2mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜(或將細胞懸液加入250px皿中,加入約8ml培養(yǎng)基,培養(yǎng)過夜)。第二天換液并檢查細胞密度。
2) 細胞傳代:如果細胞密度達80%-90%,即可進行傳代培養(yǎng)。
注意事項:
(1)凍存前細胞狀態(tài),細胞最好在對數(shù)生長期,細胞密度適合,剛剛發(fā)生細胞融合,過密或連成片的細胞狀態(tài)不好,而且消化時不容易分散;
(2)凍存的密度不宜過低,10的6次方-7次方的數(shù)量級比較好,我凍存的細胞一般T25培養(yǎng)瓶(5*107),一瓶凍一管(1.5ml凍存管),10cm培養(yǎng)皿(大概10的8次方個細胞)分成兩管。
(3)消化和吹打,切忌胰酶消化過度,吹打不可太用力,最好不要吹出好多泡泡。消化后立即加入*培養(yǎng)基吹打哦,不是加入凍存液再吹打。
(4)離心后加入凍存液。凍存液中FBS的用量對于腫瘤細胞株而言要求不是很嚴格,我從10%-90%都用過,問題不大,個人認為10%-20%可以了,能節(jié)約處就節(jié)約點嘛!另外,凍存液可以在處理細胞前配置,放在4度冰箱預冷。細胞離心后直接用預冷的凍存液重懸,移入凍存管。
(5)關于“慢凍",傳統(tǒng)的方法,LLC細胞凍存管用棉花包好,4度2h,-20度2h或更長,-80度過夜,最后液氮。對于條件較好的實驗室和細胞凍存數(shù)量多的實驗室,推薦使用程序降溫盒,內裝異丙醇,在-80度并內可以逐漸降溫,很方便,省了包棉花、4度、-20度了。
使用步驟:
一)準確稱量試劑:根據(jù)不同的菌類和用途,選擇適宜的培養(yǎng)基,培養(yǎng)基所需試劑必須純凈。
(二)校正pH值:將稱量好的培養(yǎng)基各種成分放入容器內,標記劃線,加熱溶解,補充水分,測定酸堿度,常用pH6.8~8.0的精密試紙或酸度計測定。用1N NaOH和1N HCl調節(jié)pH值到適宜范圍內。
(三)過濾:將玻璃漏斗置鐵架上,再用人子宮成纖維細胞*培養(yǎng)基紗布夾棉花或用濾紙放在漏斗中,將上述培養(yǎng)基倒入其中過濾至透明。
(四)分裝:將過濾后的培養(yǎng)基分裝于中試管或三角瓶內(試管內每支裝5mL;三角瓶中裝100~150ml),塞好棉塞用牛皮紙包扎好,準備滅菌。
(五)滅菌:培養(yǎng)基的滅菌,常用高壓蒸汽滅菌法。一般微生物的營養(yǎng)細胞在水中煮沸后即被殺死,但細菌的芽胞有較強的抗熱性,須經(jīng)高壓蒸汽滅菌才能達到*滅菌的目的。根據(jù)蒸汽溫度隨壓力升高而上升的原理,即壓力越大,蒸汽溫度就越高。因此,在同一溫度條件下,采用高壓蒸汽滅菌比干熱滅菌法效果要好。而且在濕熱情況下,菌體吸收水分后,其蛋白質易于凝固變性,因為蒸汽的穿透力強,殺菌效果好。
細胞特性:
1)】組織來源于實驗動物的正常眼組織。
2)細胞鑒定:細胞免疫熒光染色為陽性。
3)經(jīng)鑒定細胞純度高于90%。
4)不含有 HIV-1、 HBV、HCV、支原體、細菌、酵母和真菌。
5)細胞生長方式:上皮樣,不規(guī)則細胞,貼壁培養(yǎng)。
VWCE/URG11/FITC 熒光素標記乙型肝炎病毒X蛋白(HBxAg)抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格: 0.2ml
CK8(Cytokeratin 8) 細胞角蛋白8(多肽)Multi-class antibodies規(guī)格: 0.5mg
5-羥色胺受體1B(5-HT/serotonin R1B)抗體 5-HTR1B 0.1ml
SEPT1 英文名稱: 細胞分化蛋白SEP1抗體 0.2ml
Phospho-HER3 (Tyr1276) 英文名稱: 磷酸化HER3受體抗體 0.1ml
Rhesus antibody Rh phospho-FSCN1(Ser39) 磷酸化纖維束蛋白同源物1抗體 規(guī)格 0.1ml
CK8(Cytokeratin 8) 細胞角蛋白8(多肽)Multi-class antibodies規(guī)格: 0.5mg
BNP(Human) 人腦鈉素/腦鈉尿肽Multi-class antibodies規(guī)格: 48T
CK10 細胞角蛋白10抗體Multi-class antibodies規(guī)格: 0.2ml
Rhesus antibody Rh NRAS 原癌基因N-Ras抗體 規(guī)格 0.1ml
Pre-stained Protein Marker 寬范圍預染蛋白質分子量標準(20-120kDa)/6條帶 100ul(20次)
TEF4 英文名稱: 轉錄增強因子TEF4抗體 0.1ml
C8orf47 英文名稱: 8號染色體開放閱讀框47抗體 0.2ml
CK10 細胞角蛋白10抗體Multi-class antibodies規(guī)格: 0.2ml
Goat rabbit IgG/Alexa Fluor 350 Alexa Fluor 350標記的羊抗兔IgG 0.1ml
FNBP3 英文名稱: 甲精結合蛋白3抗體 0.1ml
FOSL1抗體 FOSL1 1ml
phospho-PAK1/2/3(pThr423)/FITC 熒光素標記抗磷酸化p21激活激酶1/2/3抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格: 0.2ml
Rhesus antibody Rh phospho-STAT5a(Ser726) 磷酸化信號轉導和轉錄激活因子5a抗體 規(guī)格 0.1ml
Avidin/Gold 金標記親合素(10nm/15nm)Multi-class antibodies規(guī)格: 0.1ml
小鼠皮下結締組織細胞;L Wnt-3A細胞內氧化應活性氧(ROS)高質綠色熒光測定試劑盒20次人腺苷酸環(huán)化酶1(AC-1)ELISA試劑盒,
細胞內氧化應活性氧(ROS)初級綠色熒光測定試劑盒100次人基質金屬蛋白酶8/中性粒膠原酶(MMP-8)ELISA試劑盒,
活體組織氧化應活性氧(ROS)高質綠色熒光測定試劑盒8/20次人催產(chǎn)素(OT)ELISA試劑盒,
活體組織氧化應活性氧(ROS)初級綠色熒光測定試劑盒40/100次小鼠糖蛋白130(gp130)ELISA試劑盒,
凍切片氧化應活性氧(ROS)高質綠色熒光測定試劑盒50次人補體片斷3b(C3b)ELISA試劑盒,
凍切片氧化應活性氧(ROS)初級綠色熒光測定試劑盒50次人纖溶抑制因子/凝血酶活的纖溶抑制物(TAFI)ELISA試劑盒,
/酵母細胞內氧化應活性氧(ROS)高質綠色熒光測定試劑盒20次人鈣網(wǎng)蛋白(CRT)ELISA試劑盒,
/酵母細胞內氧化應活性氧(ROS)初級綠色熒光測定試劑盒50次人泛素蛋白(Ub)ELISA試劑盒,
植物細胞內氧化應活性氧(ROS)高質熒光測定試劑盒20次人彈性蛋白(ELN)ELISA試劑盒,
植物細胞內氧化應活性氧(ROS)初級熒光測定試劑盒50次小鼠苗條素受體(LR/Ob-R)ELISA試劑盒,
體液氧化應活性氧(ROS)高質熒光測定試劑盒50次小鼠結合珠蛋白/觸珠蛋白(Hpt/HP)ELISA試劑盒,
體液氧化應活性氧(ROS)初級熒光測定試劑盒50次小鼠脫氫表雄酮硫酸酯(DHEA-S)ELISA試劑盒,
活體細胞氧化應活性氧(ROS)原位染色試劑盒(超氧陰離子)100次小鼠組(HIS)ELISA試劑盒,
凍切片氧化應活性氧(ROS)原位染色試劑盒(超氧陰離子)50次小鼠神經(jīng)肽Y(NP-Y)ELISA試劑盒,
活體細胞氧化應活性氧(ROS)原位比色法定量檢測試劑盒(超氧陰離子)100次小鼠6酮前列腺素(6-K-PG)ELISA試劑盒,