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詳細(xì)介紹
【友情提示】：本產(chǎn)品僅供科研研究使用，不得用于人體臨床直接檢測。避免給您帶來不必要的損失，請仔細(xì)閱讀購買說明！
產(chǎn)品名稱：蛋白質(zhì)羰基測試盒說明書
規(guī)格 : 50管/24樣、100管/48樣
測試方法:微量法、紫外分光光度法
貨號：YS-01S6375
測定意義
蛋白質(zhì)羰基是多種氨基酸在蛋白質(zhì)的氧化修飾過程中的早期標(biāo)志，其含量高低表明蛋白質(zhì)氧化損傷程度的大小，是衡量蛋白質(zhì)氧化損傷的主要指標(biāo)。
測定原理：
羰基與2,4-二硝基肼反應(yīng)生成紅色2,4-二硝基腙，在370nm處有特征吸收峰。
需自備的儀器和用品：
天平、恒溫水浴鍋、低溫離心機(jī)、漩渦震蕩儀、紫外分光光度計(jì)、1 mL石英比色皿和蒸餾水，無水乙醇，乙酸乙酯。
樣品制備：
1）. 直接或稀釋使用清亮無色中性液體樣品，體積可達(dá)2.000ml。
2）. 過濾混濁溶液。
3）. 除去樣品中的CO 2 。
4 ）. 加氫氧化鉀或氫氧化鈉將酸性樣品的PH值調(diào)至8.0。
5 ）. 調(diào)整酸性淺色樣品的PH值至8.0，孵育約15分鐘。
6 ）. 用空白樣品做對照測定有色樣品（如有必要調(diào)整PH值至8.0）。
7 ）. 用PVPP（ 聚乙烯吡咯烷酮）或聚酰胺處理深色未經(jīng)稀釋或體積更大的樣品。
8 ）. 壓碎、攪勻固體或半固體樣品，用水溶解提取。
9 ）. 用Carrez試劑將含有蛋白質(zhì)的樣品去蛋白。
10）.含脂肪的樣品用熱水提取。
特點(diǎn):
(1)應(yīng)用廣泛
由于各種各樣的無機(jī)物和有機(jī)物在紫外可見區(qū)都有吸收,因此均可借此法加以測定。到目前為止,幾乎化學(xué)元素周期表上的所有元素(除少數(shù)放射性元素和惰性元素之外)均可采用此法。
(2)靈敏度高
由于相應(yīng)學(xué)科的發(fā)展,使新的有機(jī)顯色劑的合成和研究取得可喜的進(jìn)展,從而對元素測定的靈敏度大大提高了一步。特別是由于多元絡(luò)合物和各種表面活性劑的應(yīng)用研究,使許多元素的摩爾吸光系數(shù)由原來的幾萬提高到幾十萬。相對于其它痕量分析方法而言,光度法的精密度和準(zhǔn)確度一致*是比較高的。不但在實(shí)際工作中光度法被廣泛采用,在標(biāo)準(zhǔn)參考物質(zhì)的研制中,它更受重視,很多光度分析法已制定成為標(biāo)準(zhǔn)方法。
(3)選擇性好
目前已有些元素只要利用控制適當(dāng)?shù)娘@色條件就可直接進(jìn)行光度法測定,如鈷、鈾、鎳、銅、銀、鐵等元素的測定,已有比較滿意的方法了。
(4)準(zhǔn)確度高
對于一般的分光光度法來說,其濃度測量的相對誤差在1-3%范圍內(nèi),如采用示差分光度法測量,則誤差往往可減少到千分之幾。
(5)適用濃度范圍廣
可從常量(1-50%)(尤其是使用示差法)到痕量(10-6-10-8%)(經(jīng)預(yù)富集后)。
(6)分析成本低、操作簡便、快速
Anti-Phospho-p73 (Tyr99) /FITC 熒光素標(biāo)記磷酸化P73抑制基因抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格： 0.2ml
Rabbit Anti-human IgM/Biotin 生物素化兔抗人IgMMulti-class antibodies規(guī)格： 0.3ml
間隙連接蛋白40抗體 Anti-Cx40 0.1ml
Rabbit Anti-mouse IgM/PE-Cy5.5 PE-Cy5.5標(biāo)記的兔抗小鼠IgM 0.1ml
FOXD4 英文名稱： 叉頭蛋白D4 0.2ml
Rhesus antibody Rh Phospho-Wee1(Ser53) 磷酸化WEE1蛋白抗體 規(guī)格 0.1ml
Rabbit Anti-human IgM/Biotin 生物素化兔抗人IgMMulti-class antibodies規(guī)格： 0.3ml
MLN(Motilin)peptide 胃動(dòng)素多肽Multi-class antibodies規(guī)格： 0.5mg
Anti-Annexin VI 膜粘連蛋白 VI抗體Multi-class antibodies規(guī)格： 0.2ml
Rhesus antibody Rh phospho-Bcl 10(Ser218) 磷酸化Bcl-10抗體 規(guī)格 0.1ml
兔抗人 C3c/FITC 0.2ml 綠色熒光，Dako公司
Villin 英文名稱： 絨毛蛋白抗體 0.2ml
DDX4 英文名稱： DDX4抗體 0.1ml
Anti-Annexin VI 膜粘連蛋白 VI抗體Multi-class antibodies規(guī)格： 0.2ml
phospho-STAT5b(Ser731) 英文名稱： 磷酸化信號轉(zhuǎn)導(dǎo)和轉(zhuǎn)錄激活因子5b抗體 0.1ml
EID2 英文名稱： EID2蛋白抗體 0.1ml
辣根過氧化物酶標(biāo)記β-肌動(dòng)蛋白 Anti-β-Actin/HRP 0.1ml
Anti-Tubulin- Beta/FITC 熒光素標(biāo)記微管蛋白抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格： 0.2ml
Rhesus antibody Rh phospho-IGF1R(Tyr1165+Tyr1166) 磷酸化胰島素樣生長因子1受體抗體 規(guī)格 0.1ml
TY3H ( Tyrosine Hydroxylase ) 酪氨酸羥化酶(抗原)Multi-class antibodies規(guī)格： 0.5mg
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操作步驟:
實(shí)驗(yàn)開始前，各試劑均應(yīng)平衡至室溫（試劑不能直接在37℃溶解）；試劑或樣品稀釋時(shí)，均需混勻，混勻時(shí)盡量避免起泡。實(shí)驗(yàn)前應(yīng)預(yù)測樣品含量，如樣品濃度過高時(shí)，應(yīng)對樣品進(jìn)行稀釋，以使稀釋后的樣品符合試劑盒的檢測范圍，計(jì)算時(shí)再乘以相應(yīng)的稀釋倍數(shù)。
1. 加樣：分別設(shè)空白孔、標(biāo)準(zhǔn)孔、待測樣品孔?？瞻卓准訕悠废♂屢?00μl，余孔分別加標(biāo)準(zhǔn)品或待測樣品100μl，注意不要有氣泡，加樣將樣品加于酶標(biāo)板孔底部，盡量不觸及孔壁，輕輕晃動(dòng)混勻，酶標(biāo)板加上蓋或覆膜，37℃反應(yīng)120分鐘。為保證實(shí)驗(yàn)結(jié)果有效性，每次實(shí)驗(yàn)請使用新的標(biāo)準(zhǔn)品溶液。
2. 棄去液體，甩干，不用洗滌。每孔加檢測溶液A工作液 100μl（在使用前一小時(shí)內(nèi)配制），酶標(biāo)板加上覆膜, 37℃反應(yīng)60分鐘。
3. 溫育60分鐘后，棄去孔內(nèi)液體，甩干，洗板3次，每次浸泡1-2分鐘，大約400μl/每孔，甩干（也可輕拍將孔內(nèi)液體拍干）。
4. 每孔加檢測溶液B工作液（同檢測A工作液） 100μl，酶標(biāo)板加上覆膜37℃反應(yīng)60分鐘。
5. 溫育60分鐘后，棄去孔內(nèi)液體，甩干，洗板5次，每次浸泡1-2分鐘，350μl/每孔，甩干（也可輕拍將孔內(nèi)液體拍干）。
6. 依序每孔加底物溶液90μl，酶標(biāo)板加上覆膜37℃避光顯色（30分鐘內(nèi)，此時(shí)肉眼可見標(biāo)準(zhǔn)品的前3-4孔有明顯的梯度蘭色，后3-4孔梯度不明顯，即可終止）。
7. 依序每孔加終止溶液50μl，終止反應(yīng)，此時(shí)藍(lán)色立轉(zhuǎn)黃色。終止液的加入順序應(yīng)盡量與底物液的加入順序相同。為了保證實(shí)驗(yàn)結(jié)果的準(zhǔn)確性，底物反應(yīng)時(shí)間到后應(yīng)盡快加入終止液。
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