外周血B淋巴細(xì)胞;IM-9公司正在銷(xiāo)售的產(chǎn)品：脫羧酶蛋白體36抗體Anti-Apo-E/FITC 熒光素標(biāo)記載脂蛋白E抗體IgG
3號(hào)染色體開(kāi)放閱讀框78抗體Anti-ApoH/FITC 熒光素標(biāo)記載脂蛋白H抗體IgG
過(guò)敏素C5a/補(bǔ)體C5a抗體Anti-Apollon/FITC 熒光素標(biāo)記Apollon凋亡抑制蛋白抗體IgG
卵巢癌抗原抗體Anti-APP/FITC 熒光素標(biāo)記APP淀

產(chǎn)品名稱(chēng)：外周血B淋巴細(xì)胞;IM-9

規(guī)格：1×10?cells/T25培養(yǎng)瓶
貨號(hào)：YS-02X9873

細(xì)胞生長(zhǎng)實(shí)驗(yàn) ：細(xì)胞生長(zhǎng)良好，形態(tài)正常

儲(chǔ)存條件：2℃-8℃，避光儲(chǔ)存

運(yùn)輸條件：冰袋冷藏運(yùn)輸
公司產(chǎn)品僅用于科研

細(xì)胞特性：

1)】組織來(lái)源于實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的正常眼組織。

2)細(xì)胞鑒定：細(xì)胞免疫熒光染色為陽(yáng)性。

3)經(jīng)鑒定細(xì)胞純度高于90%。

4)不含有 HIV-1、 HBV、HCV、支原體、細(xì)菌、酵母和真菌。

5)細(xì)胞生長(zhǎng)方式：上皮樣，不規(guī)則細(xì)胞，貼壁培養(yǎng)。

 

細(xì)胞培養(yǎng)步驟

一．培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備：

1） 準(zhǔn)備RPMI-1640 培養(yǎng)基；優(yōu)質(zhì)胎牛血清，10%；Glutamax（invitrogen 35050061），1%；Sodium pyruvate（invitrogen 11360070），1%；雙抗，1%。

2） 培養(yǎng)條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37攝氏度，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。

3） 凍存液：90%血清，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配。

二． 細(xì)胞處理：

1） 復(fù)蘇細(xì)胞：將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍，加入4mL培養(yǎng)基混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過(guò)夜（或?qū)⒓?xì)胞懸液加入250px皿中，加入約8ml培養(yǎng)基，培養(yǎng)過(guò)夜）。第二天換液并檢查細(xì)胞密度。

2） 細(xì)胞傳代：如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。

注意事項(xiàng)：

（1）凍存前細(xì)胞狀態(tài)，細(xì)胞最好在對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期，細(xì)胞密度適合，剛剛發(fā)生細(xì)胞融合，過(guò)密或連成片的細(xì)胞狀態(tài)不好，而且消化時(shí)不容易分散；

（2）凍存的密度不宜過(guò)低，10的6次方-7次方的數(shù)量級(jí)比較好，我凍存的細(xì)胞一般T25培養(yǎng)瓶（5*107），一瓶?jī)鲆还埽?.5ml凍存管），10cm培養(yǎng)皿（大概10的8次方個(gè)細(xì)胞）分成兩管。

（3）消化和吹打，切忌胰酶消化過(guò)度，吹打不可太用力，最好不要吹出好多泡泡。消化后立即加入*培養(yǎng)基吹打哦，不是加入凍存液再吹打。

（4）離心后加入凍存液。凍存液中FBS的用量對(duì)于腫瘤細(xì)胞株而言要求不是很?chē)?yán)格，我從10%-90%都用過(guò)，問(wèn)題不大，個(gè)人認(rèn)為10%-20%可以了，能節(jié)約處就節(jié)約點(diǎn)嘛！另外，凍存液可以在處理細(xì)胞前配置，放在4度冰箱預(yù)冷。細(xì)胞離心后直接用預(yù)冷的凍存液重懸，移入凍存管。

（5）關(guān)于“慢凍"，傳統(tǒng)的方法，LLC細(xì)胞凍存管用棉花包好，4度2h，-20度2h或更長(zhǎng)，-80度過(guò)夜，最后液氮。對(duì)于條件較好的實(shí)驗(yàn)室和細(xì)胞凍存數(shù)量多的實(shí)驗(yàn)室，推薦使用程序降溫盒，內(nèi)裝異丙醇，在-80度并內(nèi)可以逐漸降溫，很方便，省了包棉花、4度、-20度了。

phospho GAP-43(pSer41)(phospho Growth associated protein 43 ) 磷酸化神經(jīng)生長(zhǎng)相關(guān)蛋白43抗原Multi-class antibodies規(guī)格： 0.5mg

CLU Clusterin / Apolipoprotein J / Apo-J 鼠單抗 (FITC) Human

Rhesus antibody Rh phospho-DAXX (Ser671) 磷酸化Fas相關(guān)死亡結(jié)構(gòu)域蛋白抗體 規(guī)格 0.1ml

尼龍膜(帶正電荷)(15×60cm 0.45um) 1張 Pall-Gelman

ZNF231 英文名稱(chēng)： 鋅指蛋白231抗體 0.2ml

DDB2 英文名稱(chēng)： DNA損傷結(jié)合蛋白2抗體 0.1ml

CLU Clusterin / Apolipoprotein J / Apo-J 鼠單抗 (FITC) Human

Calcitonin 人降鈣素Multi-class antibodies規(guī)格： 48T

 CK19 細(xì)胞角蛋白19抗體Multi-class antibodies規(guī)格： 0.1ml

Rhesus antibody Rh NRXN3 軸突蛋白3抗體 規(guī)格 0.1ml

4-Chloro-1-Naphthol Stainning Kit 氯酚染色試劑盒 kit

TEP1 英文名稱(chēng)： 端粒酶相關(guān)蛋白1抗體 0.2ml

Complement component C9b 英文名稱(chēng)： 補(bǔ)體C9b抗體 0.2ml

 CK19 細(xì)胞角蛋白19抗體Multi-class antibodies規(guī)格： 0.1ml

Goat  rabbit IgG/Alexa Fluor 647 Alexa Fluor 647標(biāo)記的羊抗兔IgG 0.1ml

FLNC 英文名稱(chēng)： 細(xì)絲蛋白2抗體 0.1ml

γ1氨基丁酸受體α1抗體  GABA-ARα1 0.1ml

 Phospho-PAK1 (Thr423)/PAK2 (Thr402) /FITC 熒光素標(biāo)記磷酸化p21激活激酶1/2抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格： 0.2ml

Rhesus antibody Rh Phospho-SRF (Ser103) 磷酸化生長(zhǎng)釋放因子抗體(血清應(yīng)答因子) 規(guī)格 0.1ml

Goat  Guinea IgG 羊抗豚鼠IgG (親和層析純化)Multi-class antibodies規(guī)格： 1mg
外周血B淋巴細(xì)胞;IM-9動(dòng)物細(xì)胞周期S期同步（SYNCHRONY）處理試劑盒10次人骨涎蛋白（BSP）ELISA試劑盒,BSP ELISA

動(dòng)物細(xì)胞周期S后期同步（SYNCHRONY）處理試劑盒10次人Ⅰ型前膠原C末端肽（CⅠCP）ELISA試劑盒,CⅠCP ELISA

動(dòng)物細(xì)胞周期G2期同步（SYNCHRONY）處理試劑盒10次人心肌錨蛋白重復(fù)域1（ANKRD1）ELISA試劑盒,

動(dòng)物細(xì)胞周期M期同步（SYNCHRONY）處理試劑盒10次人基質(zhì)γ羧基谷蛋白（MGP）ELISA試劑盒,

通用型動(dòng)物細(xì)胞周期（G1/S和G2/M期）同步（SYNCHRONY）處理試劑盒10次人抗原提呈相關(guān)轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白/T活化蛋白（TAP）ELISA試劑盒,

植物細(xì)胞周期G0期同步（SYNCHRONY）處理試劑盒10次小鼠血管生成素4（ANG-4）ELISA試劑盒,

植物細(xì)胞周期G1早期同步（SYNCHRONY）處理試劑盒10次小鼠膽固醇酯轉(zhuǎn)移蛋白（CETP）ELISA試劑盒,

植物細(xì)胞周期G1期同步（SYNCHRONY）處理試劑盒10次大鼠Ⅰ型膠原交聯(lián)羧基末端肽（ⅠCTP）ELISA試劑盒,

植物細(xì)胞周期G1后期同步（SYNCHRONY）處理試劑盒10次大鼠c-jun ELISA試劑盒,

植物細(xì)胞周期S早期同步（SYNCHRONY）處理試劑盒10次大鼠抑制素結(jié)合蛋白（INHBP）ELISA試劑盒,

植物細(xì)胞周期S期同步（SYNCHRONY）處理試劑盒10次大鼠血管緊張素Ⅰ（Ang-Ⅰ）ELISA試劑盒,

植物細(xì)胞周期S后期同步（SYNCHRONY）處理試劑盒10次大鼠水通道蛋白2（AQP-2） ELISA試劑盒,

植物細(xì)胞周期G2期同步（SYNCHRONY）處理試劑盒10次大鼠載脂蛋白B100（apo-B100）ELISA試劑盒,

植物細(xì)胞周期M期同步（SYNCHRONY）處理試劑盒10次豬可溶性E選擇素（sE-selectin）ELISA試劑盒,

通用型植物樣品細(xì)胞周期G1/S和G2/M期同步（SYNCHRONY）處理試劑盒10次豬去甲腎上腺素（NE）ELISA試劑盒,

使用步驟：

一）準(zhǔn)確稱(chēng)量試劑：根據(jù)不同的菌類(lèi)和用途，選擇適宜的培養(yǎng)基，培養(yǎng)基所需試劑必須純凈。

（二）校正pH值：將稱(chēng)量好的培養(yǎng)基各種成分放入容器內(nèi)，標(biāo)記劃線，加熱溶解，補(bǔ)充水分，測(cè)定酸堿度，常用pH6.8～8.0的精密試紙或酸度計(jì)測(cè)定。用1N NaOH和1N HCl調(diào)節(jié)pH值到適宜范圍內(nèi)。

（三）過(guò)濾：將玻璃漏斗置鐵架上，再用人子宮成纖維細(xì)胞*培養(yǎng)基紗布夾棉花或用濾紙放在漏斗中，將上述培養(yǎng)基倒入其中過(guò)濾至透明。

（四）分裝：將過(guò)濾后的培養(yǎng)基分裝于中試管或三角瓶?jī)?nèi)（試管內(nèi)每支裝5mL；三角瓶中裝100～150ml），塞好棉塞用牛皮紙包扎好，準(zhǔn)備滅菌。

（五）滅菌：培養(yǎng)基的滅菌，常用高壓蒸汽滅菌法。一般微生物的營(yíng)養(yǎng)細(xì)胞在水中煮沸后即被殺死，但細(xì)菌的芽胞有較強(qiáng)的抗熱性，須經(jīng)高壓蒸汽滅菌才能達(dá)到*滅菌的目的。根據(jù)蒸汽溫度隨壓力升高而上升的原理，即壓力越大，蒸汽溫度就越高。因此，在同一溫度條件下，采用高壓蒸汽滅菌比干熱滅菌法效果要好。而且在濕熱情況下，菌體吸收水分后，其蛋白質(zhì)易于凝固變性，因?yàn)檎羝拇┩噶?qiáng)，殺菌效果好。