產(chǎn)品名稱:大鼠視網(wǎng)膜神經(jīng)節(jié)細(xì)胞*培養(yǎng)基
規(guī)格:100mL/125mL×4
貨號:YS-02X10231
細(xì)胞生長實驗 :細(xì)胞生長良好,形態(tài)正常
儲存條件:2℃-8℃,避光儲存
運輸條件:冰袋冷藏運輸
公司產(chǎn)品僅用于科研
細(xì)胞培養(yǎng)步驟
一.培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備:
1) 準(zhǔn)備RPMI-1640 培養(yǎng)基;優(yōu)質(zhì)胎牛血清,10%;Glutamax(invitrogen 35050061),1%;Sodium pyruvate(invitrogen 11360070),1%;雙抗,1%。
2) 培養(yǎng)條件: 氣相:空氣,95%;二氧化碳,5%。 溫度:37攝氏度,培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3) 凍存液:90%血清,10%DMSO,現(xiàn)用現(xiàn)配。
二. 細(xì)胞處理:
1) 復(fù)蘇細(xì)胞:將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍,加入4mL培養(yǎng)基混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,補加1-2mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜(或?qū)⒓?xì)胞懸液加入250px皿中,加入約8ml培養(yǎng)基,培養(yǎng)過夜)。第二天換液并檢查細(xì)胞密度。
2) 細(xì)胞傳代:如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%,即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。
注意事項:
(1)凍存前細(xì)胞狀態(tài),細(xì)胞最好在對數(shù)生長期,細(xì)胞密度適合,剛剛發(fā)生細(xì)胞融合,過密或連成片的細(xì)胞狀態(tài)不好,而且消化時不容易分散;
(2)凍存的密度不宜過低,10的6次方-7次方的數(shù)量級比較好,我凍存的細(xì)胞一般T25培養(yǎng)瓶(5*107),一瓶凍一管(1.5ml凍存管),10cm培養(yǎng)皿(大概10的8次方個細(xì)胞)分成兩管。
(3)消化和吹打,切忌胰酶消化過度,吹打不可太用力,最好不要吹出好多泡泡。消化后立即加入*培養(yǎng)基吹打哦,不是加入凍存液再吹打。
(4)離心后加入凍存液。凍存液中FBS的用量對于細(xì)胞而言要求不是很嚴(yán)格,我從10%-90%都用過,問題不大,個人認(rèn)為10%-20%可以了,能節(jié)約處就節(jié)約點嘛!另外,凍存液可以在處理細(xì)胞前配置,放在4度冰箱預(yù)冷。細(xì)胞離心后直接用預(yù)冷的凍存液重懸,移入凍存管。
(5)關(guān)于“慢凍",傳統(tǒng)的方法,細(xì)胞凍存管用棉花包好,4度2h,-20度2h或更長,-80度過夜,最后液氮。對于條件較好的實驗室和細(xì)胞凍存數(shù)量多的實驗室,推薦使用程序降溫盒,內(nèi)裝異丙醇,在-80度并內(nèi)可以逐漸降溫,很方便,省了包棉花、4度、-20度了。
使用步驟:
一)準(zhǔn)確稱量試劑:根據(jù)不同的菌類和用途,選擇適宜的培養(yǎng)基,培養(yǎng)基所需試劑必須純凈。
(二)校正pH值:將稱量好的培養(yǎng)基各種成分放入容器內(nèi),標(biāo)記劃線,加熱溶解,補充水分,測定酸堿度,常用pH6.8~8.0的精密試紙或酸度計測定。用1N NaOH和1N HCl調(diào)節(jié)pH值到適宜范圍內(nèi)。
(三)過濾:將玻璃漏斗置鐵架上,再用培養(yǎng)基紗布夾棉花或用濾紙放在漏斗中,將上述培養(yǎng)基倒入其中過濾至透明。
(四)分裝:將過濾后的培養(yǎng)基分裝于中試管或三角瓶內(nèi)(試管內(nèi)每支裝5mL;三角瓶中裝100~150ml),塞好棉塞用牛皮紙包扎好,準(zhǔn)備滅菌。
(五)滅菌:培養(yǎng)基的滅菌,常用高壓蒸汽滅菌法。一般微生物的營養(yǎng)細(xì)胞在水中煮沸后即被殺死,但細(xì)菌的芽胞有較強的抗熱性,須經(jīng)高壓蒸汽滅菌才能達(dá)到*滅菌的目的。根據(jù)蒸汽溫度隨壓力升高而上升的原理,即壓力越大,蒸汽溫度就越高。因此,在同一溫度條件下,采用高壓蒸汽滅菌比干熱滅菌法效果要好。而且在濕熱情況下,菌體吸收水分后,其蛋白質(zhì)易于凝固變性,因為蒸汽的穿透力強,殺菌效果好。
細(xì)胞特性:
1)】組織來源于實驗動物的正常眼組織。
2)細(xì)胞鑒定:細(xì)胞免疫熒光染色為陽性。
3)經(jīng)鑒定細(xì)胞純度高于90%。
4)不含有 HIV-1、 HBV、HCV、支原體、細(xì)菌、酵母和真菌。
5)細(xì)胞生長方式:上皮樣,不規(guī)則細(xì)胞,貼壁培養(yǎng)。
HSP gp96 ELISA Kit 大鼠熱休克蛋白糖蛋白96Multi-class antibodies規(guī)格: 48T
VEGFB 血管內(nèi)皮生長因子B抗體Multi-class antibodies規(guī)格: 0.2ml
Rhesus antibody Rh Gamma-Adaptin/γ-Adaptin 銜接蛋白γ抗體 規(guī)格 0.1ml
OVA sIgE ELISA Kit 大鼠卵清蛋白特異性IgE 96T
phospho-NFKB p65(Ser529) 英文名稱: 磷酸化細(xì)胞核因子抗體 0.1ml
AMY2A 英文名稱: 胰腺α淀粉酶抗體 0.1ml
VEGFB 血管內(nèi)皮生長因子B抗體Multi-class antibodies規(guī)格: 0.2ml
Lymphotactin 大鼠細(xì)胞趨化因子Multi-class antibodies規(guī)格: 48T
E.coli DH-5 Alpha DH5α大腸桿菌菌體蛋白抗體Multi-class antibodies規(guī)格: 0.1ml
Rhesus antibody Rh MUL1/RNF218 E3泛素連接酶MUL1抗體 規(guī)格 0.2ml
MBP/MBL(Human Mannma binding protein/mannan binding lectin) ELISA Kit 人甘露糖結(jié)合蛋白/甘露糖結(jié)合凝集素 96T
SAPK3 英文名稱: 原活化蛋白激酶磷酸酶p38γ抗體 0.1ml
CHRNA10 英文名稱: 型乙酰膽堿受體α10/AChRα10抗體 0.2ml
E.coli DH-5 Alpha DH5α大腸桿菌菌體蛋白抗體Multi-class antibodies規(guī)格: 0.1ml
Mouse rabbit IgG/Bio 生物素標(biāo)記的小鼠抗兔IgG 0.1ml
GPR171 英文名稱: G蛋白偶聯(lián)受體171抗體 0.2ml
β-肌動蛋白抗體 β-Actin 0.1ml
MuRF1/Trim63/FITC 熒光素標(biāo)記肌肉細(xì)胞特異性泛素蛋白連接酶1抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格: 0.2ml
Rhesus antibody Rh PRR11 富含脯蛋白11抗體 規(guī)格 0.2ml
UMOD/FITC 熒光素標(biāo)記UMOD蛋白抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格: 0.2ml
大鼠視網(wǎng)膜神經(jīng)節(jié)細(xì)胞*培養(yǎng)基細(xì)胞乙酰膽堿酯酶活性比色法定量檢測試劑盒20次酚酞
組織乙酰膽堿酯酶活性比色法定量檢測試劑盒20次三鹽酸亞精
血液乙酰膽堿酯酶活性比色法定量檢測試劑盒20次三十六烷
體液乙酰膽堿酯酶活性比色法定量檢測試劑盒20次無水硫酸鈷
乙酰膽堿酯酶活性抑制劑篩選比色法檢測試劑盒20次三七莖葉皂苷
通用型乙酰膽堿酯酶活性熒光法定量檢測試劑盒20次甜菜堿
細(xì)胞乙酰膽堿酯酶活性熒光法定量檢測試劑盒20次祖師麻甲素(瑞香素)
組織乙酰膽堿酯酶活性熒光法定量檢測試劑盒20次八角茴香油
血液乙酰膽堿酯酶活性熒光法定量檢測試劑盒20次萘
體液乙酰膽堿酯酶活性熒光法定量檢測試劑盒20次寶藿苷Ⅰ
通用型乙酰膽堿酯酶活性化學(xué)發(fā)光法定量檢測試劑盒20次薄荷
細(xì)胞乙酰膽堿酯酶活性化學(xué)發(fā)光法定量檢測試劑盒20次八角茴香
組織乙酰膽堿酯酶活性化學(xué)發(fā)光法定量檢測試劑盒20次昆明山海棠
血液乙酰膽堿酯酶活性化學(xué)發(fā)光法定量檢測試劑盒20次羌活(寬葉羌活)
體液乙酰膽堿酯酶活性化學(xué)發(fā)光法定量檢測試劑盒20次鹽酸丙哌維林