詳細介紹
規(guī)格:1×10?cells/T25培養(yǎng)瓶
貨號:YS-02X9717
細胞生長實驗 :細胞生長良好,形態(tài)正常
儲存條件:2℃-8℃,避光儲存
運輸條件:冰袋冷藏運輸
公司產品僅用于科研
細胞培養(yǎng)步驟
一.培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準備:
1) 準備RPMI-1640 培養(yǎng)基;優(yōu)質胎牛血清,10%;Glutamax(invitrogen 35050061),1%;Sodium pyruvate(invitrogen 11360070),1%;雙抗,1%。
2) 培養(yǎng)條件: 氣相:空氣,95%;二氧化碳,5%。 溫度:37攝氏度,培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3) 凍存液:90%血清,10%DMSO,現(xiàn)用現(xiàn)配。
二. 細胞處理:
1) 復蘇細胞:將含有1mL細胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍,加入4mL培養(yǎng)基混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,補加1-2mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜(或將細胞懸液加入250px皿中,加入約8ml培養(yǎng)基,培養(yǎng)過夜)。第二天換液并檢查細胞密度。
2) 細胞傳代:如果細胞密度達80%-90%,即可進行傳代培養(yǎng)。
注意事項:
(1)凍存前細胞狀態(tài),細胞最好在對數(shù)生長期,細胞密度適合,剛剛發(fā)生細胞融合,過密或連成片的細胞狀態(tài)不好,而且消化時不容易分散;
(2)凍存的密度不宜過低,10的6次方-7次方的數(shù)量級比較好,我凍存的細胞一般T25培養(yǎng)瓶(5*107),一瓶凍一管(1.5ml凍存管),10cm培養(yǎng)皿(大概10的8次方個細胞)分成兩管。
(3)消化和吹打,切忌胰酶消化過度,吹打不可太用力,最好不要吹出好多泡泡。消化后立即加入*培養(yǎng)基吹打哦,不是加入凍存液再吹打。
(4)離心后加入凍存液。凍存液中FBS的用量對于腫瘤細胞株而言要求不是很嚴格,我從10%-90%都用過,問題不大,個人認為10%-20%可以了,能節(jié)約處就節(jié)約點嘛!另外,凍存液可以在處理細胞前配置,放在4度冰箱預冷。細胞離心后直接用預冷的凍存液重懸,移入凍存管。
(5)關于“慢凍",傳統(tǒng)的方法,LLC細胞凍存管用棉花包好,4度2h,-20度2h或更長,-80度過夜,最后液氮。對于條件較好的實驗室和細胞凍存數(shù)量多的實驗室,推薦使用程序降溫盒,內裝異丙醇,在-80度并內可以逐漸降溫,很方便,省了包棉花、4度、-20度了。
使用步驟:
一)準確稱量試劑:根據(jù)不同的菌類和用途,選擇適宜的培養(yǎng)基,培養(yǎng)基所需試劑必須純凈。
(二)校正pH值:將稱量好的培養(yǎng)基各種成分放入容器內,標記劃線,加熱溶解,補充水分,測定酸堿度,常用pH6.8~8.0的精密試紙或酸度計測定。用1N NaOH和1N HCl調節(jié)pH值到適宜范圍內。
(三)過濾:將玻璃漏斗置鐵架上,再用人子宮成纖維細胞*培養(yǎng)基紗布夾棉花或用濾紙放在漏斗中,將上述培養(yǎng)基倒入其中過濾至透明。
(四)分裝:將過濾后的培養(yǎng)基分裝于中試管或三角瓶內(試管內每支裝5mL;三角瓶中裝100~150ml),塞好棉塞用牛皮紙包扎好,準備滅菌。
(五)滅菌:培養(yǎng)基的滅菌,常用高壓蒸汽滅菌法。一般微生物的營養(yǎng)細胞在水中煮沸后即被殺死,但細菌的芽胞有較強的抗熱性,須經(jīng)高壓蒸汽滅菌才能達到*滅菌的目的。根據(jù)蒸汽溫度隨壓力升高而上升的原理,即壓力越大,蒸汽溫度就越高。因此,在同一溫度條件下,采用高壓蒸汽滅菌比干熱滅菌法效果要好。而且在濕熱情況下,菌體吸收水分后,其蛋白質易于凝固變性,因為蒸汽的穿透力強,殺菌效果好。
細胞特性:
1)】組織來源于實驗動物的正常眼組織。
2)細胞鑒定:細胞免疫熒光染色為陽性。
3)經(jīng)鑒定細胞純度高于90%。
4)不含有 HIV-1、 HBV、HCV、支原體、細菌、酵母和真菌。
5)細胞生長方式:上皮樣,不規(guī)則細胞,貼壁培養(yǎng)。
Wnt1/FITC 熒光素標記信號通路Wnt1抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格: 0.2ml
Glu-Glu Tag peptide Glu-Glu Tag多肽蛋白Multi-class antibodies規(guī)格: 0.5mg
AP2關聯(lián)激酶1抗體 AAK1 0.1ml
p150 CAF1 英文名稱: 染色質組裝因子1P155抗體 0.2ml
phospho-Ephexin-1 (Tyr179) 英文名稱: 磷酸化神經(jīng)細胞鳥苷酸置換因子Ephexin1抗體 0.1ml
Rhesus antibody Rh Phospho-FoxO3a (Ser318/321) 磷酸化叉頭蛋白3A抗體 規(guī)格 0.1ml
Glu-Glu Tag peptide Glu-Glu Tag多肽蛋白Multi-class antibodies規(guī)格: 0.5mg
P53 人P53蛋白Multi-class antibodies規(guī)格: 48T
Cullin/C10orf46 CULLIN抗體Multi-class antibodies規(guī)格: 0.2ml
Rhesus antibody Rh NIK/MAPKKK14 NFkB誘導激酶抗體 規(guī)格 0.1ml
Human cyclophilin A,CyPA ELISA Kit 人嗜環(huán)蛋白/親環(huán)素A 96T
TNFAIP5 英文名稱: 壞死因子α誘導蛋白5 0.1ml
Claudin 17 英文名稱: 緊密連接蛋白17抗體 0.1ml
Cullin/C10orf46 CULLIN抗體Multi-class antibodies規(guī)格: 0.2ml
NTR3 英文名稱: 神經(jīng)降壓素受體3抗體(糖蛋白95) 0.2ml
FAAH1 英文名稱: 脂肪酸酰胺水解酶1抗體 0.2ml
粘附分子整合素α5抗體 ITG-α5/CD49e 0.2ml
PTPRJ/CD148/DEP1/FITC 熒光素標記CD148抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格: 0.2ml
Rhesus antibody Rh Phospho-PPIG (Ser376) 磷酸化親環(huán)蛋白(親環(huán)素)PPIG抗體 規(guī)格 0.2ml
Recomb Protein A 重組蛋白AMulti-class antibodies規(guī)格: 1mg
神經(jīng)母細胞瘤細胞;SH-SY5Y膠原蛋白(I型)麥冬皂苷B植物總淀粉生物酶比色法定量檢測試劑盒
維替泊芬麥冬皂苷D
Biotin HPDP;N-(6-[生物素]己基)-3'-(2'-吡啶二硫)酰芒柄花素-7-O-β-D-葡萄糖苷通用型總淀粉化學比色法定量檢測試劑盒
膠原蛋白(BR)芒柄花素-7-O-葡萄糖苷 食物總淀粉化學比色法定量檢測試劑盒
右雷佐生;右亞莽草酸植物總淀粉化學比色法定量檢測試劑盒
A 83-01;A83-01毛蕊花糖苷/類葉升麻苷/麥角甾苷酒類尿素比色法定量檢測試劑盒
Amresco 進分瓊脂粉毛蕊異黃酮飲料尿素比色法定量檢測試劑盒
氟伏沙明毛蕊異黃酮-7-O-β-D葡萄糖苷乳制品尿素比色法定量檢測試劑盒