細(xì)胞特性:
1)】組織來源于實驗動物的正常眼組織。
2)細(xì)胞鑒定:細(xì)胞免疫熒光染色為陽性。
3)經(jīng)鑒定細(xì)胞純度高于90%。
4)不含有 HIV-1、 HBV、HCV、支原體、細(xì)菌、酵母和真菌。
5)細(xì)胞生長方式:上皮樣,不規(guī)則細(xì)胞,貼壁培養(yǎng)。
產(chǎn)品名稱:大鼠視網(wǎng)膜微血管內(nèi)皮細(xì)胞*培養(yǎng)基
規(guī)格:100mL/125mL×4
貨號:YS-02X10223
細(xì)胞生長實驗 :細(xì)胞生長良好,形態(tài)正常
儲存條件:2℃-8℃,避光儲存
運輸條件:冰袋冷藏運輸
公司產(chǎn)品僅用于科研
細(xì)胞培養(yǎng)步驟
一.培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備:
1) 準(zhǔn)備RPMI-1640 培養(yǎng)基;優(yōu)質(zhì)胎牛血清,10%;Glutamax(invitrogen 35050061),1%;Sodium pyruvate(invitrogen 11360070),1%;雙抗,1%。
2) 培養(yǎng)條件: 氣相:空氣,95%;二氧化碳,5%。 溫度:37攝氏度,培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3) 凍存液:90%血清,10%DMSO,現(xiàn)用現(xiàn)配。
二. 細(xì)胞處理:
1) 復(fù)蘇細(xì)胞:將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍,加入4mL培養(yǎng)基混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,補加1-2mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜(或?qū)⒓?xì)胞懸液加入250px皿中,加入約8ml培養(yǎng)基,培養(yǎng)過夜)。第二天換液并檢查細(xì)胞密度。
2) 細(xì)胞傳代:如果細(xì)胞密度達80%-90%,即可進行傳代培養(yǎng)。
注意事項:
(1)凍存前細(xì)胞狀態(tài),細(xì)胞最好在對數(shù)生長期,細(xì)胞密度適合,剛剛發(fā)生細(xì)胞融合,過密或連成片的細(xì)胞狀態(tài)不好,而且消化時不容易分散;
(2)凍存的密度不宜過低,10的6次方-7次方的數(shù)量級比較好,我凍存的細(xì)胞一般T25培養(yǎng)瓶(5*107),一瓶凍一管(1.5ml凍存管),10cm培養(yǎng)皿(大概10的8次方個細(xì)胞)分成兩管。
(3)消化和吹打,切忌胰酶消化過度,吹打不可太用力,最好不要吹出好多泡泡。消化后立即加入*培養(yǎng)基吹打哦,不是加入凍存液再吹打。
(4)離心后加入凍存液。凍存液中FBS的用量對于細(xì)胞而言要求不是很嚴(yán)格,我從10%-90%都用過,問題不大,個人認(rèn)為10%-20%可以了,能節(jié)約處就節(jié)約點嘛!另外,凍存液可以在處理細(xì)胞前配置,放在4度冰箱預(yù)冷。細(xì)胞離心后直接用預(yù)冷的凍存液重懸,移入凍存管。
(5)關(guān)于“慢凍",傳統(tǒng)的方法,細(xì)胞凍存管用棉花包好,4度2h,-20度2h或更長,-80度過夜,最后液氮。對于條件較好的實驗室和細(xì)胞凍存數(shù)量多的實驗室,推薦使用程序降溫盒,內(nèi)裝異丙醇,在-80度并內(nèi)可以逐漸降溫,很方便,省了包棉花、4度、-20度了。
使用步驟:
一)準(zhǔn)確稱量試劑:根據(jù)不同的菌類和用途,選擇適宜的培養(yǎng)基,培養(yǎng)基所需試劑必須純凈。
(二)校正pH值:將稱量好的培養(yǎng)基各種成分放入容器內(nèi),標(biāo)記劃線,加熱溶解,補充水分,測定酸堿度,常用pH6.8~8.0的精密試紙或酸度計測定。用1N NaOH和1N HCl調(diào)節(jié)pH值到適宜范圍內(nèi)。
(三)過濾:將玻璃漏斗置鐵架上,再用紗布夾棉花或用濾紙放在漏斗中,將上述培養(yǎng)基倒入其中過濾至透明。
(四)分裝:將過濾后的培養(yǎng)基分裝于中試管或三角瓶內(nèi)(試管內(nèi)每支裝5mL;三角瓶中裝100~150ml),塞好棉塞用牛皮紙包扎好,準(zhǔn)備滅菌。
(五)滅菌:培養(yǎng)基的滅菌,常用高壓蒸汽滅菌法。一般微生物的營養(yǎng)細(xì)胞在水中煮沸后即被殺死,但細(xì)菌的芽胞有較強的抗熱性,須經(jīng)高壓蒸汽滅菌才能達到*滅菌的目的。根據(jù)蒸汽溫度隨壓力升高而上升的原理,即壓力越大,蒸汽溫度就越高。因此,在同一溫度條件下,采用高壓蒸汽滅菌比干熱滅菌法效果要好。而且在濕熱情況下,菌體吸收水分后,其蛋白質(zhì)易于凝固變性,因為蒸汽的穿透力強,殺菌效果好。
Ephrin B (phospho Tyr331) /FITC 熒光素標(biāo)記兔抗人、大、小鼠磷酸化Ephrin B抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格: 0.2ml
VEGFR2(VEGF-R2)Flk1/FITC 熒光素標(biāo)記血管內(nèi)皮生長因子受體2抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格: 0.2ml
膜粘連蛋白-A抗體 Annexin A 0.2ml
Mouse human IgG/PE-Cy3 PE-Cy3標(biāo)記的小鼠抗人IgG 0.1ml
GALNT10 英文名稱: 多肽N-乙酰基半乳糖轉(zhuǎn)移酶10抗體 0.2ml
Rhesus antibody Rh PRMT6 組蛋白精甲基轉(zhuǎn)移酶6抗體 規(guī)格 0.1ml
VEGFR2(VEGF-R2)Flk1/FITC 熒光素標(biāo)記血管內(nèi)皮生長因子受體2抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格: 0.2ml
PF/PFP(Human Perforin/Pore-forming protein) ELISA Kit 人穿孔素/成孔蛋白Multi-class antibodies規(guī)格: 48T
GABABR2/GB2 G氨基丁酸B型受體2抗體Multi-class antibodies規(guī)格: 0.2ml
Rhesus antibody Rh Mouse human IgG/Cy5.5 Cy5.5標(biāo)記的小鼠抗人IgG 規(guī)格 0.1ml
sTREM-1(Human soluble Triggering Receptor Expresses on Myeloid Cells-1) ELISA Kit 人可溶性髓系細(xì)胞觸發(fā)受體-1 96T
SCG3 英文名稱: 分泌粒蛋白3抗體 0.1ml
CHRDL1 英文名稱: 脊索生成素樣蛋白1抗體 0.2ml
GABABR2/GB2 G氨基丁酸B型受體2抗體Multi-class antibodies規(guī)格: 0.2ml
Mouse Goat IgG/Cy3 Cy3標(biāo)記的小鼠抗羊IgG 0.1ml
phospho-GFAP (Ser8) 英文名稱: 磷酸化膠質(zhì)纖維酸性蛋白抗體 0.1ml
脂聯(lián)素受體-1抗體 Adipo R1 0.1ml
MYOG/Myogenin/FITC 熒光素標(biāo)記肌紅蛋白抗體(肌細(xì)胞生成素)IgGMulti-class antibodies規(guī)格: 0.2ml
Rhesus antibody Rh Protein C inhibitor/SerpinA5 蛋白C抑制因子抗體 規(guī)格 0.1ml
VASH1/FITC 熒光素標(biāo)記兔抗血管抑制蛋白1抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格: 0.2ml
大鼠視網(wǎng)膜微血管內(nèi)皮細(xì)胞*培養(yǎng)基磷脂酶D2(Phospholipase D2)活性比色法定量檢測試劑盒20次鼠抗人促甲狀腺素單克隆抗體流式組化
細(xì)胞磷脂酶D2(Phospholipase D2)活性熒光定量檢測試劑盒20次鹽酸-L-白氨酰-2-萘
組織磷脂酶D2(Phospholipase D2)活性熒光定量檢測試劑盒20次BOC-L-天冬酰
純化微粒體磷脂酶D2(Phospholipase D2)活性熒光定量檢測試劑盒20次嘌呤核苷磷酸化酶
/酵母磷脂酶D2(Phospholipase D2)活性熒光定量檢測試劑盒20次鏈親和素
植物磷脂酶D2(Phospholipase D2)活性熒光定量檢測試劑盒20次5-肌苷三磷酸二鈉鹽
磷脂酶D2(Phospholipase D2)活性熒光定量檢測試劑盒20次生根粉
細(xì)胞輔脂酶(COLIPASE)活性比色法定量檢測試劑盒20次D-(-)水楊苷
組織輔脂酶(COLIPASE)活性比色法定量檢測試劑盒20次天青II
細(xì)胞溶酶體脂酶(酸性脂酶)活性比色法定量檢測試劑盒20次氯化鎘
組織溶酶體脂酶(酸性脂酶)活性比色法定量檢測試劑盒20次氯化鉍
細(xì)胞胰腺脂酶活性比色法定量檢測試劑盒20次9-芴酮
組織胰腺脂酶活性比色法定量檢測試劑盒20次
細(xì)胞肝脂酶活性比色法定量檢測試劑盒20次獐牙菜苦苷
組織肝脂酶活性比色法定量檢測試劑盒20次何首烏