肝母細(xì)胞瘤細(xì)胞;HuH-6公司正在銷售的產(chǎn)品：磷酸化熱休克蛋白β5/α晶狀體球蛋白B/αB-crystallin抗體Anti-Phospho-PDGF Receptor alpha(Tyr849)/PDGF Receptor beta (Tyr857) 磷酸化血小板源性生長因子受體α/β抗體
磷酸化α晶狀體球蛋白B/αB-crystallin抗體Anti-PDGF Receptor beta/P

細(xì)胞特性：

1)】組織來源于實驗動物的正常眼組織。

2)細(xì)胞鑒定：細(xì)胞免疫熒光染色為陽性。

3)經(jīng)鑒定細(xì)胞純度高于90%。

4)不含有 HIV-1、 HBV、HCV、支原體、細(xì)菌、酵母和真菌。

5)細(xì)胞生長方式：上皮樣，不規(guī)則細(xì)胞，貼壁培養(yǎng)。
產(chǎn)品名稱：肝母細(xì)胞瘤細(xì)胞;HuH-6

規(guī)格：1×10?cells/T25培養(yǎng)瓶
貨號：YS-02X9628

細(xì)胞生長實驗 ：細(xì)胞生長良好，形態(tài)正常

儲存條件：2℃-8℃，避光儲存

運輸條件：冰袋冷藏運輸
公司產(chǎn)品僅用于科研

 

細(xì)胞培養(yǎng)步驟

一．培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備：

1） 準(zhǔn)備RPMI-1640 培養(yǎng)基；優(yōu)質(zhì)胎牛血清，10%；Glutamax（invitrogen 35050061），1%；Sodium pyruvate（invitrogen 11360070），1%；雙抗，1%。

2） 培養(yǎng)條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37攝氏度，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。

3） 凍存液：90%血清，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配。

二． 細(xì)胞處理：

1） 復(fù)蘇細(xì)胞：將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍，加入4mL培養(yǎng)基混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補加1-2mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜（或?qū)⒓?xì)胞懸液加入250px皿中，加入約8ml培養(yǎng)基，培養(yǎng)過夜）。第二天換液并檢查細(xì)胞密度。

2） 細(xì)胞傳代：如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%，即可進行傳代培養(yǎng)。

注意事項：

（1）凍存前細(xì)胞狀態(tài)，細(xì)胞最好在對數(shù)生長期，細(xì)胞密度適合，剛剛發(fā)生細(xì)胞融合，過密或連成片的細(xì)胞狀態(tài)不好，而且消化時不容易分散；

（2）凍存的密度不宜過低，10的6次方-7次方的數(shù)量級比較好，我凍存的細(xì)胞一般T25培養(yǎng)瓶（5*107），一瓶凍一管（1.5ml凍存管），10cm培養(yǎng)皿（大概10的8次方個細(xì)胞）分成兩管。

（3）消化和吹打，切忌胰酶消化過度，吹打不可太用力，最好不要吹出好多泡泡。消化后立即加入*培養(yǎng)基吹打哦，不是加入凍存液再吹打。

（4）離心后加入凍存液。凍存液中FBS的用量對于腫瘤細(xì)胞株而言要求不是很嚴(yán)格，我從10%-90%都用過，問題不大，個人認(rèn)為10%-20%可以了，能節(jié)約處就節(jié)約點嘛！另外，凍存液可以在處理細(xì)胞前配置，放在4度冰箱預(yù)冷。細(xì)胞離心后直接用預(yù)冷的凍存液重懸，移入凍存管。

（5）關(guān)于“慢凍"，傳統(tǒng)的方法，LLC細(xì)胞凍存管用棉花包好，4度2h，-20度2h或更長，-80度過夜，最后液氮。對于條件較好的實驗室和細(xì)胞凍存數(shù)量多的實驗室，推薦使用程序降溫盒，內(nèi)裝異丙醇，在-80度并內(nèi)可以逐漸降溫，很方便，省了包棉花、4度、-20度了。

使用步驟：

一）準(zhǔn)確稱量試劑：根據(jù)不同的菌類和用途，選擇適宜的培養(yǎng)基，培養(yǎng)基所需試劑必須純凈。

（二）校正pH值：將稱量好的培養(yǎng)基各種成分放入容器內(nèi)，標(biāo)記劃線，加熱溶解，補充水分，測定酸堿度，常用pH6.8～8.0的精密試紙或酸度計測定。用1N NaOH和1N HCl調(diào)節(jié)pH值到適宜范圍內(nèi)。

（三）過濾：將玻璃漏斗置鐵架上，再用人子宮成纖維細(xì)胞*培養(yǎng)基紗布夾棉花或用濾紙放在漏斗中，將上述培養(yǎng)基倒入其中過濾至透明。

（四）分裝：將過濾后的培養(yǎng)基分裝于中試管或三角瓶內(nèi)（試管內(nèi)每支裝5mL；三角瓶中裝100～150ml），塞好棉塞用牛皮紙包扎好，準(zhǔn)備滅菌。

（五）滅菌：培養(yǎng)基的滅菌，常用高壓蒸汽滅菌法。一般微生物的營養(yǎng)細(xì)胞在水中煮沸后即被殺死，但細(xì)菌的芽胞有較強的抗熱性，須經(jīng)高壓蒸汽滅菌才能達(dá)到*滅菌的目的。根據(jù)蒸汽溫度隨壓力升高而上升的原理，即壓力越大，蒸汽溫度就越高。因此，在同一溫度條件下，采用高壓蒸汽滅菌比干熱滅菌法效果要好。而且在濕熱情況下，菌體吸收水分后，其蛋白質(zhì)易于凝固變性，因為蒸汽的穿透力強，殺菌效果好。

Phospho-Syk (Tyr323) /FITC 熒光素標(biāo)記磷酸化非受體型酪氨酸蛋白激酶抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格： 0.2ml

H5N1-M2(Avian influenza Matrix Protein-2) H5N1流感病毒M2型(抗原)Multi-class antibodies規(guī)格： 0.5mg

蛋白激酶N2抗體  PKN2 0.1ml

Phospho-Smad2(Ser465 + Ser467) 英文名稱： 磷酸化細(xì)胞信號轉(zhuǎn)導(dǎo)分子SMAD2抗體 0.1ml

phospho-eIF4EBP1 (Thr36) 英文名稱： 磷酸化4E結(jié)合蛋白1抗體 0.1ml

Rhesus antibody Rh Phospho-MLK3(Thr277/Ser281) 磷酸化絲氨酸/蘇氨酸蛋白激酶MLK3抗體 規(guī)格 0.1ml

H5N1-M2(Avian influenza Matrix Protein-2) H5N1流感病毒M2型(抗原)Multi-class antibodies規(guī)格： 0.5mg

adiponectin(humen) 人脂聯(lián)素Multi-class antibodies規(guī)格： 48T

 CK20 細(xì)胞角蛋白20抗體Multi-class antibodies規(guī)格： 0.2ml

Rhesus antibody Rh NRP1/CD304 神經(jīng)纖毛蛋白1抗體 規(guī)格 0.1ml

processing solution 顯影液試劑 200ml

TRF2 英文名稱： 端粒結(jié)合蛋白2抗體 0.1ml

C7orf10 英文名稱： 7號染色體開放閱讀框10抗體 0.2ml

 CK20 細(xì)胞角蛋白20抗體Multi-class antibodies規(guī)格： 0.2ml

Phospho-5-Lipoxygenase(Ser663) 英文名稱： 磷酸化5-脂氧合酶抗體 0.1ml

eIF2 alpha 英文名稱： 真核啟動因子2α抗體(eIFα2) 0.2ml

核受體輔助抑制因子抗體  N-coR1 0.2ml

 Phospho-SGK1 (Thr256)/FITC 熒光素標(biāo)記磷酸化糖皮質(zhì)調(diào)節(jié)激酶1抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格： 0.2ml

Rhesus antibody Rh phospho-PAK1+PAK2+PAK3 (Ser141) 磷酸化p21激活激酶1/2/3抗體 規(guī)格 0.1ml

ALK (Anaplastic Lymphoma Kinase)(CD246Ag) 間變型瘤激酶(抗原)Multi-class antibodies規(guī)格： 0.5mg
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