小鼠正常肝細(xì)胞;NCTC 1469公司正在銷售的產(chǎn)品：巨噬炎性蛋白抗體Anti-BRCA2/FITC 熒光素標(biāo)記癌易感基因2抗體IgG
CD72蛋白抗體Anti-BrdU/FITC(Bromodeoxyuridine) 熒光素標(biāo)記兔抗溴脫氧尿苷抗體IgG
中心體蛋白128抗體Anti-BrdU/FITC 熒光素標(biāo)記溴脫氧尿苷抗體IgG
著絲粒蛋白O抗體Anti-SMARCA4/SNF2 be

產(chǎn)品名稱：小鼠正常肝細(xì)胞;NCTC 1469

規(guī)格：1×10?cells/T25培養(yǎng)瓶
貨號(hào)：YS-02X9913

細(xì)胞生長(zhǎng)實(shí)驗(yàn) ：細(xì)胞生長(zhǎng)良好，形態(tài)正常

儲(chǔ)存條件：2℃-8℃，避光儲(chǔ)存

運(yùn)輸條件：冰袋冷藏運(yùn)輸
公司產(chǎn)品僅用于科研

細(xì)胞特性：

1)】組織來(lái)源于實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的正常眼組織。

2)細(xì)胞鑒定：細(xì)胞免疫熒光染色為陽(yáng)性。

3)經(jīng)鑒定細(xì)胞純度高于90%。

4)不含有 HIV-1、 HBV、HCV、支原體、細(xì)菌、酵母和真菌。

5)細(xì)胞生長(zhǎng)方式：上皮樣，不規(guī)則細(xì)胞，貼壁培養(yǎng)。

 

細(xì)胞培養(yǎng)步驟

一．培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備：

1） 準(zhǔn)備RPMI-1640 培養(yǎng)基；優(yōu)質(zhì)胎牛血清，10%；Glutamax（invitrogen 35050061），1%；Sodium pyruvate（invitrogen 11360070），1%；雙抗，1%。

2） 培養(yǎng)條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37攝氏度，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。

3） 凍存液：90%血清，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配。

二． 細(xì)胞處理：

1） 復(fù)蘇細(xì)胞：將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍，加入4mL培養(yǎng)基混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過(guò)夜（或?qū)⒓?xì)胞懸液加入250px皿中，加入約8ml培養(yǎng)基，培養(yǎng)過(guò)夜）。第二天換液并檢查細(xì)胞密度。

2） 細(xì)胞傳代：如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。

注意事項(xiàng)：

（1）凍存前細(xì)胞狀態(tài)，細(xì)胞最好在對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期，細(xì)胞密度適合，剛剛發(fā)生細(xì)胞融合，過(guò)密或連成片的細(xì)胞狀態(tài)不好，而且消化時(shí)不容易分散；

（2）凍存的密度不宜過(guò)低，10的6次方-7次方的數(shù)量級(jí)比較好，我凍存的細(xì)胞一般T25培養(yǎng)瓶（5*107），一瓶?jī)鲆还埽?.5ml凍存管），10cm培養(yǎng)皿（大概10的8次方個(gè)細(xì)胞）分成兩管。

（3）消化和吹打，切忌胰酶消化過(guò)度，吹打不可太用力，最好不要吹出好多泡泡。消化后立即加入*培養(yǎng)基吹打哦，不是加入凍存液再吹打。

（4）離心后加入凍存液。凍存液中FBS的用量對(duì)于腫瘤細(xì)胞株而言要求不是很嚴(yán)格，我從10%-90%都用過(guò)，問(wèn)題不大，個(gè)人認(rèn)為10%-20%可以了，能節(jié)約處就節(jié)約點(diǎn)嘛！另外，凍存液可以在處理細(xì)胞前配置，放在4度冰箱預(yù)冷。細(xì)胞離心后直接用預(yù)冷的凍存液重懸，移入凍存管。

（5）關(guān)于“慢凍"，傳統(tǒng)的方法，LLC細(xì)胞凍存管用棉花包好，4度2h，-20度2h或更長(zhǎng)，-80度過(guò)夜，最后液氮。對(duì)于條件較好的實(shí)驗(yàn)室和細(xì)胞凍存數(shù)量多的實(shí)驗(yàn)室，推薦使用程序降溫盒，內(nèi)裝異丙醇，在-80度并內(nèi)可以逐漸降溫，很方便，省了包棉花、4度、-20度了。

sVEGFR2/sFLK-1/FITC 熒光素標(biāo)記可溶性血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子受體2抗體(人)IgGMulti-class antibodies規(guī)格： 0.2ml

CDK8(Cyclin Dependent Kinase 8) 周期素依賴性激酶8抗原Multi-class antibodies規(guī)格： 0.5mg

CD49(非常晚期抗原)抗體  CD49/VLA 0.1ml

Phospho-SRC-3 (Thr24) 英文名稱： 磷酸化類固醇受體輔助活化因子-3 0.1ml

EPHA10 英文名稱： 酪酸蛋白激酶受體A10抗體 0.1ml

Rhesus antibody Rh phospho-GIT1(Tyr554) 磷酸化G蛋白偶聯(lián)受體激酶相互作用蛋白1 規(guī)格 0.1ml

CDK8(Cyclin Dependent Kinase 8) 周期素依賴性激酶8抗原Multi-class antibodies規(guī)格： 0.5mg

IL-21 人白介素-21Multi-class antibodies規(guī)格： 48T

 ChRM2 毒蕈堿型乙酰膽堿受體抗體Multi-class antibodies規(guī)格： 0.2ml

Rhesus antibody Rh Nucleolar protein 3/Apoptosis repressor with CARD 核仁蛋白3抗體 規(guī)格 0.2ml

RNA plant 植物RNA提取的專用試劑 50ml

TBX18 英文名稱： 轉(zhuǎn)錄因子Tbx18抗體 0.2ml

COL4A3BP 英文名稱： IV型膠原α3結(jié)合蛋白抗體 0.2ml

 ChRM2 毒蕈堿型乙酰膽堿受體抗體Multi-class antibodies規(guī)格： 0.2ml

Rabbit  Guinea pig IgM/PE-Cy7 PE-Cy7標(biāo)記的兔抗豚鼠IgM 0.1ml

phospho-FAK(Ser732) 英文名稱： 磷酸化粘著斑激酶抗體 0.1ml

上皮特異性抗原抗體  ESA 0.1ml

 PEPT2 /FITC 熒光素標(biāo)記腸道肽轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白2/小肽轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白2抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格： 0.2ml

Rhesus antibody Rh phospho-Tau protein(Ser202) 磷酸化微管相關(guān)蛋白抗體 規(guī)格 0.1ml

Goat  mouse IgM/Gold 金標(biāo)記羊抗小鼠IgM(10nm/15nm)Multi-class antibodies規(guī)格： 0.5ml
小鼠正常肝細(xì)胞;NCTC 1469石蠟切片銅熒光（CSI）染色試劑盒20次葡聚糖T20

凍切片銅熒光（CSI）染色試劑盒20次硝酸纖維素薄膜

線粒體銅離子熒光（CTAP-1）染色試劑盒20次人抗人類缺陷病抗體（HIV）ELISA試劑盒, HIV ELISA

高爾基體銅離子熒光（CTAP-1）染色試劑盒20次人羥賴（Hyl）ELISA試劑盒,Hyl ELISA

銅離子膜通道轉(zhuǎn)運(yùn)功能（P型ATP酶）綠色熒光檢測(cè)試劑盒20次人骨粘連蛋白（ON）ELISA試劑盒,ON ELISA

銅離子膜通道轉(zhuǎn)運(yùn)功能（CTR）綠色熒光檢測(cè)試劑盒20次人組（HIS）ELISA試劑盒,HIS ELISA

銅蛋白電泳染色試劑盒10次人β內(nèi)酰酶（β-lactamase）ELISA試劑盒,

動(dòng)物細(xì)胞銅ATP酶（Cu＋＋ －ATPase）活性比色法量檢測(cè)試劑盒20次人組織相容性2-K1-K 區(qū)（H2-K1）ELISA試劑盒,

動(dòng)物組織銅ATP酶（Cu＋＋ －ATPase）活性比色法量檢測(cè)試劑盒20次人纖維母表面抗原（FSP）ELISA試劑盒,

銅ATP酶（Cu＋＋ －ATPase）活性比色法量檢測(cè)試劑盒20次人性休克綜合征素1（TSST-1）ELISA試劑盒,

酵母銅ATP酶（Cu＋＋ －ATPase）活性比色法量檢測(cè)試劑盒20次人高速泳動(dòng)蛋白17（HMG-17）ELISA試劑盒,

植物銅ATP酶（Cu＋＋ －ATPase）活性比色法量檢測(cè)試劑盒20次小鼠N-乙?；?絲氨酰-天門冬酰-賴氨酰-脯（AcSDKP）ELISA試劑盒,

線粒體分裂（fission）和融合（fusion）分析試劑專題大鼠卵清蛋白特異性IgE（OVA sIgE）ELISA試劑盒,

DRP-1蛋白表達(dá)檢測(cè)試劑盒10/20次大鼠生長(zhǎng)素釋放多肽（GHRP）ELISA試劑盒,

OPA-1蛋白表達(dá)檢測(cè)試劑盒10/20次大鼠促性腺素釋放素（GnRH）ELISA試劑盒,

使用步驟：

一）準(zhǔn)確稱量試劑：根據(jù)不同的菌類和用途，選擇適宜的培養(yǎng)基，培養(yǎng)基所需試劑必須純凈。

（二）校正pH值：將稱量好的培養(yǎng)基各種成分放入容器內(nèi)，標(biāo)記劃線，加熱溶解，補(bǔ)充水分，測(cè)定酸堿度，常用pH6.8～8.0的精密試紙或酸度計(jì)測(cè)定。用1N NaOH和1N HCl調(diào)節(jié)pH值到適宜范圍內(nèi)。

（三）過(guò)濾：將玻璃漏斗置鐵架上，再用人子宮成纖維細(xì)胞*培養(yǎng)基紗布夾棉花或用濾紙放在漏斗中，將上述培養(yǎng)基倒入其中過(guò)濾至透明。

（四）分裝：將過(guò)濾后的培養(yǎng)基分裝于中試管或三角瓶?jī)?nèi)（試管內(nèi)每支裝5mL；三角瓶中裝100～150ml），塞好棉塞用牛皮紙包扎好，準(zhǔn)備滅菌。

（五）滅菌：培養(yǎng)基的滅菌，常用高壓蒸汽滅菌法。一般微生物的營(yíng)養(yǎng)細(xì)胞在水中煮沸后即被殺死，但細(xì)菌的芽胞有較強(qiáng)的抗熱性，須經(jīng)高壓蒸汽滅菌才能達(dá)到*滅菌的目的。根據(jù)蒸汽溫度隨壓力升高而上升的原理，即壓力越大，蒸汽溫度就越高。因此，在同一溫度條件下，采用高壓蒸汽滅菌比干熱滅菌法效果要好。而且在濕熱情況下，菌體吸收水分后，其蛋白質(zhì)易于凝固變性，因?yàn)檎羝拇┩噶?qiáng)，殺菌效果好。