詳細(xì)介紹
產(chǎn)品名稱:舌鱗癌細(xì)胞;CAL-27
規(guī)格:1×10?cells/T25培養(yǎng)瓶
貨號:YS-02X9773
細(xì)胞生長實(shí)驗(yàn) :細(xì)胞生長良好,形態(tài)正常
儲存條件:2℃-8℃,避光儲存
運(yùn)輸條件:冰袋冷藏運(yùn)輸
公司產(chǎn)品僅用于科研
細(xì)胞培養(yǎng)步驟
一.培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備:
1) 準(zhǔn)備RPMI-1640 培養(yǎng)基;優(yōu)質(zhì)胎牛血清,10%;Glutamax(invitrogen 35050061),1%;Sodium pyruvate(invitrogen 11360070),1%;雙抗,1%。
2) 培養(yǎng)條件: 氣相:空氣,95%;二氧化碳,5%。 溫度:37攝氏度,培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3) 凍存液:90%血清,10%DMSO,現(xiàn)用現(xiàn)配。
二. 細(xì)胞處理:
1) 復(fù)蘇細(xì)胞:將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍,加入4mL培養(yǎng)基混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜(或?qū)⒓?xì)胞懸液加入250px皿中,加入約8ml培養(yǎng)基,培養(yǎng)過夜)。第二天換液并檢查細(xì)胞密度。
2) 細(xì)胞傳代:如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%,即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。
注意事項(xiàng):
(1)凍存前細(xì)胞狀態(tài),細(xì)胞最好在對數(shù)生長期,細(xì)胞密度適合,剛剛發(fā)生細(xì)胞融合,過密或連成片的細(xì)胞狀態(tài)不好,而且消化時不容易分散;
(2)凍存的密度不宜過低,10的6次方-7次方的數(shù)量級比較好,我凍存的細(xì)胞一般T25培養(yǎng)瓶(5*107),一瓶凍一管(1.5ml凍存管),10cm培養(yǎng)皿(大概10的8次方個細(xì)胞)分成兩管。
(3)消化和吹打,切忌胰酶消化過度,吹打不可太用力,最好不要吹出好多泡泡。消化后立即加入*培養(yǎng)基吹打哦,不是加入凍存液再吹打。
(4)離心后加入凍存液。凍存液中FBS的用量對于腫瘤細(xì)胞株而言要求不是很嚴(yán)格,我從10%-90%都用過,問題不大,個人認(rèn)為10%-20%可以了,能節(jié)約處就節(jié)約點(diǎn)嘛!另外,凍存液可以在處理細(xì)胞前配置,放在4度冰箱預(yù)冷。細(xì)胞離心后直接用預(yù)冷的凍存液重懸,移入凍存管。
(5)關(guān)于“慢凍",傳統(tǒng)的方法,LLC細(xì)胞凍存管用棉花包好,4度2h,-20度2h或更長,-80度過夜,最后液氮。對于條件較好的實(shí)驗(yàn)室和細(xì)胞凍存數(shù)量多的實(shí)驗(yàn)室,推薦使用程序降溫盒,內(nèi)裝異丙醇,在-80度并內(nèi)可以逐漸降溫,很方便,省了包棉花、4度、-20度了。
使用步驟:
一)準(zhǔn)確稱量試劑:根據(jù)不同的菌類和用途,選擇適宜的培養(yǎng)基,培養(yǎng)基所需試劑必須純凈。
(二)校正pH值:將稱量好的培養(yǎng)基各種成分放入容器內(nèi),標(biāo)記劃線,加熱溶解,補(bǔ)充水分,測定酸堿度,常用pH6.8~8.0的精密試紙或酸度計(jì)測定。用1N NaOH和1N HCl調(diào)節(jié)pH值到適宜范圍內(nèi)。
(三)過濾:將玻璃漏斗置鐵架上,再用人子宮成纖維細(xì)胞*培養(yǎng)基紗布夾棉花或用濾紙放在漏斗中,將上述培養(yǎng)基倒入其中過濾至透明。
(四)分裝:將過濾后的培養(yǎng)基分裝于中試管或三角瓶內(nèi)(試管內(nèi)每支裝5mL;三角瓶中裝100~150ml),塞好棉塞用牛皮紙包扎好,準(zhǔn)備滅菌。
(五)滅菌:培養(yǎng)基的滅菌,常用高壓蒸汽滅菌法。一般微生物的營養(yǎng)細(xì)胞在水中煮沸后即被殺死,但細(xì)菌的芽胞有較強(qiáng)的抗熱性,須經(jīng)高壓蒸汽滅菌才能達(dá)到*滅菌的目的。根據(jù)蒸汽溫度隨壓力升高而上升的原理,即壓力越大,蒸汽溫度就越高。因此,在同一溫度條件下,采用高壓蒸汽滅菌比干熱滅菌法效果要好。而且在濕熱情況下,菌體吸收水分后,其蛋白質(zhì)易于凝固變性,因?yàn)檎羝拇┩噶?qiáng),殺菌效果好。
細(xì)胞特性:
1)】組織來源于實(shí)驗(yàn)動物的正常眼組織。
2)細(xì)胞鑒定:細(xì)胞免疫熒光染色為陽性。
3)經(jīng)鑒定細(xì)胞純度高于90%。
4)不含有 HIV-1、 HBV、HCV、支原體、細(xì)菌、酵母和真菌。
5)細(xì)胞生長方式:上皮樣,不規(guī)則細(xì)胞,貼壁培養(yǎng)。
CEA/Biotin 生物素化鼠抗人癌胚抗原單克隆抗體(檢測)IgGMulti-class antibodies規(guī)格: 0.2ml
EAAT3(Excitatory amino acid transporters 3) 膠質(zhì)細(xì)胞谷運(yùn)載蛋白3抗原Multi-class antibodies規(guī)格: 0.5mg
磷酸化雄受體抗體 phospho-AR 0.1ml
ZDHHC17 英文名稱: NFκB激活蛋白205抗體 0.1ml
DIS3L2 英文名稱: 有絲分裂控制蛋白樣DIS3L2抗體 0.2ml
Rhesus antibody Rh phospho-EIF4G1(Ser1238) 磷酸化真核翻譯起始因子4G抗體 規(guī)格 0.1ml
EAAT3(Excitatory amino acid transporters 3) 膠質(zhì)細(xì)胞谷運(yùn)載蛋白3抗原Multi-class antibodies規(guī)格: 0.5mg
IL-16 人白介素-16Multi-class antibodies規(guī)格: 48T
Gentamicin Monoclonal Antibody 慶大霉素單克隆抗體Multi-class antibodies規(guī)格: 0.2ml
Rhesus antibody Rh Nucleoprotein/NP A型流感病毒核蛋白抗體 規(guī)格 0.2ml
Ponceau S 麗春紅S 5g
TIP30 英文名稱: TIP30蛋白抗體 0.2ml
CYP4A22 英文名稱: 細(xì)胞色素P4504A22抗體(脂肪酸Ω羥化酶) 0.2ml
Gentamicin Monoclonal Antibody 慶大霉素單克隆抗體Multi-class antibodies規(guī)格: 0.2ml
Rabbit human IgG 兔抗人IgG 1mg
fowl typhoid and pullorum disease 英文名稱: 雞白痢、雞傷寒抗體 0.2ml
細(xì)胞凋亡ASPP家族的另一個成員抗體 IASPP 0.1ml
Polycystin 1/FITC 熒光素標(biāo)記多囊腎蛋白1抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格: 0.2ml
Rhesus antibody Rh Phospho-Raptor (Ser792) 磷酸化mTOR相關(guān)調(diào)控蛋白抗體 規(guī)格 0.1ml
Goat Chicken Whole serum 羊抗雞IgG抗血清Multi-class antibodies規(guī)格: 1ml
舌鱗癌細(xì)胞;CAL-27鹽酸哌侖西平甲基蓮心堿通用型痢疾志賀菌Shigella dysenteriae基因檢測試劑盒
醋酸磺米隆假荊芥屬苷通用型鮑氏志賀菌Shigella boydii基因檢測試劑盒
替佐米中間體I姜黃素通用型小腸結(jié)腸炎耶爾森氏菌(Yersinia enterocolitica)基因檢測試劑盒
保特佐米蒎烷二酯芥子堿硫酸鹽通用型沙門氏菌(Salmonellae)基因檢測試劑盒
甲磺司特金石蠶苷通用型鼠傷寒沙門菌Salmonella typhimurium基因檢測試劑盒
烯基-α-D-吡喃半乳糖苷金絲桃苷通用型空腸彎曲菌(Campylobacter jejuni)基因檢測試劑盒
松脂素;松脂酚,松脂(標(biāo)準(zhǔn)品)金絲桃素通用型大腸彎曲桿菌(Campylobacter coli)基因檢測試劑盒
并三氮唑鈉鹽(BTA-S)京尼平苷/梔子苷通用型海鳥彎曲桿菌(Campylobacter laridis)基因檢測試劑盒