詳細介紹
細胞特性:
1)】組織來源于實驗動物的正常眼組織。
2)細胞鑒定:細胞免疫熒光染色為陽性。
3)經(jīng)鑒定細胞純度高于90%。
4)不含有 HIV-1、 HBV、HCV、支原體、細菌、酵母和真菌。
5)細胞生長方式:上皮樣,不規(guī)則細胞,貼壁培養(yǎng)。
產(chǎn)品名稱:肺動脈成纖維細胞*培養(yǎng)基
規(guī)格:100mL/125mL×4
貨號:YS-02X9979
細胞生長實驗 :細胞生長良好,形態(tài)正常
儲存條件:2℃-8℃,避光儲存
運輸條件:冰袋冷藏運輸
公司產(chǎn)品僅用于科研
細胞培養(yǎng)步驟
一.培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準備:
1) 準備RPMI-1640 培養(yǎng)基;優(yōu)質(zhì)胎牛血清,10%;Glutamax(invitrogen 35050061),1%;Sodium pyruvate(invitrogen 11360070),1%;雙抗,1%。
2) 培養(yǎng)條件: 氣相:空氣,95%;二氧化碳,5%。 溫度:37攝氏度,培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3) 凍存液:90%血清,10%DMSO,現(xiàn)用現(xiàn)配。
二. 細胞處理:
1) 復蘇細胞:將含有1mL細胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍,加入4mL培養(yǎng)基混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,補加1-2mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜(或?qū)⒓毎麘乙杭尤?50px皿中,加入約8ml培養(yǎng)基,培養(yǎng)過夜)。第二天換液并檢查細胞密度。
2) 細胞傳代:如果細胞密度達80%-90%,即可進行傳代培養(yǎng)。
注意事項:
(1)凍存前細胞狀態(tài),細胞最好在對數(shù)生長期,細胞密度適合,剛剛發(fā)生細胞融合,過密或連成片的細胞狀態(tài)不好,而且消化時不容易分散;
(2)凍存的密度不宜過低,10的6次方-7次方的數(shù)量級比較好,我凍存的細胞一般T25培養(yǎng)瓶(5*107),一瓶凍一管(1.5ml凍存管),10cm培養(yǎng)皿(大概10的8次方個細胞)分成兩管。
(3)消化和吹打,切忌胰酶消化過度,吹打不可太用力,最好不要吹出好多泡泡。消化后立即加入*培養(yǎng)基吹打哦,不是加入凍存液再吹打。
(4)離心后加入凍存液。凍存液中FBS的用量對于腫瘤細胞株而言要求不是很嚴格,我從10%-90%都用過,問題不大,個人認為10%-20%可以了,能節(jié)約處就節(jié)約點嘛!另外,凍存液可以在處理細胞前配置,放在4度冰箱預冷。細胞離心后直接用預冷的凍存液重懸,移入凍存管。
(5)關于“慢凍",傳統(tǒng)的方法,LLC細胞凍存管用棉花包好,4度2h,-20度2h或更長,-80度過夜,最后液氮。對于條件較好的實驗室和細胞凍存數(shù)量多的實驗室,推薦使用程序降溫盒,內(nèi)裝異丙醇,在-80度并內(nèi)可以逐漸降溫,很方便,省了包棉花、4度、-20度了。
使用步驟:
一)準確稱量試劑:根據(jù)不同的菌類和用途,選擇適宜的培養(yǎng)基,培養(yǎng)基所需試劑必須純凈。
(二)校正pH值:將稱量好的培養(yǎng)基各種成分放入容器內(nèi),標記劃線,加熱溶解,補充水分,測定酸堿度,常用pH6.8~8.0的精密試紙或酸度計測定。用1N NaOH和1N HCl調(diào)節(jié)pH值到適宜范圍內(nèi)。
(三)過濾:將玻璃漏斗置鐵架上,再用人子宮成纖維細胞*培養(yǎng)基紗布夾棉花或用濾紙放在漏斗中,將上述培養(yǎng)基倒入其中過濾至透明。
(四)分裝:將過濾后的培養(yǎng)基分裝于中試管或三角瓶內(nèi)(試管內(nèi)每支裝5mL;三角瓶中裝100~150ml),塞好棉塞用牛皮紙包扎好,準備滅菌。
(五)滅菌:培養(yǎng)基的滅菌,常用高壓蒸汽滅菌法。一般微生物的營養(yǎng)細胞在水中煮沸后即被殺死,但細菌的芽胞有較強的抗熱性,須經(jīng)高壓蒸汽滅菌才能達到*滅菌的目的。根據(jù)蒸汽溫度隨壓力升高而上升的原理,即壓力越大,蒸汽溫度就越高。因此,在同一溫度條件下,采用高壓蒸汽滅菌比干熱滅菌法效果要好。而且在濕熱情況下,菌體吸收水分后,其蛋白質(zhì)易于凝固變性,因為蒸汽的穿透力強,殺菌效果好。
Beta-Actin/HRP 辣根過氧化物酶標記β-肌動蛋白(抗體)Multi-class antibodies規(guī)格: 0.2ml
Cav-1/ETM1 peptide 細胞質(zhì)膜微囊蛋白-1抗原Multi-class antibodies規(guī)格: 0.5mg
新的抑癌基因Brg1抗體 Brg1 0.1ml
mSin3A 英文名稱: 同源轉(zhuǎn)錄調(diào)節(jié)蛋白Sin3A抗體 0.2ml
EPOR 英文名稱: 紅細胞生成素受體抗體 0.1ml
Rhesus antibody Rh phospho-IFNAR1(Ser535+Ser539) 磷酸化干擾素α受體抗體 規(guī)格 0.1ml
Cav-1/ETM1 peptide 細胞質(zhì)膜微囊蛋白-1抗原Multi-class antibodies規(guī)格: 0.5mg
兔細胞因子試劑盒 兔細胞因子試劑盒Multi-class antibodies規(guī)格:
Phospho-FLT3 (Tyr969) 磷酸化FMS樣酪激酶3Multi-class antibodies規(guī)格: 0.1ml
Rhesus antibody Rh Mouse rabbit IgG/Gold 膠體金標記的小鼠抗兔IgG 規(guī)格 0.5ml
MTX(Human methotrexate) ELISA Kit 人甲胺喋呤 96T
Syndecan 3 英文名稱: Syndecan 3蛋白抗體 0.1ml
CEACAM21 英文名稱: 癌胚抗原相關細胞粘附分子21抗體 0.2ml
Phospho-FLT3 (Tyr969) 磷酸化FMS樣酪激酶3Multi-class antibodies規(guī)格: 0.1ml
Rabbit Monkey IgM/PE-CY5 PE-CY5標記的兔抗猴IgM 0.1ml
FBXO31 英文名稱: F-box蛋白家族FBXO31抗體 0.2ml
周期素C抗體 Cyclin C 0.1ml
PADI4/PAD4 /FITC 熒光素標記關節(jié)炎相關基因抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格: 0.2ml
Rhesus antibody Rh phospho-VAV3(Tyr173) 磷酸化鳥嘌呤核苷酸交換因子VAV3抗體 規(guī)格 0.1ml
Rabbit rat IgM/Biotin 生物素化兔抗大鼠IgMMulti-class antibodies規(guī)格: 0.1ml
肺動脈成纖維細胞*培養(yǎng)基脘蛋白基因變異分析試劑盒20次人抗Ku抗體(anti-Ku-Ab)ELISA試劑盒, anti-Ku-Ab ELISA kit
活體細胞脘蛋白去糖基化試劑盒20次人抗肌動蛋白抗體(AAA)ELISA試劑盒,AAA ELISA
體外脘蛋白去糖基化試劑盒20次人非甲基化寡核苷酸(NON)ELISA試劑盒, 人非甲基化寡核苷酸(NON)ELISA試劑盒,
體外脘蛋白轉(zhuǎn)化(in vitro conversion)分析試劑盒50次人補體片斷4b(C4b)ELISA試劑盒,
脘蛋白糖基化定性分析試劑盒5次小鼠E選擇素(E-Selectin/CD62E)ELISA試劑盒,
脘蛋白糖基化分型(glycoform)試劑盒5次小鼠CXC趨化因子配體16(CXCL16)ELISA試劑盒,
細胞脘蛋白(PRION)蛋白表達流式細胞儀檢測試劑盒10/20次大鼠窖蛋白Caveolin1(Cav-1)ELISA試劑盒,
載玻片細胞脘蛋白(PRION)蛋白表達熒光顯微鏡檢測試劑盒10/20次魚促卵泡素
凍切片組織脘蛋白(PRION)蛋白表達熒光10/20次白色(C.albicans)ELISA試劑盒--動物,人
顯微鏡檢測試劑盒去氧膽酸鹽枸椽酸鹽乳糖蔗糖瓊脂
石蠟切片組織脘蛋白(PRION)蛋白表達熒光10/20次L-天冬酰一水
顯微鏡檢測試劑盒L-纈甲酯鹽酸鹽
載玻片細胞β脘蛋白(PRION)蛋白表達NBT10/20次FMOC-L-天冬
顯色光學顯微鏡檢測試劑盒龍膽苦苷 Gentiopicroside
凍切片組織脘蛋白(PRION)蛋白表達NBT10/20次馬脾鐵蛋白