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密度梯度離心實(shí)驗(yàn)
閱讀:908 發(fā)布時(shí)間:2017-4-6提 供 商 | 上海研生實(shí)業(yè)有限公司 | 資料大小 | 212.2KB |
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用一定的介質(zhì)在離心管內(nèi)形成一連續(xù)或不連續(xù)的密度梯度,將細(xì)胞混懸液或勻漿置于介質(zhì)的頂部,通過重力或離心力場的作用使細(xì)胞分層、分離。
這類分離又可分為速度沉降和等密度沉降平衡兩種。
A等速度沉降,B等密度沉降
速度沉降(velocity sedimentation)主要用于分離密度相近而大小不等的細(xì)胞或細(xì)胞器。這種沉降方法所采用的介質(zhì)密度較低,介質(zhì)的zui大密度應(yīng)小于被分離生物顆粒的zui小密度。生物顆粒(細(xì)胞或細(xì)胞器)在十分平緩的密度梯度介質(zhì)中按各自的沉降系數(shù)以不同的速度沉降而達(dá)到分離。
等密度沉降(isopycnic sedimentation)適用于分離密度不等的顆粒。細(xì)胞或細(xì)胞器在連續(xù)梯度的介質(zhì)中經(jīng)足夠大離心力和足夠長時(shí)間則沉降或漂浮到與自身密度相等的介質(zhì)處,并停留在那里達(dá)到平衡,從而將不同密度的細(xì)胞或細(xì)胞器分離。介質(zhì)的zui高密度應(yīng)大于被分離組分的zui大密度,而且介質(zhì)的梯度要求較高的陡度,不能太平緩。這種方法適于分離細(xì)胞器,而不太適于分離和純化細(xì)胞。