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培養(yǎng)細(xì)胞增殖過(guò)程注意事項(xiàng)
體內(nèi)細(xì)胞生長(zhǎng)在動(dòng)態(tài)平衡環(huán)境中，而組織培養(yǎng)細(xì)胞的生存環(huán)境是培養(yǎng)瓶、皿或其它容器，生存空間和營(yíng)養(yǎng)是有限的。當(dāng)細(xì)胞增殖達(dá)到一定密度后，則需要分離出一部分細(xì)胞和更新?tīng)I(yíng)養(yǎng)液，否則將影響細(xì)胞的繼續(xù)生存，這一過(guò)程叫傳代。每次傳代以后，細(xì)胞的生長(zhǎng)和增殖過(guò)程都會(huì)受一定的影響。另外，很多細(xì)胞特別是正常細(xì)胞，在體外的生存也不是無(wú)限的，存在著一個(gè)發(fā)展過(guò)程。所有這一切，使組織細(xì)胞在培養(yǎng)中有著一系列與體內(nèi)不同的生存特點(diǎn)。

根據(jù)培養(yǎng)過(guò)程中是否需要分割培養(yǎng)物進(jìn)行再培養(yǎng)而將細(xì)胞培養(yǎng)分為原代培養(yǎng)和傳代培養(yǎng)。  

一、原代培養(yǎng)  （一）過(guò)程  原代培養(yǎng)的基本過(guò)程包括取材、培養(yǎng)材料的制備、接種及培養(yǎng)等步驟。原代培養(yǎng)的方法很多，基本和zui常用的是組織塊培養(yǎng)法和分離細(xì)胞法。 1、組織塊培養(yǎng)法 (1)基本操作過(guò)程  1）、用培養(yǎng)液濕潤(rùn)所取組織材料，并用鋒利的眼科剪將附在其上的脂肪和結(jié)締組織去除干凈。再用平衡液（PBS）或Hanks液漂洗；用鋒利的眼科彎剪將組織塊剪成小塊；再用PBS或Hanks液漂洗多次，直至液體不渾濁、無(wú)油滴、清亮為止。  2）、用濕潤(rùn)的吸管吸取切碎的組織塊，清清吹到培養(yǎng)瓶皿中，并將其按一定間距均勻放在培養(yǎng)瓶底壁上，量不要過(guò)多，要將組織塊切面貼在培養(yǎng)瓶底壁上；  3）、將培養(yǎng)瓶翻轉(zhuǎn)，使瓶底朝上，在種植了組織塊一側(cè)的對(duì)側(cè)面加足培養(yǎng)液，勿使組織塊與培養(yǎng)液接觸，塞緊瓶塞；  4）、將種植了組織塊的一側(cè)朝上，靜置于37℃培養(yǎng)箱中；待組織塊貼壁1h到3h后翻瓶，使貼壁的組織塊浸沒(méi)與培養(yǎng)液中，靜置；  5）、每隔2到3天更換一次培養(yǎng)液，或者根據(jù)培養(yǎng)瓶種顏色的變化確定換液時(shí)間。 2、注意事項(xiàng)  1）、組織塊接種后的前3天，從組織塊向外遷徙的細(xì)胞數(shù)很少，組織塊的黏附不牢固，在觀察和移動(dòng)的過(guò)程中，注意不要引起液體的振蕩。要避免經(jīng)常翻動(dòng)和振動(dòng)，否則組織塊不易附著于瓶壁上或附著后也會(huì)脫落飄起。  2）、加入的培養(yǎng)液不宜過(guò)多，避免浸泡的組織塊受輕微的波動(dòng)而脫落下來(lái)。  3）、用組織塊培養(yǎng)時(shí)，要及時(shí)觀察，當(dāng)細(xì)胞向外遷徙出來(lái)后要注意記錄并去除漂浮的組織塊和殘留的細(xì)胞，因?yàn)橐哑〉慕M織塊和那些細(xì)胞碎片已經(jīng)死亡，它們產(chǎn)生的有毒物質(zhì)會(huì)影響原代細(xì)胞的生長(zhǎng)，要及時(shí)清除。