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人D二聚體ELISA檢測(cè)試劑盒操作步驟:

1. 標(biāo)準(zhǔn)品的稀釋與加樣：在酶標(biāo)包被板上設(shè)標(biāo)準(zhǔn)品孔10孔，在di一、第二孔中分別加標(biāo)準(zhǔn)品100μl，然后在di一、第二孔中加標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液50μl，混勻；然后從di一孔、第二孔中各取100μl分別加到第三孔和第四孔，再在第三、第四孔分別加標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液50μl，混勻；然后在第三孔和第四孔中先各取50μl棄掉，再各取50μl分別加到第五、第六孔中，再在第五、第六孔中分別加標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液50ul，混勻；混勻后從第五、第六孔中各取50μl分別加到第七、第八孔中，再在第七、第八孔中分別加標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液50μl，混勻后從第七、第八孔中分別取50μl加到第九、第十孔中，再在第九第十孔分別加標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液50μl，混勻后從第九第十孔中各取50μl棄掉。（稀釋后各孔加樣量都為50μl，濃度分別為180 ng/L，120 ng/L ，60 ng/L，30 ng/，15 ng/L）。

2. 加樣：分別設(shè)空白孔（空白對(duì)照孔不加樣品及酶標(biāo)試劑，其余各步操作相同）、待測(cè)樣品孔。在酶標(biāo)包被板上待測(cè)樣品孔中先加樣品稀釋液40μl，然后再加待測(cè)樣品10μl（樣品最終稀釋度為5倍）。加樣將樣品加于酶標(biāo)板孔底部，盡量不觸及孔壁，輕輕晃動(dòng)混勻。

3. 溫育：用封板膜封板后置37℃溫育30分鐘。

4. 配液：將30（48T的20倍）倍濃縮洗滌液用蒸餾水30（48T的20倍）倍稀釋后備用。

5. 洗滌：小心揭掉封板膜，棄去液體，甩干，每孔加滿洗滌液，靜置30秒后棄去，如此重復(fù)5次，拍干。

6. 加酶：每孔加入酶標(biāo)試劑50μl，空白孔除外。

7. 溫育：操作同3。

8. 洗滌：操作同5。

9. 顯色：每孔先加入顯色劑A50μl，再加入顯色劑B50μl，輕輕震蕩混勻，37℃避光顯色15分鐘.

10. 終止：每孔加終止液50μl，終止反應(yīng)（此時(shí)藍(lán)色立轉(zhuǎn)黃色）。

11. 測(cè)定：以空白空調(diào)零，450nm波長(zhǎng)依序測(cè)量各孔的吸光度（OD值）。 測(cè)定應(yīng)在加終止液后15分鐘。

大鼠肝細(xì)胞；IAR20

大鼠氣管上皮細(xì)胞；RTE

大鼠肝細(xì)胞瘤；H-4-II-E

大鼠肝細(xì)胞瘤；H4-II-E-C3

大鼠骨骼肌成肌細(xì)胞；L6

正常大鼠腎細(xì)胞；NRK

大鼠嗜堿性粒細(xì)胞性白血病細(xì)胞；RBL-1

大鼠胚胎心肌細(xì)胞；H9c2(2-1)

大鼠骨髓瘤細(xì)胞；IR983F

Walker氏癌肉瘤256瘤株；W256

大鼠腎小球系膜細(xì)胞；HBZY-1

大鼠胰島細(xì)胞瘤細(xì)胞；INS-1

大鼠胰島β細(xì)胞瘤細(xì)胞；RIN-m5F

正常大鼠腎細(xì)胞；NRK

正常大鼠腎細(xì)胞（EGF受體陽(yáng)性）；NRK49F

大鼠腎系膜細(xì)胞；RMC

大鼠腦膠質(zhì)瘤細(xì)胞；C6

大鼠肝細(xì)胞；BRL

正常大鼠腎細(xì)胞；NRK

大鼠肝細(xì)胞；BRL 3A

大鼠骨骼肌成肌細(xì)胞；L6

大鼠胚胎心肌細(xì)胞；H9c2(2-1)

大鼠雪旺細(xì)胞；RSC96

大鼠胸大動(dòng)脈平滑肌細(xì)胞；A7r5

正常大鼠腎細(xì)胞；NRK-52E

大鼠肺泡巨噬細(xì)胞；NR8383[AgC11x3A; NR8383.1]

大鼠肝細(xì)胞；BRL 3A

大鼠腦膠質(zhì)瘤細(xì)胞；C6

大鼠肝癌細(xì)胞；CBRH-7919 [CBRH7919]

大鼠腎上腺嗜鉻細(xì)胞瘤細(xì)胞；PC-12 [PC12]

大鼠肝癌細(xì)胞；RH-35

大鼠乳腺癌細(xì)胞；SHZ-88

大鼠胰腺外分泌腺腫瘤細(xì)胞；AR42J

大鼠嗜堿性粒細(xì)胞性白血病細(xì)胞；RBL-2H3

大鼠腎上腺嗜鉻細(xì)胞瘤細(xì)胞(低分化)；PC-12(低分化)

大鼠腎上腺嗜鉻細(xì)胞瘤細(xì)胞(高分化)；PC-12(高分化)

大鼠骨髓瘤細(xì)胞；Y3-Ag 1.2.3