化工儀器網
技術文章
腫瘤細胞如何進行傳代？
閱讀：578 發(fā)布時間：2018-5-17腫瘤細胞是科研實驗中常用到的細胞，當人臍靜脈內皮細胞達到90%融合時，需要對細胞進行傳代培養(yǎng)。
首先培養(yǎng)瓶的準備：用纖維粘連蛋白（BPF，貨號#8248）包被培養(yǎng)瓶，包被濃度為2ug/cm2，包被時間為4度過夜或37度一小時。
將培養(yǎng)基（ECM，貨號#1001）、胰酶/EDTA消化液（T/S，貨號#0103）、胰酶中和液（TNS，貨號#0113）和無鈣鎂離子的磷酸鹽緩沖液（DPBS，貨號#0303），溫度回復至室溫，我們不推薦用37°C水浴加熱試劑和培養(yǎng)基。
棄去原培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)基，用10mlDPBS沖洗人臍靜脈內皮細胞，然后加入2ml胰酶消化液。輕輕搖晃培養(yǎng)瓶以至胰酶消化液覆蓋所有人臍靜脈內皮細胞。注意：使用ScienCell實驗室的胰酶/EDTA消化液，會把胰酶消化對臍靜脈內皮細胞的損害減少到zui低。
將培養(yǎng)瓶放入37度培養(yǎng)箱中1-2分鐘，在孵化后期，輕輕拍打培養(yǎng)瓶以使臍靜脈內皮細胞脫離瓶壁。顯微鏡下觀察臍靜脈內皮細胞形態(tài)變化，直至80%臍靜脈內皮細胞變圓。然后立即加入10ml胰酶中和液并輕輕搖動培養(yǎng)瓶。
收集人臍靜脈內皮細胞并將其轉入50ml離心管中。再加入10ml培養(yǎng)基沖洗培養(yǎng)瓶以確保收集所有的殘余臍靜脈內皮細胞。在顯微鏡下觀察培養(yǎng)瓶中剩余臍靜脈內皮細胞的數量以確定是否將臍靜脈內皮細胞大部分收集，剩余臍靜脈內皮細胞數應小于5%。
以1000轉/分（1000rpm)離心收取的臍靜脈內皮細胞5分鐘，棄去上清，在新加的培養(yǎng)基中重懸臍靜脈內皮細胞。
對腫瘤細胞計數，然后將它們接種到新的纖維粘連蛋白包被過的培養(yǎng)瓶中，37度培養(yǎng)即可。
CBP/CREBBP 血小板源性生長因子受體-B抗體
Cbx8 血小板源性生長因子受體-A抗體
CC16 血小板源性生長因子-B抗體
CCK8 血小板源性生長因子-BB抗體
CCL1/TCA3/I-309 血小板源性生長因子-A抗體
CCL11/Eotaxin 1 血小板因子4抗體
CCL12/MCP5 血小板糖蛋白GPIb抗體
CCL13/MCP-4 血小板內皮細胞黏附分子-1抗體
CCL14/HCC-1 血小板內皮細胞黏附分子-1抗體
CCL15/MIP5 血小板膜糖蛋白ⅡbⅢa抗體
腫瘤細胞