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技術(shù)文章

原代細胞因子中全血的標本處理方法

閱讀:588          發(fā)布時間:2018-5-15

原代細胞因子中全血的標本處理方法分析:我們針對全血:使用肝素鈉抗凝的真空采血管采血,不易采用肝素鋰、EDTA和ACD抗凝劑,血樣在8小時內(nèi)分析,超過8小時會導致活性的損失,一般細胞因子陽性細胞會減少5%。如不能在8小時之內(nèi)檢測,應(yīng)將真空采血管水平室溫放置。

      自身血漿中外周血單個核細胞(PBMCs):使用肝素鈉抗凝的采血后,分離PBMCs,24小時內(nèi)分析。

       組織培養(yǎng)基中的外周血單個核細胞(PBMCs):用Ficoll分離PBMCs,將細胞重懸于含10%熱滅活胎牛血清(FBS)的RPMI-1640培養(yǎng)基中,調(diào)節(jié)細胞濃度為2×106細胞/ml。調(diào)節(jié)細胞濃度2×106細胞/mL于新鮮培養(yǎng)基中。

       冰凍全血與PBMCs:使用1×紅細胞裂解液處理活化的外周血或者PBMCs,用PBS漂洗,并用含1%的BSA及10%的DMSO的PBS重懸,-70℃凍存。溶化后原代細胞置于染色管中,加上2~3mL的洗液,離心5分鐘后,用破膜劑對細胞進行破膜和染色。

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