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技術文章

原代細胞實驗室檢測方法

閱讀:645          發(fā)布時間:2018-4-26

原代細胞實驗室檢測
(一)包涵體的檢測。 
1. 血片及白細胞涂片制備
采集的抗凝血標本盡快用血球層推血片,待干燥后冷丙酮固定10min;或提取抗凝血中的白細胞并進行涂片,待干燥后冷丙酮固定10min。
2. 染色
通常采用瑞氏(Wright)染色法、姬氏(Giemsa)染色法及瑞-姬混合染色法。有條件的實驗室,可使用美國CDC推薦的染色方法。
3. 染液配置方法
(1)瑞-姬染液:取瑞氏染料和姬氏染料各0.5 g,以甲醇研溶,加甲醇500ml保存,每天搖勻1次,1周后可使用。
(2)改良Mc Donald法瑞-姬染色劑:75 ml甘油(分析純)中加入磷酸鹽緩沖液(Na2HPO4 1g和KH2PO4 2g),以4 ml蒸餾水溶解,37 ℃水浴24 h溶解混勻,用濾紙過濾,保存于密封的棕色瓶中備用。上述甘油緩沖液1.5 ml加瑞-姬染色劑50 ml,混勻后備用。
4. 染色步驟
血推片或白細胞涂片分別以兩種染色劑染色2 min,再加蒸餾水作用5 min,用自來水沖洗。
5. 結果觀察
中性粒細胞中可見桑葚狀包涵體(見圖1),并注意保存相關標本,以便進行復核。
(二)血清學檢測。
常用血清學方法為間接免疫熒光(IFA)法。采集急性期(發(fā)熱初期,一般發(fā)病1周內)與恢復期(至少間隔2-3周)雙份血清。如恢復期血清抗體檢測陰性,應建議醫(yī)生采集第3份血液樣本(間隔2-4周)。
1. 試劑 
使用推薦的、經過ISO質量認證的產品。
2. 方法及操作按說明書進行。
3. 結果解釋
IFA檢測結果解釋按說明書進行。
如果同時檢測雙份血清,IgG抗體4倍升高,則結果強烈支持原代細胞無形體感染。如果急性期抗體升高,而恢復期沒有升高或輕微升高,則應采集第3份血液樣本(間隔2-4周)進行進一步檢測。 

 促甲狀腺素釋放激素IgG 小鼠IgM 

 促甲狀腺素受體(C端)IgG 小鼠IgG 

 促甲狀腺素受體(N端)IgG 小鼠GATA結合蛋白4(GATA4)

 促甲狀腺素受體IgG 小鼠FMS樣酪氨酸激酶3配體(Flt3L)

 促甲狀腺素受體IgG 小鼠FMS樣酪氨酸激酶3(Flt3) 

 促進凋亡基因IgG 小鼠E選擇素(E-Selectin/CD62E) 

 促卵泡刺激素IgG 小鼠E鈣粘著蛋白/上皮性鈣黏附蛋白(E-Cad)

 促卵泡刺激素受體IgG 小鼠D-乳酸脫氫酶(D-LDH) 

 促尿鈉排泄肽前體CIgG 小鼠C肽(C-Peptide) 

 促腎上腺皮質激素(7-23)IgG 小鼠CXC趨化因子受體3(CXCR3)
原代細胞

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